Claims (8)
1.สารอัลคาไลเซลลูเลส K ที่บริสุทธิ์ ซึ่งมีคุณสมบัติทางเคมี และฟิสิกส์ดังต่อไปนี้ (1) การออกฤทธิ์ (1a) มีการออกฤทธิ์เป็นเอนไซม์ Cx ซึ่งสามารถออกฤทธิ์กับคาร์บอกซีเมธทิลเซลลูโลส (1b) การออกฤทธิ์เป็นเอนไซม์ C1 อย่างอ่อน และ (1c) การออกฤทธิ์เป็น เบตา-กลูโคสิเดสอย่างอ่อน (2) ความจำเพาะต่อสับสเตท สามารถออกฤทธิ์กับคาร์บอกซีเมทธิลเซลลูโลส (CMC) เซลลูโลสที่เป็นผลึก, เซลลูโลสที่เป็นผลึกขนาดเล็ก, เซลโลไบโอส, และพารา-ไนโตรเฟนนิลเซลโลไบโอไซด์ (PNPC) (3) pH ที่ทำงาน และ pH ที่ทำงานได้ดีที่สุด: มี pH ที่ทำงานได้ในช่วง 4 ถึง 12 (4) pH ที่มีความเสถียร: มีค่า pH ที่มีความเสถียรในช่วง 4.5 ถึง 10.5 และ 6.8 ถึง 10 เมื่อปล่อยให้อยู่ที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีและ 30 นาที ตามลำดับ (5) ช่วงอุณหภูมิที่ทำงาน และอุณหภูมิที่ทำงานได้ดีที่สุด : มีช่วงอุณหภูมิที่ทำงานได้ตั้งแต่ 10 ถึง 65 องศาเซลเซียส โดยอุณหภูมิที่ทำงานได้ดีที่สุดประมาณ 40 องศาเซลเซียส (6) อิทธิพลของสารคีเลท : มีการออกฤทธิ์ที่ไม่ถูกยับยั้งโดย เอทธิลลีนไดอามีนเตตราอาซีติคแอซิด(EDTA),เอทธิลลีนไกลคอล-บิส-(เบตา-อมิโนเอทธิลอีเธอร์)N,N,N',N"-เตตราอาซีติคแอซิด(EGTA)N,N-บิส-(คาร์บอกซีเมทธิล)ไกลซีน(ไนตริลโลไตรอาซีติคแอซิด)(NTA),โซเดียมไตรโพลีฟอสเฟส(STPP)หรือ ซีโอไลท์ (7) อิทธิพลของสารลดแรงตึงผิว : การออกฤทธิ์ถูกยับยั้งเพียงเล็กน้อยโดย โซเดียมลิเนียร์อัลคิลเบนซีนซัลโฟเนท(LAS),โซเดียมอัลคิลซัลเฟต(AS),โซเดียมโพลีออกซีเอทธิลลีนอัลคิลซัลเฟต(ES),โซเดียมอัลฟาโอลีฟินซัลโฟเนท(AOS),โซเดียมอาลิแฟติคแอซิดเอสเทอร์ที่เติมหมู่ซัลโฟเนทแล้วที่ตำแหน่งอัลฟา(อัลฟา-SFE),โซเดียมอัลคิลซัลโฟเนท(SAS),โพลีออกซีเอทธิลลีนเซคคันดารีอัลคิลอีเธอร์,เกลือของกรดไขมัน(เกลือโซเดียม),หรือไดเมทธิลไดอัลคิลแอมโมเนียมคลอไรด์, (8) อิทธิพลของโปรตีนเนส : มีความต้านทานต่อโปรตีนเนส (9) น้ำหนักโมเลกุล (สามารถหาได้โดยเจลโครมาโตรกราฟฟี) : มีค่าพีคสูงสุดที่ 180,000+- 10,0001. Purified alkali cellulase K, exhibiting the following chemical and physical properties: (1) Activity: (1a) Cx enzyme activity, active against carboxymethylcellulose; (1b) weak C1 enzyme activity; and (1c) weak beta-glucosidase activity. (2) Substrate specificity: Active against carboxymethylcellulose (CMC), crystalline cellulose, microcrystalline cellulose, cellobiose, and para-nitrophenylcellobioside (PNPC). (3) Working pH and Optimal Working pH: Working pH ranges from 4 to 12. (4) Stable pH: Stable pH ranges from 4.5 to 10.5 and 6.8 to 10 when left at 40 °C for 10 minutes and 30 minutes, respectively. (5) Working temperature range. and the best working temperature: The working temperature range is from 10 to 65 degrees Celsius, with the best working temperature being around 40 degrees Celsius (6). Influence of chelating agents: The activity is not inhibited by ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), ethyleneglycol-bis-(beta-aminoethyl ether)N,N,N',N"-tetraacetic acid (EGTA)N,N-bis-(carboxymethyl)glycine(nitrillotriaacetic acid) (NTA), sodium tripolyphosphate (STPP) or zeolites (7). Influence of surfactants: The activity is only slightly inhibited by Sodium linear alkylbenzene sulfonate (LAS), sodium alkyl sulfate (AS), sodium polyoxyethylene alkyl sulfate (ES), sodium alpha-olefin sulfonate (AOS), alpha-sulfonated sodium aliphatic acid ester (alpha-SFE), sodium alkyl sulfonate (SAS), polyoxyethylene secondary alkyl ether, fatty acid salts (sodium salts), or dimethyl dialkyl ammonium chloride, (8) Influence of proteinases: Proteinase resistant (9) Molecular weight (determined by gel chromatography): Peak value at 180,000 ± 10,000
2. อัลคาไลน์เซลลูเลส K ตามข้อถือสิทธิ 1 สามารถเตรียมได้โดยการแยกจากผลผลิตของการเลี้ยงเชื้อ Bacillus sp KSM-6352. Alkaline cellulase K, as per claim 1, can be prepared by isolation from the product of Bacillus sp. KSM-635 culture.
3. วิธีการผลิตอัลคาไลน์เซลลูเลส K ซึ่งประกอบด้วยการเลี้ยงเชื้อ สปีชี Bacillus ชนิด KSM-635 และแยกเอาอัลคาไลน์เซลลูเลส K ออกจากผลผลิตของการเลี้ยงเชื้อที่ได้3. The method for producing alkaline cellulase K involves culturing the Bacillus species KSM-635 and isolating alkaline cellulase K from the resulting culture product.
4. CMC เอส I ที่จัดว่าบริสุทธิ์ มีคุณสมบัติทางเคมีเชิงฟิสิกส์ดังต่อไปนี้ (1) การออกฤทธิ์: มีการออกฤทธิ์เป็นเอนไซม์ Cx มีการการออกฤทธิ์เป็นเอนไซม์ C1 อย่างอ่อน และ มีการออกฤทธิ์เป็นเบตา-กลูโคสิเดสอย่างอ่อน (2) ความจำเพาะต่อสับสเตรท : ออกฤทธิ์กับคาร์บอกซีเมทธิลเซลลูโลส (CMC) เซลลูโลสที่เป็นผลึก, เซลลูโลสที่เป็นผลึกขนาดเล็ก, เซลโลไบโอส, และพารา-ไนโตรเฟนนิลเซลโลไบโอไซด์(PNPC) (3) pH ที่ทำงาน และ pH ที่ทำงานได้ดีที่สุด: มี pH ที่ทำงานตั้งแต่ 3 ถึง 12.5 และช่วง pH ที่ทำงานได้ดีที่สุด 6 ถึง 11.5 (4) pH ที่มีความเสถียร: ไม่ถูกทำให้เสื่อมฤทธิ์ที่ pH ถึง 12 เมื่อปล่อยให้อยู่ในสภาพนั้นที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง (5) ช่วงอุณหภูมิที่ทำงาน และอุณหภูมิที่ทำงานได้ดีที่สุด : มีช่วงอุณหภูมิที่ทำงานได้ตั้งแต่ 10 ถึง 60 องศาเซลเซียส โดยอุณหภูมิที่ทำงานได้ดีที่สุดคือ 22 ถึง 53 องศาเซลเซียส (6) อิทธิพลของสารคีเลท: มีการออกฤทธิ์ที่ไม่ถูกยับยั้งโดย เอทธิลลีนไดอามีนเตตราอาซีติคแอซิด เอทธิลลีนไกลคอล-บิส-(เบตา-อมิโนเอทธิลอีเธอร์)N,N,N',N"-เตตราอาซีติคแอซิด,N,N-บิส-(คาร์บอกซีเมทธิล)ไกลซีน(ไนตริลโลไตรอาซีติคแอซิด),โซเดียมไตรโพลีฟอสเฟส หรือ ซีโอไลท์ (7) อิทธิพลของสารลดแรงตึงผิว : การออกฤทธิ์ถูกยับยั้งเพียงเล็กน้อยโดย โซเดียมลิเนียร์อัลคิลเบนซีนซัลโฟเนท,โซเดียมอัลคิลซัลเฟต,โซเดียมโพลีออกซีเอทธิลลีนอัลคิลซัลเฟต,โซเดียมอัลฟาโอลีฟินซัลโฟเนท,โซเดียมอาลิแฟติคแอซิดเอสเทอร์ที่เติมหมู่ซัลโฟเนทแล้วที่ตำแหน่งอัลฟา,โซเดียมอัลคิลซัลโฟเนท,โพลีออกซีเอทธิลลีนเซคคันดารีอัลคิลอีเธอร์,เกลือของกรดไขมัน(เกลือโซเดียม),ไดเมทธิลไดอัลคิลแอมโมเนียคลอไรด์,และกรดเทาโรโคลิค (8) ความต้านทานของโปรตีนเนส : มีความต้านทานต่อโปรตีนเนส (9) น้ำหนักโมเลกุล ที่สามารถหาได้โดยเจลโครมาโตรกราฟฟี : มีน้ำหนักโมเลกุล 145,000+- 10,000 (10) การดูดแสงอุลตราไวโอเลทที่มีความยาวคลื่นต่างๆ : มีการดูดแสงสูงสุดที่ 280 นาโนเมตร และ มีการดูดแสงที่เป็นไหล่ของพีคที่ 290 นาโนเมตร4. Purified CMC S1 exhibits the following physicochemical properties: (1) Activity: It exhibits Cx enzyme activity, weak C1 enzyme activity, and weak beta-glucosidase activity. (2) Substrate specificity: It is active against carboxymethylcellulose (CMC), crystalline cellulose, microcrystalline cellulose, cellobiose, and para-nitrophenylcellobiocide (PNPC). (3) Active pH and optimal pH: The active pH ranges from 3 to 12.5, and the optimal pH range is 6 to 11.5. (4) pH stability: It is not degraded at pH 12 when left at that temperature at 30 °C for 1 hour. (5) Active temperature range and optimal temperature: The active temperature range is from 10 to 60 °C, with the optimal temperature being 22 to 53 °C. (6) Chelating effect: It exhibits no inhibition by chelating agents. Ethylenediaminetetraacetic acid, ethyleneglycol-bis-(beta-aminoethyl ether)N,N,N',N"-tetraacetic acid,N,N-bis-(carboxymethyl)glycine(nitrillotriaacetic acid), sodium tripolyphosphate or zeolite (7) Influence of surfactants: The activity was only slightly inhibited by Sodium linear alkylbenzene sulfonate, sodium alkyl sulfate, sodium polyoxyethylene alkyl sulfate, sodium alpha-olefin sulfonate, alpha-sulfonated sodium aliphatic acid ester, sodium alkyl sulfonate, polyoxyethylene secondary alkyl ether, fatty acid salts (sodium salts), dimethyl dialkyl ammonium chloride, and taurocolic acid (8) Proteinase resistance: Resistant to proteinase (9) Molecular weight determined by gel chromatography: Molecular weight is 145,000 ± 10,000 (10) Ultraviolet absorption at different wavelengths: Maximum absorption is at 280 nm and the peak shoulder absorption is at 290 nm.
5. CMC เอส I ตามข้อถือสิทธิ 4 เตรียมได้โดยการแยกออกจากผลผลิตของการเลี้ยงเชื้อ Bacillus sp KSM-6355. CMC₂S₂I, as per claim 4, is prepared by isolation from the product of Bacillus sp. KSM-635 culture.
6. CMC เอส II ที่จัดว่าบริสุทธิ์มีคุณสมบัติทางเคมีเชิงฟิสิกส์ดังต่อไปนี้ (1) การออกฤทธิ์: มีการออกฤทธิ์เป็นเอนไซม์ Cx มีการการออกฤทธิ์เป็นเอนไซม์ C1 อย่างอ่อน และ มีการออกฤทธิ์เป็นเบตา-กลูโคสิเดสอย่างอ่อน (2) ความจำเพาะต่อสับสเตรท : ออกฤทธิ์กับคาร์บอกซีเมทธิลเซลลูโลส (CMC) เซลลูโลสที่เป็นผลึก, เซลลูโลสที่เป็นผลึกขนาดเล็ก, เซลโลไบโอส, และพารา-ไนโตรเฟนนิลเซลโลไบโอไซด์(PNPC) (3) pH ที่ทำงาน และ pH ที่ทำงานได้ดีที่สุด: มี pH ที่ทำงานตั้งแต่ 3 ถึง 12 และช่วง pH ที่ทำงานได้ดีที่สุด 6 ถึง 11.5 (4) pH ที่มีความเสถียร: ไม่ถูกทำให้เสื่อมฤทธิ์ที่ pH ถึง 12 เมื่อปล่อยให้อยู่ในสภาพนั้นที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง (5) ช่วงอุณหภูมิที่ทำงาน และอุณหภูมิที่ทำงานได้ดีที่สุด : มีช่วงอุณหภูมิที่ทำงานได้ตั้งแต่ 5 ถึง 58 องศาเซลเซียสโดยอุณหภูมิที่ทำงานได้ดีที่สุดคือ 14 ถึง 45 องศาเซลเซียส (6) อิทธิพลของสารคีเลท: มีการออกฤทธิ์ที่ไม่ถูกยับยั้งโดย เอทธิลลีนไดอามีนเตตราอาซีติคแอซิด เอทธิลลีนไกลคอล-บิส-(เบตา-อมิโนเอทธิลอีเธอร์)N,N,N',N"-เตตราอาซีติคแอซิด,N,N-บิส-(คาร์บอกซีเมทธิล)ไกลซีน(ไนตริลโลไตรอาซีติคแอซิด),โซเดียมไตรโพลีฟอสเฟส และ ซีโอไลท์ (7) อิทธิพลของสารลดแรงตึงผิว : การออกฤทธิ์ถูกยับยั้งเพียงเล็กน้อยโดย โซเดียมลิเนียร์อัลคิลเบนซีนซัลโฟเนท,โซเดียมอัลคิลซัลเฟต,โซเดียมโพลีออกซีเอทธิลลีนอัลคิลซัลเฟต,โซเดียมอัลฟาโอลีฟินซัลโฟเนท,โซเดียมอาลิแฟติคแอซิดเอสเทอร์ที่เติมหมู่ซัลโฟเนทแล้วที่ตำแหน่งอัลฟา,โซเดียมอัลคิลซัลโฟเนท,โพลีออกซีเอทธิลลีนเซคคันดารีอัลคิลอีเธอร์,เกลือของกรดไขมัน(เกลือโซเดียม),ไดเมทธิลไดอัลคิลแอมโมเนียคลอไรด์ (8) ความต้านทานของโปรตีนเนส : มีความต้านทานต่อโปรตีนเนส (9) น้ำหนักโมเลกุล ที่สามารถหาได้โดยเจลโครมาโตรกราฟฟี : มีน้ำหนักโมเลกุล 170,000+- 20,000 (10) การดูดแสงอุลตราไวโอเลทที่มีความยาวคลื่นต่างๆ : มีการดูดแสงสูงสุดที่ 280 นาโนเมตร และ มีการดูดแสงที่เป็นไหล่ของพีคที่ 290 นาโนเมตร6. Purified CMC S II exhibits the following physicochemical properties: (1) Activity: It exhibits Cx enzyme activity, weak C1 enzyme activity, and weak beta-glucosidase activity. (2) Substrate specificity: It is active against carboxymethylcellulose (CMC), crystalline cellulose, microcrystalline cellulose, cellobiose, and para-nitrophenylcellobiocide (PNPC). (3) Active pH and optimal pH: The active pH ranges from 3 to 12, and the optimal pH range is 6 to 11.5. (4) pH stability: It is not degraded at pH 12 when left at that temperature of 30 °C for 1 hour. (5) Active temperature range and optimal temperature: The active temperature range is from 5 to 58 °C, with the optimal temperature being 14 to 45 °C. (6) Chelating effect: It exhibits no inhibition by chelating agents. Ethylenediaminetetraacetic acid, ethyleneglycol-bis-(beta-aminoethyl ether)N,N,N',N"-tetraacetic acid,N,N-bis-(carboxymethyl)glycine(nitrillotriaacetic acid), sodium tripolyphosphate and zeolites (7). Influence of surfactants: The activity was only slightly inhibited by Sodium linear alkylbenzene sulfonate, sodium alkyl sulfate, sodium polyoxyethylene alkyl sulfate, sodium alpha olefin sulfonate, sodium aliphatic acid ester with alpha-sulfonated group, sodium alkyl sulfonate, polyoxyethylene secondary alkyl ether, fatty acid salts (sodium salts), dimethyl dialkyl ammonium chloride (8) Proteinase resistance: Resistant to proteinases (9) Molecular weight obtainable by gel chromatography: Has a molecular weight of 170,000 ± 20,000 (10) Ultraviolet absorption at different wavelengths: Has a maximum absorption at 280 nm and an absorption shoulder at 290 nm.
7. CMC เอส I ตามข้อถือสิทธิ 6 เตรียมได้โดยการแยกออกจากผลผลิตของการเลี้ยงเชื้อ Bacillus sp KSM-6357. CMC S I, as per claim 6, is prepared by isolation from the product of Bacillus sp. KSM-635 culture.
8. แบคทีเรีย Bacillus ชนิด KSM-635 ที่มีเชื้อสายพันธุ์ทางชีววิทยาที่บริสุทธิ์ ซึ่งมีความสามารถในการผลิตอัลคาไลน์เซลลูเลส K, และมีคุณสมบัติทางเอนไซม์ต่อไปนี้: (1) การออกฤทธิ์: มีการออกฤทธิ์เป็นเอนไซม์ Cx มีการการออกฤทธิ์เป็นเอนไซม์ C1 อย่างอ่อน และ มีการออกฤทธิ์เป็นเบตา-กลูโคสิเดสอย่างอ่อน (2) ความจำเพาะต่อสับสเตรท : ออกฤทธิ์กับคาร์บอกซีเมทธิลเซลลูโลส (CMC) เซลลูโลสที่เป็นผลึก, เซลลูโลสที่เป็นผลึกขนาดเล็ก, เซลโลไบโอส, และพารา-ไนโตรเฟนนิลเซลโลไบโอไซด์(PNPC) (3) pH ที่ทำงาน และ pH ที่ทำงานได้ดีที่สุด: มี pH ที่ทำงานตั้งแต่ 4 ถึง 12 และช่วง pH ที่ทำงานได้ดีที่สุด 9 ถึง 10 (4) pH ที่มีความเสถียร: มีค่า pH ที่มีความเสถียรในช่วง 4.5 ถึง 10.5 และ 6.8 ถึง 10 เมื่อปล่อยให้อยู่ที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีและ 30 นาที ตามลำดับ (5) ช่วงอุณหภูมิที่ทำงาน และอุณหภูมิที่ทำงานได้ดีที่สุด : มีช่วงอุณหภูมิที่ทำงานได้ตั้งแต่ 5 ถึง 58 องศาเซลเซียสโดยอุณหภูมิที่ทำงานได้ดีที่สุดคือ 14 ถึง 45 องศาเซลเซียส (6) อิทธิพลของสารคีเลท: มีการออกฤทธิ์ที่ไม่ถูกยับยั้งโดย เอทธิลลีนไดอามีนเตตราอาซีติคแอซิด เอทธิลลีนไกลคอล-บิส-(เบตา-อมิโนเอทธิลอีเธอร์)N,N,N',N"-เตตราอาซีติคแอซิด,N,N-บิส-(คาร์บอกซีเมทธิล)ไกลซีน(ไนตริลโลไตรอาซีติคแอซิด),โซเดียมไตรโพลีฟอสเฟส และ ซีโอไลท์ (7) อิทธิพลของสารลดแรงตึงผิว : การออกฤทธิ์ถูกยับยั้งเพียงเล็กน้อยโดย โซเดียมลิเนียร์อัลคิลเบนซีนซัลโฟเนท,โซเดียมอัลคิลซัลเฟต,โซเดียมโพลีออกซีเอทธิลลีนอัลคิลซัลเฟต,โซเดียมอัลฟาโอลีฟินซัลโฟเนท,โซเดียมอาลิแฟติคแอซิดเอสเทอร์ที่เติมหมู่ซัลโฟเนทแล้วที่ตำแหน่งอัลฟา,โซเดียมอัลคิลซัลโฟเนท,โพลีออกซีเอทธิลลีนเซคคันดารีอัลคิลอีเธอร์,เกลือของกรดไขมัน(เกลือโซเดียม),ไดเมทธิลไดอัลคิลแอมโมเนียคลอไรด์,และกรดเทาโรโคลิค (8) ความต้านทานของโปรตีนเนส : มีความต้านทานต่อโปรตีนเนสได้เป็นอย่างดี (9) น้ำหนักโมเลกุล ที่สามารถหาได้โดยเจลโครมาโตรกราฟฟี : มีน้ำหนักโมเลกุล 180,000+- 10,0008. A purified biological strain of Bacillus kSM-635 was developed, capable of producing alkaline cellulase K, and exhibiting the following enzymatic properties: (1) Activity: Cx enzyme activity, weak C1 enzyme activity, and weak beta-glucosidase activity. (2) Substrate specificity: Active against carboxymethylcellulose (CMC), crystalline cellulose, microcrystalline cellulose, cellobiose, and para-nitrophenylcellobiocide (PNPC). (3) Active pH and optimal pH: Active pH ranges from 4 to 12, and optimal pH range is 9 to 10. (4) pH stability: Stable pH ranges from 4.5 to 10.5 and 6.8 to 10 when left at 40 °C for 10 minutes and 30 minutes, respectively. (5) Operating temperature range. and the best operating temperature: The operating temperature range is from 5 to 58 °C, with the best operating temperature being 14 to 45 °C (6). Influence of chelating agents: The activity is not inhibited by ethylenediaminetetraacetic acid, ethyleneglycol-bis-(beta-aminoethyl ether)N,N,N',N"-tetraacetic acid,N,N-bis-(carboxymethyl)glycine(nitrillotriaacetic acid), sodium tripolyphosphate and zeolites (7). Influence of surfactants: The activity is only slightly inhibited by Sodium linear alkylbenzene sulfonate, sodium alkyl sulfate, sodium polyoxyethylene alkyl sulfate, sodium alpha olefin sulfonate, sodium aliphatic acid ester with alpha-sulfonated group, sodium alkyl sulfonate, polyoxyethylene secondary alkyl ether, fatty acid salts (sodium salts), dimethyl dialkyl ammonium chloride, and taurocolic acid (8) Proteinase resistance: It has very good resistance to proteinases (9) Molecular weight as determined by gel chromatography: It has a molecular weight of 180,000 ± 10,000.