TH6725A3 - " กรรมวิธีการเตรียมโปรตีนยึดจับกับสารชีวโมเลกุลชนิดไฮยาลูโรแนนที่ติดฉลากด้วยไบโอตินและการนำไปประยุกต์ใช้ " - Google Patents
" กรรมวิธีการเตรียมโปรตีนยึดจับกับสารชีวโมเลกุลชนิดไฮยาลูโรแนนที่ติดฉลากด้วยไบโอตินและการนำไปประยุกต์ใช้ "Info
- Publication number
- TH6725A3 TH6725A3 TH503001218U TH0503001218U TH6725A3 TH 6725 A3 TH6725 A3 TH 6725A3 TH 503001218 U TH503001218 U TH 503001218U TH 0503001218 U TH0503001218 U TH 0503001218U TH 6725 A3 TH6725 A3 TH 6725A3
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- hyaluronan
- mola
- concentration
- biotin
- protein
- Prior art date
Links
Abstract
การประดิษฐ์นี้เกี่ยวกับกรรมวิธีการเตรียมโปรตีนยึดจับสารชีวโมเลกุลชนิดไฮยาลูโรแนนที่ติด ฉลากด้วยไบโอติน และการนำไปประยุกต์ใช้ โดยมีวิธีการเตรียมจากกกระดูกอ่อนของวัว ด้วยการสกัด ด้วยเกลือกัวนิดีนไฮโดรคลอไรด์ (guanidine hydrochloride) เพื่อให้ได้โปรตีโอกลัยแคน (proteoglycans) จากนั้นนำไปทำการย่อยด้วยเอ็นไซม์ชนิด trypsin และทำให้บริสุทธ์โดยวิธีเอสเอ-แอฟ ฟินิตี้โครมาโตรกราฟี่ (HA-affinity chromatography) ซึ่งจะทำให้ได้ HABPs ติดฉลากด้วยสารสำคัญ เช่น ไบโอติน โดยที่ยังคงคุณสมบัติทางชีวภาพอยู่ได้หลังจากการนำมาไดอะไลซิสกับสารละลายด่าง แล้วนำมาพัฒนาเพื่อเป็นส่วนสำคัญของชุดตรวจสอบวัดปริมาณระดับของ สารชีวโมเลกุลที่มีไฮยาลู โรแนน ซึ่งสามารถใช้ให้เกิดประโยชน์เพื่อการตรวจหาระดับของสารชีวโมเลกุลนี้มีปริมาณมากกว่าปกติ เช่น โรคข้ออักเสบ และโรคมะเร็ง บางชนิด และยังสามารถใช้เพื่อการติดตามความรุนแรงของโรค ศึกษา การกระจายตัว แบลสามารถใช้เป็นเครื่องมือเพื่อศึกษาการเสื่อมสลายของกระดูกอ่อนในหลอดทดลอง หรือในสภาวะที่มีสารหรือยาที่มีผลต่อการเสื่อมสลายของกระดูกอ่อนได้
Claims (4)
1. กรรมวิธีการเตรียมโปรตีนยึดจับสารชีวโมเลกุลชนิดไฮยาลูโรแนนที่ติดฉลากด้วยไบโอตินมี ขั้นตอน ดังนี้ 1.1 นำกระดูกอ่อนที่ล้างสะอาดแล้วด้วยสารละลายไตรตอนเอ็กซ์-100 ที่ความเข้มข้น 1% ใน น้ำเกลือมาบดละเอียด 1.2 ทำการสกัดโดยใช้สารละลายเกลือกัวนิดีนไฮโดรคลอไรด์ ที่ความเข้มข้นประมาณ 4 โมล่า 1.3 นำสารละลายเนื้อเยื่อที่สกัดได้ไปไดอะไลซิส ในน้ำกลั่นที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ข้ามคืน 1.4 ทำเป็นผงแห้งจะได้ผงสกัดกระดูดอ่อน 1.5 นำผงสกัดกระดูกอ่อนที่ได้มาละลายในสารละลายโซเดียมอะซีเตรตที่ความเข้มข้นประมาณ 0.1โมล่า และ ทริส-เอชซีแอล ที่ความเข้มข้นประมาณ 0.1 โมล่า ที่ค่าพีเอช ประมาณ 7.3 1.6 ย่อยโปรตีนด้วยเอ็นไซม์ทริปซิน ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 2 ชั่วโมง 1.7 หยุดปฏิกิริยาด้วยตัวยับยั้งทริปซิน 1.8 นำสารละลายที่ได้ไปไดอะไลซิสในน้ำกลั่นที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ข้ามคืน 1.9 ทำเป็นผงแห้งจะได้สารสกัดกระดูกอ่อนที่ย่อนด้วยทริปซิน 1.10 ละลายสกัดกระดูกอ่อนที่ย่อยด้วยทริปซินในเกลือกิวนิดีนไฮโดรคลอไรด์ที่ความ เข้มข้นประมาณ 4 โมล่า และ โซเดียมอะซีเตรตที่ความเข้มข้นประมาณ 0.5 โมล่า ที่ค่าพี เอส ประมาณ 5.8 1.11 นำสารละลายดังกล่าวมาผสมกับเม็ดเจล เอชเอ-เซฟฟาโรส 4B 1.12 ไดอะไลซิสในน้ำกลั่นที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ข้ามคืน 1.13 นำเจลที่แขวนลอยที่ได้มาบรรจุลงในคอลั่ม 1.14 ทำการชะสารชีวโมเลกุลที่ไม่ยึดจับต่าง ๆ ออกด้วยสารละลายเกลือแกงที่มีความเข้มข้น 1 โมล่า และ เพิ่มระดับความเข้มข้นของเกลือจาก 1 โมล่า ถึง 3 โมล่า 1.15 ทำการชะโปรตีนยึดจับไฮยาลูโรแนนที่ต้องการออกจากคอลั่มด้วยเกลือกัวนิดีนไฮโดร คอลไรด์ ที่ความเข้มข้นประมาณ 4 โมล่า 1.16 นำส่วนย่อยที่มีโปรตีนยึดจับไฮยาลูโรแนนอยู่มารวมกันแล้วนำไปไดอะไลซิสในน้ำกลั่น ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ข้ามคืน ก่อนนำมาทำเป็นผงแห้ง 1.17 ทำปฏิกิริยา biotinylation โดยนำเอาสารไบโอติน (N-hydroxyimidobiotin) ทำ ปฏิกิริยาในขณะที่โปรตีนยึดจับกับไฮยาลูโนแนนยังคงจับอยู่กับเม็ดเจล เอชเอ-เซฟฟาโรส 4B จากข้อ 1.11 แล้วทำการชะเอาสารชีวโมเลกุลที่ไม่ยึดจับออกโดยการเพิ่มความเข้มข้น ของเกลือทีละน้อย แล้วนำเม็ดเจลที่มีโปรตีนยึดจับไฮยาลูโรแนนติดอยู่ด้วยมาผสมกับ เอ็น- ซักซินิมิโดไบโอตินที่ละลายในดีเอ็มเอสโอ นำไปเขย่าให้เข้ากันค้างคืนที่อุณหภูมิห้อง แล้ว นำมาชะเอาโปรตีนยึดจับไฮยาลูโรแนนที่ติดด้วยไบโอตินออกด้วย เกลือกัวนิดีนไฮโดรคลอ ไรด์ ที่ความเข้มข้นประมาณ 4 โมล่า แล้วนำมาไดอะไลซิส กับ 0.05 โมล่า ทริส-เอสซีแอล พี เอช 8.6
2. กรรมวิธีการเตรียมโปรตีนยึดจับกับสารชีวโมเลกุลชนิดไฮยาลูโรแนนที่ติดฉลากด้วยไบโอติน ใน ข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งกระดูกอ่อนที่ใช้ในการสกัดโปรตีนยึดจับกับไฮยาลูโนแนน เลือกได้จาก ปลา ฉลาม หมู วัว หรือ ไก่
3. กรรมวิธีการเตรียมโปรตีนยึดจับกับสารชีวโมเลกุลชนิดไฮยาลูโรแนนที่ติดฉลากด้วยไบโอติน ใน ข้อถือสิทธิที่ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ ใช้สารไบโอติน ทำปฏิกิริยาในขณะที่โปรตีนยึดจับกับไฮยาลู โนแนนยังคงจับอยู่กับเม็ดเจล เอชเอ-เซฟฟาโรส 4B
4. การใช้โปรตีนยึดจับกับสารชีวโมเลกุลชนิดไฮยาลูโรแนน ที่ได้ตามข้อถือสิทธิที่ 1 โดยวิถีการทาง ภูมิคุ้มกันวิทยา หรือ อีไลซ่าเอสเซย์ หรือ โครมาโตกราฟฟิค สตริบ
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH6725A3 true TH6725A3 (th) | 2011-11-29 |
| TH6725C3 TH6725C3 (th) | 2011-11-29 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Erde et al. | Enhanced FASP (eFASP) to increase proteome coverage and sample recovery for quantitative proteomic experiments | |
| Zhao et al. | Proteins in load-bearing junctions: the histidine-rich metal-binding protein of mussel byssus | |
| Tuross et al. | Molecular preservation and crystallographic alterations in a weathering sequence of wildebeest bones | |
| Cleland et al. | Bone protein extraction without demineralization using principles from hydroxyapatite chromatography | |
| BR112014010161A2 (pt) | anticorpo monoclonal antiproteína de ligação ao dna tar de 43 kda (tdp-43) e seus método de preparação e uso no tratamento de proteinopatia tdp-43, bem como composições, polinucleotídeo, método in vitro e kit para diagnosticar proteinopatia tdp-43 | |
| EA201170635A1 (ru) | Композиции, способы получения и применение каркаса на основе домена фибронектина типа iii | |
| JPH0413359B2 (th) | ||
| ES2644283T3 (es) | Ensayo de fibrinógeno | |
| JP2013068594A (ja) | シアロ糖鎖をアミド化修飾する方法 | |
| BRPI0712273A8 (pt) | anticorpos isolados, polipeptídeos imunoglobulinas, anticorpo hepsina, molécula de ácido nucléico, célula hospedeira, linhagem celular, métodos para produzir o anticorpo, para diagnosticar a presença de hepsina, tratar uma doença, para monitorar a doença residual, para detectar o estado da doença, para diagnosticar uma disfunção, composição, arranjo ou chip de proteína e kit | |
| BRPI0406265B8 (pt) | método para análise por eletroforese capilar, método para pesquisa e tipagem de proteínas monoclonais, método de preparação de anticorpos modificados sobrecarregados negativamente e kit para detecção e tipagem de proteínas monoclonais | |
| TH6725A3 (th) | " กรรมวิธีการเตรียมโปรตีนยึดจับกับสารชีวโมเลกุลชนิดไฮยาลูโรแนนที่ติดฉลากด้วยไบโอตินและการนำไปประยุกต์ใช้ " | |
| TH6725C3 (th) | " กรรมวิธีการเตรียมโปรตีนยึดจับกับสารชีวโมเลกุลชนิดไฮยาลูโรแนนที่ติดฉลากด้วยไบโอตินและการนำไปประยุกต์ใช้ " | |
| CN107014993A (zh) | 一种检测动物源性食品中头孢类抗生素的间接竞争elisa试剂盒及其应用 | |
| JP2008531485A5 (th) | ||
| CN103033631B (zh) | 利用卵黄脂磷蛋白抗体定性检测鱼类卵黄原蛋白的试剂盒 | |
| CN102206269B (zh) | 邻苯二甲酸二庚酯完全抗原、制备方法及用途 | |
| BR0012765A (pt) | Peptìdeo, métodos de fabricar um anticorpo, de fabricar um agente de ligação capaz de ligar-se a uma forma celular de uma proteìna de prion, de remover uma forma celular de uma proteìna de prion de uma amostra, e de usar um anticorpo e/ou agente de ligação, anticorpo, agente de ligação, uso de um anticorpo ou agente de ligação, kit, e , sequência de peptìdeo de uma forma celular de uma proteìna de prion | |
| EP1769244A4 (en) | DETECTION OR MEASUREMENT OF ANTIGEN PROTEIN ANTIBODIES IN BIOLOGICAL TISSUE OR SAMPLES | |
| Skandalis et al. | Cartilage aggrecan undergoes significant compositional and structural alterations during laryngeal cancer | |
| JPH083486B2 (ja) | 体液中の基底膜コラーゲンの測定法及び基底膜コラーゲン―ドメインｎｃ１に対する抗体の検出法 | |
| CN103694309A (zh) | 一种提取和检测鱼类精子膜蛋白的方法 | |
| NO173336C (no) | Fremgangsm}te til isolering av basalmembranproteiner fra human- eller animalvev og anvendelse av det oppn}dde protein | |
| Xu et al. | Streptavidin bead pulldown assay to determine protein homooligomerization | |
| CN103512997A (zh) | 一种两维短梯度高效蛋白质组分离鉴定方法 |