TH4137B

TH4137B - ลำดับ dna ที่มีรหัสของเซอร์เฟสแอนติเจนโปรตีน p31 ที่ดัดแปลงของไวรัสเฮพพาทิทิส บี

Info

Publication number: TH4137B
Application number: TH8601000429A
Authority: TH
Inventors: ฟูจิ นายโทโมโกะ; นิชิมูระ นายโอซามุ; อีโตะ นายยาซูอากิ; ฟูจิซาวา นายยูกิโอะ
Original assignee: นายดำเนิน การเด่น; นายดำเนิน การเด่น นายวิรัช ศรีเอนกราธา; นายวิรัช ศรีเอนกราธา
Filing date: 1986-08-19
Publication date: 1994-11-09

Abstract

โปรตีน P31 ที่ดัดแปลงขึ้น ซึ่งมีความต้านทานต่อโปรตีนเอสที คล้ายทริพซินที่มีฤทธิ์ของเฮพาทิทิส บี ไวรัชเซอร์เฟซแอนติเจน และสามารถต่อเข้ากับเซรุ่มอับบูมินของมนุษย์ที่โพลิเมอไรส์ขึ้นที่ได้มาจากเฮพาทินิส บีไวรัส เซอร์เฟซแอนติเจน P31 โปรตีนโดยการดัดแปลงดังกล่าวซึ่งจะทำให้อย่างน้อยหนึ่งแหล่งที่ไวต่อโปรตีนเอสที่คล้ายทริพซินให้เป็นแหล่งที่ต่อต้านการย่อยซึ่งสามารถใช้เป็นวัคซีนสำหรับป้องกันการติดเชื้อเฮพาทินิส บี ไวรัส และใช้เป็นแอนติเจน สำหรับวินิจฉัยโรคการติดเชื้อเฮพาทินิส บี ไวรัส สิทธิบัตรยา

Claims

1.วิธีสำหรับสร้างเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ชนิดดัดแปลงของไวรัสเฮพาทิทิส บี ที่มีแอนติเจ นิซิตีของเซอร์เฟซของไวรัสเฮพาทิทิส บี และสามารถที่จะจับตัวกับเซรุ่มอัลยูมิของมนุษย์โพลิเมอไรซ์ โดยที่ a) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนดิเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติดแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริทโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิล อะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน และลิวซีน หรือ b) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกระอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮทาทิทิส บี หรือ เพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาคิคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิล-อะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน กับลิวซีน และแทนที่กรดอะมิโนอย่างน้อยหนึ่งตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยส่วนกรดอะมิโนที่ 16, 18, 177 และ 196 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน กับลิวซีน วิธีการจะประกอบด้วยการเพาะเลี้บงทรานสฟอร์แมนท์ที่ดีมีเอนเอที่ประกอบด้วยลำดับดีเอนเอที่มีระหัสสำหรับโปรตีน P31 ดัดแปลง และการแยกโปรตีน P31 ดัดแปลงนั้นๆ 2.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ a) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของ เซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ขอไวราสเฮพาทิทิส บี ด้วย Trp หรือ Pro-Asp-Pro-Gly หรือ b)กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเทปไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วย Trp หรือ Pro-Asp-Pro-Gly และแทนทีกรดอะมิโนที่ 16,18 Arg จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บีด้วย Gln 3.วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 2 โดยที่ เซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี มีลำดับกรดอะมิโนดังต่อไปนี้ MerGlnTrpAsnSerThrThrPheHisGlnAla Leu- LeuAspProArgValArgGlyLeuTyrPheProAla- GlyGlySerSerSer GlyThrValAsnProValProThr- ThrAlaSerProIleSerSerIlePheSer ArgThr- GlyAspProAlaProAsnMetGluAsnThrThrSerGly- PheLeuGly ProLeuLeuValLeuGlnAlaGlyPhe- PheLeuLeuThrArgIleLeuThrIle ProGlnSer- LeuAspSerTrpTrpThrSerLeuAsnPheLeuGly- GlyAlsPro ThrCysProGlyGlnAsnSerGlnSer- ProThrSerAsnHisSerProThrSer CysPro- ProIleCysProGlyTyrArgTrpMetCysLeuArgArg- PheIleIle PheLeuPheIleLeuLeuCysLeuIle- PheLeuleuValLeuLeuAspTyr GlnGlyMetLeu- ProValCysProLeuLeuProGlyThrSerThrTh- rSerThr GlyProCysLysThrCysThrIleProAlaGln- GlyThrSerMetPheProSer CysCysCysThrLvs- ProSerAspGlyAsnCysThrCysIleProIleProSer SerTrpAlaPheA;aArgPheLeuTrpGluTrpAlaSer- ValArgPheSerTrp LeuSerLeuLeuValPro- PheValGlnTrpPheValGlyLeuSerProThrVal TrpLeuSerValIleTrpMetMetTrpTryTrpGly- ProSerLeuTyrAsnIle LeuSerProPheLeu- ProLeuLeuProIlePhePheCysLeuTrpValTyrIle. 4.วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 3 โดยที่สายเพบไทด์ที่ครอบคลุมส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของลำดับกรดอะมิโนได้รับการกำจัดออกไป 5.วิธีสำหรับสร้าง (i) เซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P25 และ(ii) เซอร์เฟซโปรตีนแอนติเจนโปรตีน P31 ชนิดดัดแปลงของไวรัสเฮพาทิทิส บี ที่มีแอนติเจนนิซิตีของเซอร์เฟซของไวรัสเฮพาทิทิส บี และสามารถที่จะจับตัวกับเซรุ่มอัลบูมินของมนุษย์ที่โพลิเมอไรซ์โดยที่ a) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอรีน ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซิน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิล-อะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน และลิวซีน หรือ b) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรออะมิโนที่ 48 arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนดิเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน กับลิวซีน และแทนที่กรดอะมิโนอย่างน้อยหนึ่งตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยส่วนกรดอะมิโนที่ 16,18,177 และ196 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน กับลิวซีน วิธีการจะประกอบด้วยขั้นตอนการเพาะเลี้ยงทรานสฟอร์แมนที่มีดีเอนเอที่ประกอบด้วยลำดับดีเอนเอที่มีรหัสสำหรับโปรตีน P31 ชนิดดัดแปลงลำดับของดีเอนเอที่มีรหัสของโปรตีน P25 ตลอดจนการแยกโปรตีน P31 ดัดแปลงและโปรตีน P25 นั้นๆ 6.วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 5 โดยที่ a) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ด้วย Tr- หรือ Pro-Asp-Pro-Gly หรือ b) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วย Trp หรือ Pro-Asp-Pro-Gly และแทนที่กรดอะมิโนที่ 16 และ 18 Arg จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเขนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วย Gln 7.วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 6 โดยที่เซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพทิทิส บี มีลำดับกรดอะมิโนดังต่อไปนี้ MerGlnTrpAsnSerThrThrPheHisGlnAla Leu- LeuAspProArgValArgGlyLeuTyrPheProAla- GlyGlySerSerSer GlyThrValAsnProValProThr- ThrAlaSerProIleSerSerIlePheSer ArgThr- GlyAspProAlaProAsnMetGluAsnThrThrSerGly- PheLeuGly ProLeuLeuValLeuGlnAlaGlyPhe- PheLeuLeuThrArgIleLeuThrIle ProGlnSer- LeuAspSerTrpTrpThrSerLeuAsnPheLeuGly- GlyAlsPro ThrCysProGlyGlnAsnSerGlnSer- ProThrSerAsnHisSerProThrSer CysPro- ProIleCysProGlyTyrArgTrpMetCysLeuArgArg- PheIleIle PheLeuPheIleLeuLeuCysLeuIle- PheLeuleuValLeuLeuAspTyr GlnGlyMetLeu- ProValCysProLeuLeuProGlyThrSerThrTh- rSerThr GlyProCysLysThrCysThrIleProAlaGln- GlyThrSerMetPheProSer CysCysCysThrLvs- ProSerAspGlyAsnCysThrCysIleProIleProSer SerTrpAlaPheA;aArgPheLeuTrpGluTrpAlaSer- ValArgPheSerTrp LeuSerLeuLeuValPro- PheValGlnTrpPheValGlyLeuSerProThrVal TrpLeuSerValIleTrpMetMetTrpTryTrpGly- ProSerLeuTyrAsnIle LeuSerProPheLeu- ProLeuLeuProIlePhePheCysLeuTrpValTyrIle 8.วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 6 โดยที่สายเพบไทด์ที่ครอบคลุมส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของลำดับกรดอะมิโนได้รับการกำจัดออก 9.วิธีสำหรับสร้างทรานสฟอร์แมนท์ที่มีดีเอนเอซึ่งมีลำดับที่มีรหัสของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีนแอนติเจโปรตีน P31 ชนิดดัดแปลงของไวรัสเฮพาทิทิส บี ที่มีแอนติเจนิซิตีของเซอร์เฟซของไวรัสเฮพาทิทิส บี และสามารถที่จะจับตัวกับเซรุ่มอัลบูมินของมนุษย์ที่โพลิเมอไรซ์ โดยที่ a) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือ เพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติตแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิค ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน อิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน และลิวซีน หรือ b) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน กับลิวซีน และแทนที่กรดอะมิโนอย่างน้อยหนึ่งตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยส่วนกรดอะมิโนที่ 16,18,177 และ196 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน กับลิวซีน วิธีการจะประกอบด้วยขั้นตอนการทรานสฟอร์มเจ้าบ้านด้วยดีเอนเอ 1 0.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 โดยที่ a) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือ เพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยด้วย Tr- หรือ Pro-Asp-Pro-Gly หรือ b) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วย Trp หรือ Pro-Asp-Pro-Gly และแทนที่กรดอะมิโนที่ 16 และ 18 Arg จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเขนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วย Gln 1 1.วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 10 โดยที่เซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี มีลำดับกรดอะมิโนดังต่อไปนี้ MerGlnTrpAsnSerThrThrPheHisGlnAla Leu- LeuAspProArgValArgGlyLeuTyrPheProAla- GlyGlySerSerSer GlyThrValAsnProValProThr- ThrAlaSerProIleSerSerIlePheSer ArgThr- GlyAspProAlaProAsnMetGluAsnThrThrSerGly- PheLeuGly ProLeuLeuValLeuGlnAlaGlyPhe- PheLeuLeuThrArgIleLeuThrIle ProGlnSer- LeuAspSerTrpTrpThrSerLeuAsnPheLeuGly- GlyAlsPro ThrCysProGlyGlnAsnSerGlnSer- ProThrSerAsnHisSerProThrSer CysPro- ProIleCysProGlyTyrArgTrpMetCysLeuArgArg- PheIleIle PheLeuPheIleLeuLeuCysLeuIle- PheLeuleuValLeuLeuAspTyr GlnGlyMetLeu- ProValCysProLeuLeuProGlyThrSerThrTh- rSerThr GlyProCysLysThrCysThrIleProAlaGln- GlyThrSerMetPheProSer CysCysCysThrLvs- ProSerAspGlyAsnCysThrCysIleProIleProSer SerTrpAlaPheA;aArgPheLeuTrpGluTrpAlaSer- ValArgPheSerTrp LeuSerLeuLeuValPro- PheValGlnTrpPheValGlyLeuSerProThrVal TrpLeuSerValIleTrpMetMetTrpTryTrpGly- ProSerLeuTyrAsnIle LeuSerProPheLeu- ProLeuLeuProIlePhePheCysLeuTrpValTyrIle 1 2.วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 11 โดยที่สายเพบไทด์ที่ครอบคลุมส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของลำดับกรดอะมิโนได้รับการกำจัดออกไป 1 3.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 4 โดยที่เจ้าบ้านประกอบด้วยยีสต์ 1 4.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 โดยที่เข้าบ้านประกอบด้วยจุลชีฟ Saccharomyces cerevisiae 1 5.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 ที่ทรานสฟอร์แมนท์ประกอบด้วย Saccharomyces cerevisiae AH22R-/pPHO P31-Ra 1 6.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 ที่ทรานสฟอร์มแมนท์ประกอบด้วย Saccharomyces cerevisiae AH22R-/pPHO P31-Rb 1 7.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 ที่ทรานสฟอร์มแมนท์ประกอบด้วย Saccharomyces cerevisiae AH22R-/pGLD P31-Rc 1 8.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 ที่ทรานสฟอร์มแมนท์ประกอบด้วย Saccharomyces cerevisiae AH22R-/pGLD P31-Rd 1 9.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 ที่ทรานสฟอร์มแมนท์ประกอบด้วย Saccharomyces cerevisiae AH22R-/pGLD P31-RcT 2 0.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 ที่ทรานสฟอร์มแมนท์ประกอบด้วย Saccharomyces cerevisiae AH22R-/pGLD P31-RdT 2

1.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 ที่ทรานสฟอร์มแมนท์ประกอบด้วย Saccharomyces cerevisiae AH22R-/pPHO 3125 2

2.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 ที่ทรานสฟอร์มแมนท์ประกอบด้วย Saccharomyces cerevisiae AH22R-/pPGLD 2531 2

3.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 9 ที่ทรานสฟอร์มแมนท์ประกอบด้วย Saccharomyces cerevisiae AH22R-/pPGLD 25T31cT 2

4.วิธีการสำหรับสร้างดีเอนเอที่มีดีเอนเอซี่งมีลำดับที่มีรหัสของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน แอนติเจนโปรตีน P31 ชนิดดัดแปลงของไวรัสเฮพาทิทิส บี ที่มีแอนติเจนนิซิตีของเซอร์เฟซของไวรัสเฮพาทิทิส บี และสามารถจับตัวกับเซรุ่มอัลบูมินของมนุษย์ที่โพลิเมอไรซ์โดยที่ a) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอรีน ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซิน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิล-อะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน และลิวซีน หรือ b) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรออะมิโนที่ 48 arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนดิเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน กับลิวซีน และแทนที่กรดอะมิโนอย่างน้อยหนึ่งตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยส่วนกรดอะมิโนที่ 16,18,177 และ196 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน กับลิวซีน วิธีการจะประกอบด้วยขั้นตอนของ (i) กำจัดโคคอนที่มีรหัสของส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามีนแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซิน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน และลิวซีน หรือ (ii) กำจัดโคคอนที่มีรหัสของส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน ฮิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน กับลิวซีน และแทนที่กรดอะมิโนอย่างน้อยหนึ่งตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยส่วนกรดอะมิโนที่ 16,18,177 และ 196 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิสบี ด้วยกรดอะมิโนจากหนึ่งถึงสี่ตัวที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอสปาราจีน แอสปาติคแอซิด อะลานีน ไอโซลิวซีน ไกลซีน กลูตามีน กลูตามิคแอซิด ซิสเตอีน ซีรีน ไทโรซีน ทริพโตฟาน ธรีโอนีน วาลีน อิสติดีน เฟนิลอะลานีน โปรลีน เมธิโอนีน กับลิวซีน 2

5.วิธีของข้อถือสิทธิที่ 24 โดยที่ a) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือ เพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วยด้วย Tr- หรือ Pro-Asp-Pro-Gly หรือ b) กำจัดหรือแทนที่ส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg จากปลาย N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี หรือเพบไทด์ที่มีส่วนกรดอะมิโนที่ 48 Arg ภายในช่วงของสายเพบไทด์ที่คลุมช่วงส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วย Trp หรือ Pro-Asp-Pro-Gly และแทนที่กรดอะมิโนที่ 16 และ 18 Arg จากปลายด้าน N ของเซอร์เฟซแอนติเขนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี ด้วย Gln 2

6.วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 25 โดยที่เซอร์เฟซแอนติเจนโปรตีน P31 ของไวรัสเฮพาทิทิส บี มีลำดับกรดอะมิโนดังต่อไปนี้ MerGlnTrpAsnSerThrThrPheHisGlnAla Leu- LeuAspProArgValArgGlyLeuTyrPheProAla- GlyGlySerSerSer GlyThrValAsnProValProThr- ThrAlaSerProIleSerSerIlePheSer ArgThr- GlyAspProAlaProAsnMetGluAsnThrThrSerGly- PheLeuGly ProLeuLeuValLeuGlnAlaGlyPhe- PheLeuLeuThrArgIleLeuThrIle ProGlnSer- LeuAspSerTrpTrpThrSerLeuAsnPheLeuGly- GlyAlsPro ThrCysProGlyGlnAsnSerGlnSer- ProThrSerAsnHisSerProThrSer CysPro- ProIleCysProGlyTyrArgTrpMetCysLeuArgArg- PheIleIle PheLeuPheIleLeuLeuCysLeuIle- PheLeuleuValLeuLeuAspTyr GlnGlyMetLeu- ProValCysProLeuLeuProGlyThrSerThrTh- rSerThr GlyProCysLysThrCysThrIleProAlaGln- GlyThrSerMetPheProSer CysCysCysThrLvs- ProSerAspGlyAsnCysThrCysIleProIleProSer SerTrpAlaPheA;aArgPheLeuTrpGluTrpAlaSer- ValArgPheSerTrp LeuSerLeuLeuValPro- PheValGlnTrpPheValGlyLeuSerProThrVal TrpLeuSerValIleTrpMetMetTrpTryTrpGly- ProSerLeuTyrAsnIle LeuSerProPheLeu- ProLeuLeuProIlePhePheCysLeuTrpValTyrIle 2

7.วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 26 โดยที่สายเพบไทด์ที่ครอบคลุมส่วนกรดอะมิโนที่ 44 ถึง 49 จากปลายด้าน N ของลำดับกรดอะมิโนได้รับการกำจัดออกไป