Claims (6)
1. จุลิทรีย์คอมบิแนนท์ซึ่งมีความสามารถในการผลิต โพลี-y-กลูตามิกแอซิด, โดยที่, จุลินทรีย์คอมบิแนนท์จะถูกจัดเตรียมโดยการนำยีน pgsB ของบาซิลลัสซับทิลิส (Bacillus subtilis) หรือยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, และยีน pgsC ของบาซิลลัส ซับทิลิส (Bacillus subtilis) หรือยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, ในกลุ่มของยีนซึ่งเกี่ยวข้องกับ การสังเคราะห์ โพลี-y-กลูตามิกแอซิด, เข้าสู่จุลินทรีย์เจ้าบ้าน, และ โดยที่ไม่มียีน pgsA ของบาซิลลัสของบาซิลลัส ซับทิลิส (Bacillus subtilis) หรือยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่า กับมันถูกนำเข้าสู่จุลินทรีย์เจ้าบ้าน 2. จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ตามข้อถือสิทธิ 1, โดยที่ ยีน pgsB คือยีนซึ่งถอดรหัสให้โปรตีน (a) หรือ (b); ต่อไปนี้; (a) โปรตีนซึ่งมีสายลำดับกรดอะมิโนที่อธิบายไว้ใน SEQ ID NO:2; และ (b) โปรตีนซึ่งมีสายลำดับกรดอะมิโน, ที่ซึ่งหนึ่งกรดอะมิโนหรือมากกว่า จะถูกลบออก, ถูกแทนที่, ถูกเพิ่ม หรือถูกสอดแทรก ในสายลำดับกรดอะมิโนที่อธิบายไว้ใน SEQ ID NO:2, และ ซึ่งมีฤทธิ์อะมิโด-ไลเกส 3. จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ตามข้อถือสิทธิ 1 หรือ 2, โดยที่ ยีน pgsC คือยีนซึ่งถอดรหัสให้ โปรตีน (c) หรือ (d); ต่อไปนี้; (c) โปรตีนซึ่งมีสายลำดับกรดอะมิโนที่อธิบายไว้ใน SEQ ID NO:2; และ (b) โปรตีนซึ่งมีสายลำดับกรดอะมิโน, ที่ซึ่งหนึ่งกรดอะมิโนหรือมากกว่า จะถูกลบออก, ถูกแทนที่, ถูกเพิ่ม หรือถูกสอดแทรก ในสายลำดับกรดอะมิโนที่อธิบายไว้ใน SEQ ID NO:2, และ ซึ่งมีหน้าที่ในการผลิตโพลี-y-กลูตามิกแอซิด ในการมีอยู่ของ pgsB โปรตีนที่ถูกถอดรหัสโดย ยีน pgsB 4. จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ 1 ถึง 3, โดยที่ ยีน pgsB หรือ ยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, และยีน pgsC หรือยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, จะถูกรวมเข้าไว้ ในพลาสมิดซึ่งสามารถถ่ายแบบเพิ่มจำนวนตัวเองได้ในเซลล์ของจุลินทรีย์เจ้าบ้าน 5. จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ 1 ถึง 4, โดยที่ ยีน pgsB หรือ ยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, และยีน pgsC หรือยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, จะมีบริเวณ ควบคุมการเริ่มต้นการถอดรหัส และ/หรือบริเวณควบคุมการเริ่มต้นการแปลรหัส ซึ่งแต่ละอย่างจะ ทำหน้าที่ในจุลินทรีย์ที่ตำแหน่งจำเพาะอัพสตรีของยีน 6. จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ 1 ถึง 3, โดยที่ จุลินทรีย์เจ้าบ้าน คือ จุลินทรีย์ บาซิลลัส 7. จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ตามข้อถือสิทธิ 6, โดยที่จุลินทรีย์บาซิลลัส คือ บาซิลลัส ซับทิลิส 8. วิธีการในการผลิต โพลี-y-กลูตามิกแอซิด, ซึ่งประกอบรวมด้วยขั้นตอนของ; การเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์คอมบิแนนท์ตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ 1 ถึง 7, และ การเก็บรวบรวมโพลี-y-กลูตามิกแอซิด ที่ถูกผลิตขึ้น 9. วิธีการในการปรับปรุงความสามารถเชิงการผลิต โพลี-y-กลูตามิกแอซิล, ซึ่งประกอบรวม ด้วยการใช้จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ ซึ่งได้มาโดยการนำยีน phsB ของบาซิลลัส ซับทิลิส หรือยีนซึ่ง ทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, และยีน pgsC ของบาซิลลัส ซับทิลิส หรือยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, ในกลุ่มของยีนซึ่งเกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์ โพลี-y-กลูตามิกแอซิด, เข้าสู่จุลินทรีย์เจ้าบ้าน 1 0. วิธีการในการปรับปรุงความสามารถเชิงการผลิต โพลี-y-กลูตามิกแอซิด ตามข้อถือสิทธิ 9, โดยที่จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ คือจุลินทรีย์คอมบิแนนท์ตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ 1 ถึง 7 11.Combinant capacity, which has the ability to produce Poly-y-glutamic acid, where, the combinant microorganism is prepared by the introduction of the Bacillus subtilis pgsB gene or genes which are equivalent to it, and Bacillus subtilis pgsC gene or genes which are equivalent to it, in a group of genes involved in Synthesis Poly-y-glutamic acid, enters into host microorganisms, and without the Bacillus subtilis pgsA gene or equivalent function genes. And it is introduced into the host microorganisms 2. Recombinant microorganisms according to claim 1, where the pgsB gene is the gene which is transcribed to a protein (a) or (b); Following; (a) protein with the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 2; And (b) proteins with amino acid chain, in which one or more amino acids are removed, replaced, added or inserted. In the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 2, and which has amidose-ligase activity, 3. The recombinant of claim 1 or 2, where the pgsC gene is the gene. Which decodes to protein (c) or (d); Following; (c) protein with amino acid sequence described in SEQ ID NO: 2; And (b) proteins with amino acid chain, in which one or more amino acids are removed, replaced, added or inserted. In the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 2, and which is responsible for the production of poly-y-glutamic acid. In the presence of pgsB, the protein is transcribed by the pgsB gene 4. Recombinant microorganisms according to one of the claims 1 to 3, where the pgsB genes or genes acting as equivalent to it, and the gene pgsC or genes which are equivalent to it, are included. In plasmids, which are self-replicated in the host microbial cells, 5. Microorganisms recombinant according to either claim 1 to 4, where the pgsB gene or its equivalent function. With it, and the pgsC gene or genes which are equivalent to it, have a regulating region for transcription initiation. And / or control area to start the translation Each of which will It acts in microorganisms at specific upstream genes. 6. Recombinant microorganisms according to one of the claims 1 to 3, where the host microorganism is bacillus. 7. Recombinant microorganisms. According to claim 6, where the bacillus microorganism is bacillus subtilis 8. Production methods Poly-y-glutamic acid, which is composed of phases; Culture of microbial combinant according to any of claims 1 to 7, and collection of poly-y-glutamic acid. That was produced. 9. Methods to improve productivity. Poly-y-glutamic acid, which consists of With the use of recombinant microorganisms It is obtained by introducing the bacillus subtilis phsB gene or genes which are equivalent to it, and the bacillus subtilis pgsC gene or genes which are equivalent to it, in the genes involved in synthesis. Poly-y-glutamic acid, enters the host microorganisms 1 0. Methods for improving productivity. Poly-y-Glutamic Acid According to claim 9, where microorganisms recombinant Is a compound microbial according to any of the claims 1 to 7 1
1. วิธีการในการปรับน้ำหนักโมเลกุลของโพลี-y-กลูตามิกแอซิด, ซึ่งประกอบรวมด้วยการใช้ จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ ซึ่งได้มาโดยการนำยีน pgsB ของบาซิลลัส ซับทิลิส หรือยีนซึ่งทำหน้าที่ เทียบเท่ากับมัน, และยีน pgsC ของบาซิลลัสซับทิลิส หรือยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, ในกลุ่ม ของยีนซึ่งเกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์ โพลี-y-กลูตามิกแอซิด, เข้าสู่จุลินทรีย์เจ้าบ้าน 11. A method for modulating the molecular weight of poly-y-glutamic acid, which consists of using Recombinant microorganisms It is obtained by introducing the bacillus subtilis pgsB gene or genes which function Equivalent to it, and the pgsC gene of bacillus subtilis Or genes, which are equivalent to them, in the group of genes involved in synthesis Poly-y-glutamic acid, enters host microorganism 1
2. วิธีการในการปรับน้ำหนักโมเลกุลของโพลี-y-กลูตามิกแอซิด ตามข้อถือสิทธิ 11, โดยที่ จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์คือจุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ 1 ถึง 7 12.Method for modulating the molecular weight of poly-y-glutamic acid According to claim 11, where recombinant microorganism is a recombinant microorganism according to claim 1 to 7 1.
3. วิธีการในการผลิตโพลี-y-กลูตามิกแอซิดน้ำหนักโมเลกุลสูง, ซึ่งประกอบรวมด้วยการใช้ วิธีการในการปรับน้ำหนักโมเลกุลของโพลี-y-กลูตามิกแอซิด ตามข้อถือสิทธิ 11 หรือ 12 13. A method for the production of high molecular weight poly-y-glutamic acid, which consists of using Method for modulating poly-y-glutamic acid molecular weight According to claim 11 or 12 1
4. วิธีการในการปรับความบริสุทธิ์เชิงออปติกของโพลี-y-กลูตามิกแอซิด, โดยที่อัตราส่วน L-ไอโซเมอร์ของโพลี-y-กลูตามิกแอซิดที่ผลิตขึ้นจะถูกควบคุมโดยการใชจุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ ซึ่งได้มาโดยการนำยีน pgsB ของบาซิลลัส ซับทิลิส หรือยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, และ ยีน pgsC ของบาซิลลัส ซับทิลิส หรือยีนซึ่งทำหน้าที่เทียบเท่ากับมัน, ในกลุ่มของยีนซึ่งเกี่ยวข้องกับ การสังเคราะห์ โพลี-y-กลูตามิกแอซิด, เข้าสู่จุลินทรีย์เจ้าบ้าน 14. Methods for adjusting the optical purity of poly-y-glutamic acid, where the ratio The L-isomer of the produced poly-y-glutamic acid is regulated by using recombinant microorganisms. It is obtained by taking the bacillus subtilis pgsB gene or genes which are equivalent to it, and the bacillus subtilis pgsC gene or the genes which are equivalent to it, in the genes involved in Synthesis Poly-y-glutamic acid, enters host microorganism 1
5. วิธีการในการปรับความบริสุทธิ์เชิงออปติกของโพลี-y-กลูตามิกแอซิด ตามข้อถือสิทธิ 14, โดยที่จุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ คือจุลินทรีย์รีคอมบิแนนท์ตามข้อถือสิทธิ 1 ถึง 7 15.Method for modulating the optical purity of poly-y-glutamic acid. According to claim 14, where microorganisms recombinant Is a recombinant microorganism according to claims 1 to 7 1
6. วิธีการในการผลิตโพลี-y-กลูตามิกแอซิด ซึ่งมีอัตราส่วน L-ไอโซเมอร์ที่สูง, ซึ่งประกอบ รวมด้วยการใช้วิธีการในการปรับความบริสุทธิ์เชิงออปติกของโพลี-y-กลูตามิกแอซิด ตาม ข้อภือสิทธิ 14 หรือ 156. A method for the production of poly-y-glutamic acid Which has the ratio High L-isomer, which consists of the use of a method for modulating the optical purity of the poly-y-glutamic acid in accordance with Regulation 14 or 15.