Claims (5)
(OCR)------------------(OCR)------------------
1. วิธีการผลิตซลล์มีชีวิตของแบคที่เรียกรดแลคติก มีขั้นตอนดังนี้ ก. การเตรียมหัวเชื้อของแบคทีเรียกรดแลคติก ด้วยการเพาะเลี้ยงเซลล์แบคทีเรียกรดแลคติกด้วย อาหารเหลวสูตรที่หนึ่ง ภายใต้สภาวะที่มีอุณหภูมิ 30 ถึง 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 8 ถึง 12 ชั่วโมง โดยไม่มีการเขย่าและ/หรือกวน เพื่อให้ได้เซลล์ที่มีความหนาแน่นเชิงแสงที่ความยาวคลื่น 600 นาโนเมตร อยู่ในช่วง 10 ถึง 12 และ ข. การนำเซลล์ที่ได้จากข้อ ก. มาเพาะเลี้ยงด้วยอาหารเหลวสูตรที่สอง ภายใต้สภาวะที่มีอุณหภูมิ 30 ถึง 37 องศาเซลเซียส โดยไม่มีการควบคุมค่าความเป็นกรด-ด่าง ไม่มีการกวนหรือการจ่ายอากาศ ในระหว่างการหมัก เป็นเวลา 24 ถึง 36 ชั่วโมง เพื่อผลิตเซลล์มีชีวิตของแบคที่เรียกรดแลคติก ที่ซึ่ง อาหารเหลวสูตรที่หนึ่ง ประกอบด้วย กลูโคส 10.0-30.0 กรัม สารสกัดจากยีสต์ 0.5-5.0 กรัม เปปโตน 0.5-5.0 กรัม ไดแอมโมเนียมฟอสเฟต 0.8-1.2 กรัม โพแทสเซียมฟอสเฟต 1.0-2.0 กรัม แมงกานีสซัลเฟต 0.1-1.5 กรัม แมกนี่เซียมซัลเฟต 0.6-1.0 กรัม โซเดียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต 6.5-8.0 กรัม ไดโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟต 2.5-3.5 กรัม แคลเซียมซัลเฟต 10.0-500.0 มิลลิกรัม โซเดียมซัลเฟต 50.0-500.0 มิลลิกรัม เฟอร์รัสซัลเฟต 5.0-30.0 มิลลิกรัม คอปเปอร์ซัลเฟต 1.0-10.0 มิลลิกรัม ซิงค์ซัลเฟต 1.0-10.0 มิลลิกรัม ปรับค่าความเป็นกรด-ด่างเริ่มต้นของอาหารเลี้ยงเชื้อให้อยู่ในช่วง 6.0 ถึง 7.0 และปรับ ปริมาตรอาหารเลี้ยงเชื้อให้ เป็น 1 ลิตร และ อาหารเหลวสูตรที่สอง ประกอบด้วย กลูโคส 10.0-30.0 กรัม สารสกัดจากยีสต์ 2.0-5.0 กรัม ไดแอมโมเนียมฟอสเฟต 0.8-1.2 กรัม โพแทสเซียมฟอสเฟต 1.0-2.0 กรัม แมงกานีสซัลเฟต 0.1-1.5 กรัม แมกนีเซียมซัลเฟต 0.6-1.0 กรัม โซเดียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต 6.5-8.0 กรัม ไดโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟต 2.5-3.5 กรัม แคลเซียมซัลเฟต 10.0-500.0 มิลลิกรัม โซเดียมซัลเฟต 50.0-500.0 มิลลิกรัม เฟอร์รัสซัลเฟต 5.0-30.0 มิลลิกรัม คอปเปอร์ซัลเฟต 1.0-10.0 มิลลิกรัม ซิงค์ซัลเฟต 1.0-10.0 มิลลิกรัม ปรับค่าความเป็นกรด-ด่างเริ่มต้นของอาหารเลี้ยงเชื้อให้อยู่ในช่วง 6.0 ถึง 7.0 และปรับ ปริมาตรอาหารเลี้ยงเชื้อให้ เป็น 1 ลิตร1. The method for producing live lactic acid bacteria cells involves the following steps: a. Preparation of the lactic acid bacteria inoculum by culturing lactic acid bacteria cells in liquid medium formula 1 under conditions of 30 to 37 degrees Celsius for 8 to 12 hours without shaking and/or stirring, to obtain cells with an optical density at 600 nm in the range of 10 to 12. b. Culturing the cells obtained from step a in liquid medium formula 2 under conditions of 30 to 37 degrees Celsius without pH control, stirring, or aeration. During fermentation, lasting 24 to 36 hours, to produce viable lactic acid bacteria cells, a liquid medium formula I contains: 10.0-30.0 g glucose, 0.5-5.0 g yeast extract, 0.5-5.0 g peptone, 0.8-1.2 g diammonium phosphate, 1.0-2.0 g potassium phosphate, 0.1-1.5 g manganese sulfate, 0.6-1.0 g magnesium sulfate, 6.5-8.0 g sodium dihydrogen phosphate, 2.5-3.5 g disodium hydrogen phosphate, 10.0-500.0 mg calcium sulfate, 50.0-500.0 mg sodium sulfate, 5.0-30.0 mg ferrous sulfate, 1.0-10.0 mg copper sulfate, and zinc sulfate. 1.0-10.0 mg. Adjust the initial pH of the culture medium to the range of 6.0 to 7.0 and adjust the volume of the culture medium to 1 liter. The second liquid medium formula consists of: glucose 10.0-30.0 g, yeast extract 2.0-5.0 g, diammonium phosphate 0.8-1.2 g, potassium phosphate 1.0-2.0 g, manganese sulfate 0.1-1.5 g, magnesium sulfate 0.6-1.0 g, sodium dihydrogen phosphate 6.5-8.0 g, disodium hydrogen phosphate 2.5-3.5 g, calcium sulfate 10.0-500.0 mg, sodium sulfate 50.0-500.0 mg, ferrous sulfate 5.0-30.0 mg, copper sulfate 1.0-10.0 mg, zinc sulfate. 1.0-10.0 mg. Adjust the initial pH of the culture medium to the range of 6.0 to 7.0 and adjust the volume of the culture medium to 1 liter.
2. วิธีการผลิตเซลล์มีชีวิตของแบคทีเรียกรดแลคติก ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง การผลิตเซลล์มีชีวิตของ แบคที่เรียกรดแลคติกด้วยการเพาะเลี้ยงในอาหารเหลวสูตรที่สอง ใช้หัวเชื้อ ร้อยละ 2 ถึง 10 โดยปริมาตร ภายใต้สภาวะที่มีอุณหภูมิ 30 ถึง 37 องศาเซลเซียส โดยไม่มีการควบคุมค่าความเป็นกรด-ด่าง ไม่มีการ กวนหรือการจ่ายอากาศในระหว่างการหมัก เป็นเวลา 24 ถึง 36 ชั่วโมง2. Method for producing live lactic acid bacteria cells according to Patent 1, whereby the production of live lactic acid bacteria cells by culturing in a second liquid medium using an inoculum of 2% to 10% by volume under conditions of temperature of 30 to 37 °C, without pH control, and without stirring or aeration during fermentation for 24 to 36 hours.
3. วิธีการผลิตเซลล์มีชีวิตของแบคทีเรียกรดแลคติก ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง แบคทีเรียกรดแลคติก สามารถ เลือกได้อย่างน้อยหนึ่งชนิดจาก Lactobacillus pentosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, และ Bacillus coagulans3. Method for producing live lactic acid bacteria cells according to claim 1, where at least one species of lactic acid bacteria can be selected from Lactobacillus pentosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, and Bacillus coagulans.
4. วิธีการผลิตเซลล์มีชีวิตของแบคที่เรียกรดแลคติก ตามข้อถือสิทธิที่ 5 ที่ซึ่ง แบคทีเรียกรดแลคติกที่ เหมาะสมที่สุดสำหรับการผลิตเซลล์มีชีวิต คือ Lactobacillus pentosus BCC 476474. Method for producing live lactic acid bacteria according to claim 5, whereby the lactic acid bacteria best suited for live cell production is Lactobacillus pentosus BCC 47647.
5. วิธีการผลิตเซลล์มีชีวิตของแบคทีเรียกรดแลคติกตามข้อถือสิทธิที่ 1-6 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง ปริมาณของ เซลล์มีชีวิตของแบคทีเรียกรดแลคติกที่ผลิตได้ อยู่ในช่วง (1.2+0.2)x 1010 ซีเอฟยูต่อมิลลิลิตร5. A method for producing live lactic acid bacteria cells according to any one of the claims 1-6, in which the yield of live lactic acid bacteria cells produced is within the range of (1.2 + 0.2) x 10¹⁰ CFU/ml.