Claims (2)
------21/10/2565------(OCR) 1. กรรมวิธีการผลิตผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก มีขั้นตอนดังนี้(ก) การเตรียมกากฝรั่งและส่วนผสม(ก.1) กากฝรั่ง การเตรียมกากฝรั่งดังนี้ ล้างฝรั่งด้วยน้ำสะอาด แยกเมล็ดออกจากเนื้อ นำเนื้อฝรั่งมาหั่นเป็นชิ้นเล็กๆ แล้วบดให้ละเอียดด้วยเครื่องปั่น จากนั้นบีบน้ำออกจากฝรั่งโดยใช้ผ้าขาวบาง เก็บรักษากากฝรั่งที่อุณหภูมิ 4องศาเซลเซียส จนกระทั่งนำมาใช้ เตรียมกากฝรั่งบดร้อยละ 30 โดยน้ำหนัก(ก.2) ส่วนผสม สำหรับการหมักกากฝรั่งประกอบด้วย กากฝรั่งบดจากข้อ (ก.1) 300 กรัม น้ำ 700 กรัม และน้ำตาลซูโครส 20 กรัม หรือ 60 กรัม อย่างใดอย่างหนึ่ง นำส่วนผสมที่เตรียมมาให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 75 องศาเซลเซียส นาน 15 นาที ทิ้งให้เย็นที่อุณหภูมิห้อง แล้วปรับพีเอชของส่วนผสม ให้เท่ากับ 6.0 โดยใช้สารละลายแอมโมเนีย (NH3) ความเข้มข้นร้อยละ 0.5 โดยปริมาตร ที่ปลอดเชื้อปนเปื้อน(ข) การเตรียมอาหารเพาะเลี้ยง และการเตรียมกล้าเชื้อ(ข.1) อาหารเพาะเลี้ยง ใช้อาหารเหลวสูตร แมน, โรโกซา และ ชาร์ป องค์ประกอบของอาหาร (กรัมต่อลิตร)มีดังนี้ เนื้อสกัด (meat extract) 10, เปปโทน (peptone) 10, ยีสต์สกัด (yeast extract) 5, กลูโคส (glucose)20, พอลิซอร์เบต 80 (Polysorbate 80), โซเดียมแอซีเตท (sodium acetate) 5, ได-แอมโมเนียม ไฮโดรเจนซีเตรท (di-ammonium hydrogen citrate) 2, แมงกานีสซัลเฟตโมโนไฮเดรท (MnSO4H2O) 0.055,แมกนีเซียมซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (MgSO47H2O) 0.2, ไดโปแตสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟต (K2HPO4) 2 และโปแตสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (KH2PO4) 2.5 นึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาที ปรับพีเอชของอาหารเพาะเลี้ยงเท่ากับ 6.0 หลังนึ่งฆ่าเชื้อ โดยใช้กรดไฮโดรคลอริก (HCl) ความเข้มข้น 0.1 โมลาร์ หรือโซเดียมไฮดรอกไซด์ (NaOH) ความเข้มข้น 0.1 โมลาร์ ที่ปลอดเชื้อ(ข.2) กล้าเชื้อ เลี้ยงเชื้อ L. plantarum WU-P19 ในอาหารเหลวแมน, โรโกซา และ ชาร์ป (de Man,Rogosa and Sharpe : MRS) ปริมาตร 250 มิลลิลิตร ที่มีค่าพีเอชเริ่มต้น 6.0 ที่บรรจุในขวดดูแรน (Duranbottle) ปริมาตร 250 มิลลิลิตร บ่มเลี้ยงในภาวะนิ่ง (ไม่เขย่าภาชนะเพาะเลี้ยง และไม่เติมอากาศ) ที่อุณหภูมิ 37องศาเซลเซียส นาน 18 ชั่วโมง โดยควบคุมค่าพี่เอชในระหว่างการเลี้ยงเชื้อให้เท่ากับ 6.0 ด้วยโซเดียมไฮดรอกไซด์ความเข้มข้น 6 โมลาร์ ที่ปลอดเชื้อ (ปรับพีเอช ทุก ๆ 2 ชม. เพื่อควบคุมให้ค่าพีเอชคงที่เท่ากับ 6.0) เมื่อครบเวลานำมาปั่นเหวี่ยงเพื่อแยกเก็บเซลล์ที่ความเร็ว 4,500 รอบต่อนาที อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส นาน 20 นาที ล้างเซลล์ 2 ครั้งด้วยสารละลายโซเดียมคลอไรด์ร้อยละ 0.85 ปรับความขุ่นของเชื้อด้วยเครื่องสเปกโทรโฟโตมิเตอร์ที่ความยาวคลื่น 600 นาโนเมตร ให้เท่ากับ 200 ด้วยสารละลายโซเดียมคลอไรด์ร้อยละ 0.85(ค) การเตรียมกรดไลโนเลอิกและไคโตซาน(ค.1) กรดไลโนเลอิก การเตรียมกรดไลโนเลอิกความเข้มข้น 100 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตรกระทำได้ดังนี้ เติมน้ำกลั่นที่มีพอลิซอร์เบต 80 (Polysorbate 80) ความเข้มข้นร้อยละ 1 (โดยปริมาตร) ปริมาตร 88.9 มิลลิลิตร ลงในกรดไลโนเลอิก 10 กรัม ทำให้สารอยู่ในรูปสารแขวนลอยหรืออิมัลชั่น แล้วทำให้ปลอดเชื้อด้วยการกรองสารแขวนลอยผ่านเมมเบรนขนาด 0.45 ไมโครเมตร ซึ่งอิมัลชั่นที่เตรียมได้ถูกเก็บรักษาในภาชนะทึบแสงที่อุณหภูมิ-20 องศาเซลเซียส(ค.2) ไคโตซาน การเตรียมไคโตซานดังนี้ ชั่งไคโตซาน 1 กรัม (190-310 KDa, 75-85% deacetylation)ผสมกับน้ำกลั่นที่มีกรดแอซีติกความเข้มข้นร้อยละ 1 (โดยปริมาตร) ปริมาตร 100 มิลลิลิตร กวนให้สารละลายอย่างสมบูรณ์ ปรับพีเอชสารละลายเท่ากับ 6.0 ด้วยโซเดียมไฮดรอกไซด์ ความเข้มข้น 4 โมลาร์ นึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาที เก็บไคโตซานที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส(ง) ส่วนผสมสำหรับการหมักกากฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก(ง.1) ใช้ส่วนผสมที่เตรียมตาม (ก.2) ปริมาณ 1 กิโลกรัม (โดยน้ำหนัก) และกล้าเชื้อ L. plantarumWU-P19 ที่เตรียมจากข้อ (ข.2) ปริมาตร 5 มิลลิลิตร (โดยปริมาตร) เติมลงในภาชนะบรรจุสเตนเลส ที่ผ่านการทำลายเชื้อปนเปื้อน ที่มีความจุ 2000 มิลลิลิตร คลุกเคล้าให้ (ก.2) ผสมกับ (ข.2) แล้วทำการหมักในภาวะนิ่งที่ 37องศาเซลเซียส นาน 16 ชั่วโมง จากนั้นเติมไคโตซานที่เตรียมจาก (ค.2) 6 มิลลิลิตร (ความเข้มข้นสุดท้ายของไคโตซานเท่ากับร้อยละ 0.006) ลงในภาชนะบรรจุ คลุกเคล้าให้ (ค.2) ผสมกับส่วนผสมที่อยู่ในภาชนะหมัก แล้วบ่มเลี้ยงในภาวะนิ่ง ที่ 37 องศาเซลเซียส อีก 2 ชั่วโมง จึงเติมกรดไลโนเลอิกที่เตรียมจาก (ค.1) 12 มิลลิลิตร(ความเข้มข้นสุดท้ายของกรดไลโนเลอิกเท่ากับ 600 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร) ลงไป คลุกเคล้าให้ (ค.1) ผสมกับส่วนผสมที่อยู่ในภาชนะหมัก แล้วบ่มเลี้ยงในภาวะนิ่ง ที่ 37 องศาเซลเซียส หยุดการหมักเมื่อค่าพีเอชของกากฝรั่งหมักอยู่ในช่วง 3.2-3.5 ซึ่งใช้เวลาหมักรวมทั้งหมด 36-48 ชั่วโมง ทั้งนี้ขึ้นกับปริมาณน้ำตาลซูโครสที่เติมในส่วนผสม(ง.2) ใช้ส่วนผสมที่เตรียมตาม (ก.2) ปริมาณ 1 กิโลกรัม (โดยน้ำหนัก) และกล้าเชื้อ L. plantarum WU-P19 ที่เตรียมจากข้อ (ข.2) ปริมาตร 5 มิลลิลิตร (โดยปริมาตร) เติมลงในภาชนะบรรจุสเตนเลส ที่ผ่านการทำลายเชื้อปนเปื้อน ที่มีความจุ 2000 มิลลิลิตร คลุกเคล้าให้ (ก.2) ผสมกับ (ข.2) ทำการหมักในภาวะนิ่ง ที่ 37 องศาเซลเซียส หยุดการหมักเมื่อค่าพีเอชของกากฝรั่งหมักอยู่ในช่วง 3.2-3.5 ซึ่งใช้เวลาหมักรวมทั้งหมด 36-48 ชั่วโมงทั้งนี้ขึ้นกับปริมาณน้ำตาลซูโครสที่เติมในส่วนผสมดังแสดงใน (ก.2) จากนั้นเติมเชื้อ L. plantorum WU-P19 ที่ผ่านการกระตุ้นให้สร้างคอนจูเกตไลโนเลอิก ปริมาณ 1.5 กรัมน้ำหนักเซลล์เปียก (คิดเป็นน้ำหนักเซลล์แห้ง 0.25กรัม) ลงในฝรั่งหมักและคลุกเคล้าให้เข้ากัน(จ) การผลิตเยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก(จ.1) ส่วนผสมสำหรับการผลิตเยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ดังนี้ กากฝรั่งหมักจากข้อ (ง.1) หรือข้อ(ง.2) อย่างใดอย่างหนึ่ง หนัก 1 กิโลกรัมน้ำหนักเปียก น้ำเชื่อมกลูโคส (แบะแซ) 110 กรัม น้ำตาลซูโครส200-700 กรัม เจลาติน (ชนิดผง) 40-83 กรัม(จ.2) การขึ้นรูปเยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก มีขั้นตอนดังนี้(จ.2.1) เติมกากฝรั่งหมักจากข้อ (ง.1) หรือข้อ (ง.2) อย่างใดอย่างหนึ่ง 1 กิโลกรัมน้ำหนักเปียก ลงในกระทะทองเหลือง นำไปตั้งไฟโดยปรับระดับไพปานกลาง(จ.2.2) ผสมส่วนผสมตามสูตรข้อ (จ.1) ได้แก่ น้ำตาลซูโครส เจลาติน และกรดซิตริก ให้เข้ากัน และค่อยๆ เติมลงในกากฝรั่งหมักในข้อ (จ.2.1) คนให้ส่วนผสมละลาย(จ.2.3) เติมน้ำเชื่อมกลูโคส ตามสูตรข้อ (จ.1) คนให้ส่วนผสมละลาย(จ.2.4) เติมสีผสมอาหาร และกลิ่นน้ำฝรั่ง ตามสูตรข้อ (จ.1)(จ.2.5) กวนจนส่วนผสมจับตัวกัน โดยใช้ไฟค่อนข้างอ่อน แล้วยกออกจากความร้อน(จ.2.6) นำมาใส่ภาชนะสำหรับขึ้นรูป ทิ้งไว้ให้คงตัวที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส นาน 1-2 ชั่วโมง หรือทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง นาน 4-6 ชั่วโมง อย่างใดอย่างหนึ่ง จากนั้นตัดแต่งให้มีรูปร่างต่างๆ ได้แก่ รูปทรงเรขาคณิต(จ.2.7) คลุกเคล้าเยลลี่แห้งฝรั่งจากข้อ (จ.2.6) ด้วยแป้งมันผสมน้ำตาลทรายละเอียด โดยใช้แป้งมัน 1ส่วนโดยน้ำหนัก ต่อ น้ำตาลทรายละเอียด 1 ส่วนโดยน้ำหนัก จะได้ผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ซึ่งมีคอนจูเกตไลโนเลอิก 1 ช่วง 0.4-4.3 ไมโครกรัมต่อกรัมเยลลี่แห้ง คอนจูเกตไลโนเลอิก2 ช่วง 0.4-2.3ไมโครกรัมต่อกรัมเยลลี่แห้ง และกรดไโนเลอิก 58-278 ไมโครกรัมต่อกรัมเยลลี่แห้ง2. กรรมวิธีการผลิตผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งส่วนสมดังกล่าวสามารถประกอบเพิ่มด้วย กรดซิตริก (ชนิดผง) 0-5 กรัม สีผสมอาหาร 0-2 มิลลิลิตร กลิ่นฝรั่ง 0-3 มิลลิลิตร โดยเติมหลังจากที่เติมน้ำเชื่อมกลูโคส ในข้อ (จ.2.3) คนให้ส่วนผสมละลาย ------------ ------25/11/2563------(OCR)------October 21, 2022------(OCR) 1. The process for producing dried guava jelly fortified with conjugated linoleic acid is as follows: (a) Preparation of guava pulp and ingredients (a.1) Guava pulp: Prepare the guava pulp as follows: Wash the guavas with clean water, separate the seeds from the pulp, cut the guava pulp into small pieces, and grind it finely with a blender. Then squeeze the juice out of the guava using cheesecloth. Store the guava pulp at 4 degrees Celsius until use. Prepare 30% by weight of ground guava pulp. (a.2) Ingredients: For fermenting the guava pulp, prepare 300 grams of ground guava pulp from step (a.1), 700 grams of water, and 20 grams or 60 grams of sucrose, whichever is available. Heat the prepared mixture at 75 degrees Celsius for 15 minutes. Let it cool to room temperature, then adjust the pH of the mixture to 6.0 using a 0.5% by volume sterile ammonia (NH3) solution. (b) Preparation of culture medium And for preparing starter cultures (B.1), the culture medium used was the Man, Rogosa, and Sharp liquid medium formulas. The composition of the medium (grams per liter) is as follows: meat extract 10, peptone 10, yeast extract 5, glucose 20, polysorbate 80, sodium acetate 5, diammonium... Di-ammonium hydrogen citrate (2%), manganese sulfate monohydrate (MnSO4H2O) (0.055%), magnesium sulfate heptahydrate (MgSO47H2O) (0.2%), dipotassium hydrogen phosphate (K2HPO4) (2%), and potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) (2.5%) were sterilized by autoclaving at 121°C for 15 minutes. The pH of the culture medium was adjusted to 6.0 after autoclaving. Using sterile 0.1 molar hydrochloric acid (HCl) or 0.1 molar sodium hydroxide (NaOH) (b.2), the L. plantarum WU-P19 starter culture was grown in 250 ml of de Man, Rogosa and Sharpe (MRS) liquid medium with an initial pH of 6.0, contained in a 250 ml Duran bottle, and incubated in a static state (without shaking the culture container). and without aeration) at 37°C for 18 hours, controlling the pH value during cultivation to be equal to 6.0 with sterile 6 M sodium hydroxide (adjust pH every 2 hours to maintain a constant pH value of 6.0). After the time is up, centrifuge to separate and collect cells at a speed of 4,500 rpm at 4°C for 20 minutes. Wash the cells twice with a 0.85% sodium chloride solution. Adjust the turbidity of the culture with a spectrophotometer at a wavelength of 600 nm to be equal to 200 with a 0.85% sodium chloride solution.(c) Preparation of linoleic acid and chitosan(c.1) Linoleic acid The preparation of linoleic acid at a concentration of 100 mg/ml can be done as follows: Add 88.9 ml of distilled water containing 1% (by volume) polysorbate 80 to 10 g of linoleic acid, forming a suspension or emulsion. Sterilize by filtrating the suspension through a 0.45 µm membrane. The prepared emulsion was stored in an opaque container at -20 °C (C.2). Chitosan: Prepare chitosan as follows: Weigh 1 g of chitosan (190-310 KDa, 75-85% deacetylation) and mix with 100 ml of distilled water containing 1% (by volume) acetic acid. Stir thoroughly until the solution is completely dissolved. Adjust the pH of the solution to 6.0 with 4 molar sodium hydroxide. Sterilize at 121 °C for 15 minutes. Store the chitosan at 4 °C (d). Mixture for fermentation of guava pomace fortified with conjugated linoleic acid (d.1). Use 1 kg (by weight) of the mixture prepared according to (a.2) and 5 ml (by volume) of the L. plantarum WU-P19 starter culture prepared from (b.2). Add to a sterilized stainless steel container with a capacity of 2000 ml. Mix (a.2) with (b.2) and ferment in a static environment at 37 °C for 16 hours. Then add 6 ml of the chitosan prepared from (c.2) (final concentration of chitosan = 0.006%) to the container. Mix (c.2) with the mixture in the fermentation container. Then, incubate in a static state at 37°C for another 2 hours. Add 12 ml of the linoleic acid prepared from (C.1) (the final concentration of linoleic acid is 600 mcg/ml). Mix (C.1) thoroughly with the mixture in the fermentation container and incubate in a static state at 37°C. Stop fermentation when the pH of the fermented guava pomace is in the range of 3.2-3.5, which takes a total fermentation time of 36-48 hours, depending on the amount of sucrose added to the mixture (D.2). Use 1 kg (by weight) of the mixture prepared according to (A.2) and 5 ml (by volume) of the L. plantarum WU-P19 starter culture prepared from (B.2) and add it to the stainless steel container. The fermented guava pulp, with a capacity of 2000 ml, is mixed with (a.2) and (b.2). Fermentation is carried out in a stationary environment at 37°C. Fermentation is stopped when the pH of the fermented guava pulp is in the range of 3.2-3.5, which takes a total fermentation time of 36-48 hours, depending on the amount of sucrose added to the mixture as shown in (a.2). Then, 1.5 g of wet weight (equivalent to 0.25 g of dry weight) of L. plantorum WU-P19, which has been stimulated to produce conjugated linoleic acid, is added to the fermented guava pulp and mixed thoroughly. (e) Production of Conjugated Linoleic Acid-Free Guava Jelly (e.1) Ingredients for the production of conjugated linoleic acid-free guava jelly are as follows: 1 kg wet weight of fermented guava pulp from either (d.1) or (d.2). 110 g glucose syrup (corn syrup), 200-700 g sucrose sugar, 40-83 g gelatin (powder) (J.2). The process for shaping conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly is as follows (J.2.1): Add 1 kg wet weight of fermented guava pulp from either step (D.1) or step (D.2) into a brass pan. Heat over medium heat (J.2.2). Mix the ingredients according to formula (J.1), namely sucrose sugar, gelatin, and citric acid, until well combined, and gradually add to the fermented guava pulp in step (J.2.1), stirring until the mixture dissolves (J.2.3). Add glucose syrup according to formula (J.1) and stir until the mixture dissolves (J.2.4). Add food coloring and guava flavoring according to formula (J.1) (J.2.5). Stir until the mixture thickens over relatively low heat, then remove from heat (J.2.6). Pour into molding containers. Leave to stabilize at 4°C for 1-2 hours or at room temperature for 4-6 hours, whichever is better. Then cut into various shapes, including geometric shapes (J.2.7). Mix the dried guava jelly from step (J.2.6) with tapioca starch mixed with granulated sugar, using a ratio of 1 part tapioca starch by weight to 1 part granulated sugar by weight. This will yield a dried guava jelly product fortified with conjugated linoleic acid, containing conjugated linoleic acid 1 range 0.4-4.3 mcg/g dry jelly, conjugated linoleic acid 2 range 0.4-2.3 mcg/g dry jelly, and linoleic acid 58-278 mcg/g dry jelly. 2. Production method of dried guava jelly product fortified with conjugated linoleic acid. According to claim 1, the mixture may be further composed of 0-5 g of citric acid (powder), 0-2 ml of food coloring, and 0-3 ml of guava flavoring, added after adding the glucose syrup in clause (J.2.3), and stirred until the mixture dissolves. ------------ ------25/11/2020------(OCR)
1. กรรมวิธีการผลิตผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก มีขั้นตอนดังนี้(ก) การเตรียมกากฝรั่งและส่วนผสม (ก.1) กากฝรั่ง การเตรียมกากฝรั่งดังนี้ ล้างฝรั่งด้วยนํ้าสะอาด แยกเมล็ดออกจากเนื้อ นำเนื้อฝรั่งมาหั่นเป็นชิ้นเล็กๆ แล้วบดให้ละเอียดด้วยเครื่องปั่น จากนั้นบีบนํ้าออกจากฝรั่งโดยใช้ผ้าขาวบาง เก็บรักษากากฝรั่งที่อุณหภูมิ 4องศาเซลเซียส จนกระทั่งนำมาใช้ เตรียมกากฝรั่งบดร้อยละ 30 โดยนํ้าหนัก (ก.2) ส่วนผสม สำหรับการหมักกากฝรั่งประกอบด้วย กากฝรั่งบดจากข้อ (ก.1) 300 กรัม นํ้า 700 กรัม และน้ำตาลซูโครส 20 กรัม หรือ 60 กรัม อย่างใดอย่างหนึ่ง นำส่วนผสมที่เตรียมมาให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 75 องศาเซลเซียส นาน 15 นาที ทิ้งให้เย็นที่อุณหภูมิห้อง แล้วปรับพีเอชของส่วนผสม ให้เท่ากับ 6.0 โดยใช้สารละลายแอมโมเนีย (NH3) ความเข้มข้นร้อยละ 0.5 โดยปริมาตร ที่ปลอดเชื้อปนเปื้อน(ข) การเตรียมอาหารเพาะเลี้ยง และการเตรียมกล้าเชื้อ (ข.1) อาหารเพาะเลี้ยง ใช้อาหารเหลวสูตร แมน, โรโกซา และ ชาร์ป องค์ประกอบของอาหาร (กรัมต่อลิตร)มีดังนี้ เนื้อสกัด (meat extract) 10, เปปโทน (peptone) 10, ยีสต์สกัด (yeast extract) 5, กลูโคส (glucose)20, พอลิซอร์เบต 80 (Polysorbate 80), โซเดียมแอซีเตท (sodium acetate) 5, ได-แอมโมเนียม ไฮโดรเจนซีเตรท (di-ammonium hydrogen citrate) 2, แมงกานีสซัลเฟตโมโนไฮเดรท (MnS04-H20) 0.055,แมกนีเซียมซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (MgS04-7H20) 0.2, ไดโปแตสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟต (K2HP04) 2 และโปแตสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (KH2PO4) 2.5 นึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาที ปรับพีเอชของอาหารเพาะเลี้ยงเท่ากับ 6.0 หลังนึ่งฆ่าเชื้อ โดยใช้กรดไฮโดรคลอริก (HCl) ความเข้มข้น 0.1 โมลาร์ หรือโซเดียมไฮดรอกไซด์ (NaOH) ความเข้มข้น 0.1 โมลาร์ ที่ปลอดเชื้อ (ข.2) กล้าเชื้อ เลี้ยงเชื้อ L. piontarum WU-P19 ในอาหารเหลวแมน, โรโกจา และ ชาร์ป (de Man,Rogosa and Sharpe : MRS) ปริมาตร 250 มิลลิลิตร ที่มีค่าพีเอชเริ่มต้น 6.0 ที่บรรจุในขวดดูแรน (Duranbottle) ปริมาตร 250 มิลลิลิตร บ่มเลี้ยงในภาวะนึ่ง (ไม่เขย่าภาขนะเพาะเลี้ยง และไม่เติมอากาศ) ที่อุณหภูมิ 37องศาเซลเซียส นาน 18 ชั่วโมง โดยควบคุมค่าพีเอชในระหว่างการเลี้ยงเชื้อให้เท่ากับ 6.0 ด้วยโซเดียมไฮดรอกไซด์ความเข้มข้น6โมลาร์ที่ปลอดเชื้อ(ปรับพีเอชทุกๆ2ซม.เพื่อควบคุมให้ค่าพีเอชคงที่เท่ากับ6.0)เมื่อครบเวลานำมาปั่นเหวี่ยงเพื่อแยกเก็บเซลล์ที่ความเร็ว 4,500 รอบต่อนาที อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส นาน 20 นาที ล้างเซลล์ 2 ครั้งด้วยสารละลายโซเดียมคลอไรด์ร้อยละ 0.85 ปรับความขุ่นของเชื้อด้วยเครื่องสเปกโทรโฟโตมิเตอร์ที่ความยาวคลื่น 600 นาโนเมตร ให้เท่ากับ 200 ด้วยสารละลายโซเดียมคลอไรด์ร้อยละ 0.85(ค) การเตรียมกรดไลโนเลอิกและไคโตซาน (ค.1) กรดไลโนเลอิก การเตรียมกรดไลโนเลอิกความเข้มข้น 100 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตรกระทำได้ดังนี้ เติมนํ้ากลั่นที่มีพอลิซอร์เบต 80 (Polysorbate 80) ความเข้มข้นร้อยละ 1 (โดยปริมาตร) ปริมาตร 88.9 มิลลิลิตร ลงในกรดไลโนเลอิก 10 กรัม ทำให้สารอยู่ในรูปสารแขวนลอยหรืออิมัลชั่น แล้วทำให้ปลอดเชื้อด้วยการกรองสารแขวนลอยผ่านเมมเบรนขนาด 0.45 ไมโครเมตร ซึ่งอิมัลชั่นที่เตรียมได้ถูกเก็บรักษาในภาชนะทึบแสงที่อุณหภูมิ-20 องศาเซลเซียส (ค.2) ไคโตซาน การเตรียมไคโตซานดังนี้ ชั่งไคโตซาน 1 กรัม (190-310 kDa, 75-85% deacetylation)ผสมกับนํ้ากลั่นที่มีกรดแอซีติกความเข้มข้นร้อยละ 1 (โดยปริมาตร) ปริมาตร 100 มิลลิลิตร กวนให้สารละลายอย่างสมบูรณ์ ปรับพีเอชสารละลายเท่ากับ 6.0 ด้วยโซเดียมไฮดรอกไซด์ ความเข้มข้น 4โมลาร์ นึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาที เก็บไคโตซานที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส(ง) ส่วนผสมสำหรับการหมักกากฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก (ง.1) ใช้ส่วนผสมที่เตรียมตาม (ก.2)ปริมาณ 1 กิโลกรัม (โดยนํ้าหนัก) และกล้าเชื้อ L. plantorumWU-P19 ที่เตรียมจากข้อ (ข.2) ปริมาตร 5 มิลลิลิตร (โดยปริมาตร) เติมลงในภาขนะบรรจุสเตนเลส ที่ผ่านการทำลายเชื้อปนเปื้อน ที่มีความจุ 2000 มิลลิลิตร คลุกเคล้าให้ (ก.2) ผสมกับ (ข.2) แล้วทำการหมักในภาวะนิ่งที่ 37องศาเซลเซียส นาน 16 ชั่วโมง จากนั้นเติมไคโตซานที่เตรียมจาก (ค.2) 6 มิลลิลิตร (ความเข้มข้นสุดท้ายของไคโตซานเท่ากับร้อยละ 0.006) ลงในภาชนะบรรจุ คลุกเคล้าให้ (ค.2) ผสมกับส่วนผสมที่อยู่ในภาชนะหมัก แล้วปมเลี้ยงในภาวะนิ่ง ที่ 37 องศาเซลเซียส อีก 2 ชั่วโมง จึงเติมกรดไลโนเลอิกที่เตรียมจาก (ค.1) 12 มิลลิลิตร(ความเข้มข้นสุดท้ายของกรดไลโนเลอิกเท่ากับ 600 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร)ลงไปคลุกเคล้าให้(ค.1)ผสมกับส่วนผสมที่อยู่ในภาชนะหมัก แล้วบ่มเลี้ยงในภาวะนิ่ง ที่ 37 องศาเซลเซียส หยุดการหมักเมื่อค่าพีเอชของกากฝรั่งหมักอยู่ในช่วง 3.2-3.5 ซึ่งใช้เวลาหมักรวมทั้งหมด 36-48 ชั่วโมง ทั้งนี้ขึ้นกับปริมาณนํ้าตาลซูโครสที่เติมในส่วนผสม (ง.2) ใช้ส่วนผสมที่เตรียมตาม (ก.2) ปริมาณ 1 กิโลกรัม (โดยนํ้าหนัก) และกล้าเชื้อ L. plantarum WU-P19 ที่เตรียมจากข้อ (ข.2) ปริมาตร 5 มิลลิลิตร (โดยปริมาตร) เติมลงในภาชนะบรรจุสเตนเลส ที่ผ่านการทำลายเชื้อปนเปื้อน ที่มีความจุ 2000 มิลลิลิตร คลุกเคล้าให้ (ก.2) ผสมกับ (ข.2) ทำการหมักในภาวะนิ่ง ที่ 37 องศาเซลเซียส หยุดการหมักเมื่อค่าพีเอซของกากฝรั่งหมักอยู่ในข่วง 3.2-3.5 ซึ่งใช้เวลาหมักรวมทั้งหมด 36-48 ชั่วโมงทั้งนี้ขึ้นกับปริมาณนํ้าตาลซูโครสที่เติมในส่วนผสมดังแสดงใน (ก.2) จากนั้นเติมเชื้อ L. plantorum WU-P19 ที่ผ่านการกระตุ้นให้สร้างคอนจูเกตไลโนเลอิก ปริมาณ 1.5 กรัมนํ้าหนักเซลล์เปียก (คิดเป็นน้ำหนักเซลล์แห้ง 0.25กรัม) ลงในฝรั่งหมักและคลุกเคล้าให้เข้ากัน(จ) การผลิตเยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก (จ.1) ส่วนผสมสำหรับการผลิตเยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ดังนี้ กากฝรั่งหมักจากข้อ (ง.1) หรือข้อ(ง.2) อย่างใดอย่างหนึ่ง หนัก 1 กิโลกรัมนํ้าหนักเปียก นํ้าเชื่อมกลูโคส (แบะแซ) 110 กรัม นํ้าตาลซูโครส200-700 กรัม เจลาติน (ชนิดผง) 40-83 กรัม (จ.2) การขึ้นรูปเยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก มีขั้นตอนดังนี้ (จ.2.1) เติมกากฝรั่งหมักจากข้อ (ง.1)หรือข้อ(ง.2)อย่างใดอย่างหนึ่ง 1กิโลกรัมนํ้าหนักเปียกลงในกระทะทองเหลือง นำไปตั้งไฟโดยปรับระดับไฟปานกลาง (จ.2.2) ผสมส่วนผสมตามสูตรข้อ (จ.1)ได้แก่ นํ้าตาลซูโครส เจลาติน และกรดซิตริกให้เข้ากัน และค่อยๆ เติมลงในกากฝรั่งหมักในข้อ (จ.2.1) คนให้ส่วนผสมละลาย (จ.2.3) เติมนํ้าเชื่อมกลูโคส ตามสูตรข้อ (จ.1) คนให้ส่วนผสมละลาย (จ.2.5) กวนจนส่วนผสมจับตัวกัน โดยใช้ไฟค่อนข้างอ่อน แล้วยกออกจากความร้อน (จ.2.6) นำมาใส่ภาชนะสำหรับขึ้นรูป ทิ้งไว้ให้คงตัวที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส นาน 1-2 ชั่วโมง หรือทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง นาน 4-6 ชั่วโมง อย่างใดอย่างหนึ่ง จากนั้นตัดแต่งให้มีรูปร่างต่างๆ ได้แก่ รูปทรงเรขาคณิต (จ.2.7) คลุกเคล้าเยลลี่แห้งฝรั่งจากข้อ (จ.2.6) ด้วยแป้งมันผสมน้ำตาลทรายละเอียด โดยใช้แป้งมัน 1ส่วนโดยนํ้าหนัก ต่อ นํ้าตาลทรายละเอียด 1 ส่วนโดยน้ำหนัก จะได้ผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ซึ่งมีคอนจูเกตไลโนเลอิก1 ช่วง 0.4-4.3 ไมโครกรัมต่อกรัมเยลลี่แห้ง คอนจูเกตไลโนเลอิก2 ช่วง 0.4-2.3ไมโครกรัมต่อกรัมเยลลี่แห้ง และกรดไลโนเลอิก 58-278 ไมโครกรัมต่อกรัมเยลลี่แห้ง1. The process for producing conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly is as follows: (a) Preparation of guava pulp and ingredients (a.1) Guava pulp: Prepare the guava pulp as follows: Wash the guavas with clean water, separate the seeds from the pulp, cut the guava pulp into small pieces, and grind it finely with a blender. Then squeeze the juice out of the guava using cheesecloth. Store the guava pulp at 4 degrees Celsius until use. Prepare 30% by weight of ground guava pulp. (a.2) Ingredients: For fermenting the guava pulp, prepare 300 grams of ground guava pulp from step (a.1), 700 grams of water, and 20 grams or 60 grams of sucrose. Heat the prepared mixture at 75 degrees Celsius for 15 minutes. Let it cool to room temperature, then adjust the pH of the mixture to 6.0 using a sterile 0.5% by volume ammonia (NH3) solution. (b) Preparation of culture medium and starter culture (b.1) Culture medium Use the Man, Rogosa, and Sharp liquid food formulas. The food composition (grams per liter) is as follows: meat extract 10, peptone 10, yeast extract 5, glucose 20, polysorbate 80, sodium acetate 5, diammonium... Di-ammonium hydrogen citrate (2%), manganese sulfate monohydrate (MnSO4-H2O) (0.055%), magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4-7H2O) (0.2%), dipotassium hydrogen phosphate (K2HPO4) (2%), and potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) (2.5%) were sterilized by autoclaving at 121°C for 15 minutes. The pH of the culture medium was adjusted to 6.0 after autoclaving. Using sterile 0.1 molar hydrochloric acid (HCl) or 0.1 molar sodium hydroxide (NaOH) (B.2), cultivate the L. piontarum WU-P19 starter culture in 250 ml of de Man, Rogosa and Sharpe (MRS) liquid medium with an initial pH of 6.0, contained in a 250 ml Duran bottle. Incubate under sterile conditions (do not shake the culture container). and without aeration) at 37°C for 18 hours, controlling the pH value during cultivation to be equal to 6.0 with sterile 6 molar sodium hydroxide (adjust pH every 2 cm to maintain a constant pH value of 6.0). After the time is up, centrifuge to separate and collect cells at a speed of 4,500 rpm at 4°C for 20 minutes. Wash the cells twice with a 0.85% sodium chloride solution. Adjust the turbidity of the culture with a spectrophotometer at a wavelength of 600 nm to be equal to 200 with a 0.85% sodium chloride solution. (c) Preparation of linoleic acid and chitosan (c.1) Linoleic acid The preparation of linoleic acid at a concentration of 100 mg/ml can be done as follows: Add 88.9 ml of distilled water containing 1% (by volume) polysorbate 80 to 10 g of linoleic acid, forming a suspension or emulsion. Sterilize by filtrating the suspension through a 0.45 µm membrane. The prepared emulsion was stored in an opaque container at -20 °C (C.2). Chitosan: Prepare chitosan as follows: Weigh 1 g of chitosan (190-310 kDa, 75-85% deacetylation) and mix with 100 ml of distilled water containing 1% (by volume) acetic acid. Stir thoroughly until the solution is completely dissolved. Adjust the pH of the solution to 6.0 with 4 molar sodium hydroxide. Sterilize at 121 °C for 15 minutes. Store the chitosan at 4 °C (d). Mixture for fermentation of guava pomace fortified with conjugated linoleic acid (d.1). Use 1 kg (by weight) of the mixture prepared according to (a.2) and 5 ml (by volume) of the L. plantorum WU-P19 starter culture prepared from (b.2). Add to a sterilized stainless steel container with a capacity of 2000 ml. Mix (a.2) with (b.2) and ferment in a static environment at 37 °C for 16 hours. Then add 6 ml of the chitosan prepared from (c.2) (final concentration of chitosan = 0.006%) to the container. Mix (c.2) with the mixture in the fermentation container. Then, incubate the mixture in a static state at 37°C for another 2 hours. Add 12 ml of the linoleic acid prepared from (C.1) (the final concentration of linoleic acid is 600 mcg/ml) and mix (C.1) thoroughly with the mixture in the fermentation container. Incubate in a static state at 37°C. Stop fermentation when the pH of the fermented guava pomace is in the range of 3.2-3.5, which takes a total of 36-48 hours, depending on the amount of sucrose added to the mixture. (D.2) Use 1 kg (by weight) of the mixture prepared according to (A.2) and 5 ml (by volume) of the L. plantarum WU-P19 starter culture prepared from (B.2) and add it to the stainless steel container. The fermented guava pulp, with a capacity of 2000 ml, is mixed with (a.2) and (b.2). Fermentation is carried out in a stationary environment at 37°C. Fermentation is stopped when the pH of the fermented guava pulp is in the range of 3.2-3.5, which takes a total fermentation time of 36-48 hours, depending on the amount of sucrose added to the mixture as shown in (a.2). Then, 1.5 g wet weight (equivalent to 0.25 g dry cell weight) of L. plantorum WU-P19, which has been stimulated to produce conjugated linoleic acid, is added to the fermented guava pulp and mixed thoroughly. (e) Production of Conjugated Linoleic Acid-Free Guava Jelly (e.1) Ingredients for the production of conjugated linoleic acid-free guava jelly are as follows: 1 kg wet weight of fermented guava pulp from either (d.1) or (d.2). Glucose syrup (corn syrup) 110 g, sucrose sugar 200-700 g, gelatin (powder) 40-83 g (J.2). The process for shaping conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly is as follows: (J.2.1) Add 1 kg wet weight of fermented guava pulp from either (D.1) or (D.2) into a brass pan. Heat over medium heat. (J.2.2) Mix the ingredients according to formula (J.1), namely sucrose sugar, gelatin, and citric acid, together and gradually add to the fermented guava pulp in (J.2.1), stirring until the mixture dissolves. (J.2.3) Add glucose syrup according to formula (J.1) and stir until the mixture dissolves. (J.2.5) Stir until the mixture thickens, using relatively low heat, then remove from heat. (J.2.6) Pour into molding containers. Leave to set at 4°C for 1-2 hours or at room temperature for 4-6 hours, whichever is better. Then cut into various shapes, including geometric shapes (J.2.7). Mix the dried guava jelly from step (J.2.6) with tapioca starch mixed with granulated sugar, using a ratio of 1 part tapioca starch by weight to 1 part granulated sugar by weight. This will yield a dried guava jelly product fortified with conjugated linoleic acid, containing conjugated linoleic acid 1 in the range of 0.4-4.3 mcg per gram of dried jelly, conjugated linoleic acid 2 in the range of 0.4-2.3 mcg per gram of dried jelly, and linoleic acid 58-278 mcg per gram of dried jelly.
2. กรรมวิธีการผลิตผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งส่วนสมดังกล่าวสามารถประกอบเพิ่มด้วย กรดชิตริก (ชนิดผง)0-5 กรัม สีผสมอาหาร 0-2มิลลิลิตร กลิ่นฝรั่ง 0-3 มิลลิลิตรโดยเติมหลังจากที่เติมนํ้าเชื่อมกลูโคส ในข้อ (จ.2.3) คนให้ส่วนผสมละลาย ------------ ------17/06/2562------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 3 หน้าข้อถือสิทธิ1. กรรมวิธีการผลิตผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก มีขั้นตอนดังนี้(ก) การเตรียมกากฝรั่งและส่วนผสม (ก.1) กากฝรั่ง การเตรียมกากฝรั่งดังนี้ ล้างฝรั่งด้วยน้ำสะอาด แยกเมล็ดออกจากเนื้อ นำเนื้อฝรั่งมาหั่นเป็นชิ้นเล็กๆ แล้วบดให้ละเอียดด้วยเครื่องปั่น จากนั้นบีบน้ำออกจากฝรั่งโดยใช้ผ้าขาวบาง เก็บรักษากากฝรั่งที่อุณหภูมิ 4องศาเซลเซียส จนกระทั่งนำมาใช้ เตรียมกากฝรั่งบดร้อยละ 30 โดยน้ำหนัก (ก.2) ส่วนผสม การเตรียมส่วนผสมดังนี้ผสมกากฝรั่งบดร้อยละ 30 โดยน้ำหนัก น้ำร้อยละ 70 โดยน้ำหนักและน้ำตาลซูโครสร้อยละ 2.0-6.0 โดยน้ำหนัก แล้วปรับพีเอชของส่วนผสม ให้เท่ากับ 6.0(ข) การเตรียมอาหารเพาะเลี้ยง และการเตรียมกล้าเชื้อ (ข.1) อาหารเพาะเลี้ยง ใช้อาหารเหลวสูตร แมน, โรโกซา และ ชาร์ป องค์ประกอบของอาหาร (กรัมต่อลิตร)มีดังนี้ เนื้อสกัด (meat extract) 10, เปปโทน (peptone) 10, ยีสต์สกัด (yeast extract) 5, กลูโคส (glucose)20, ทวีน 80 (tween 80) 1, โซเดียมแอซีเตท (sodium acetate) 5, ได-แอมโมเนียม ไฮโดรเจนซีเตรท (di-ammonium hydrogen citrate) 2, แมงกานีสซัลเฟตโมโนไฮเดรท (MnSO4.H2O) 0.055, แมกนีเซียมซัลเฟตเฮปตะไฮเดรท (MgSO4.7H2O) 0.2, ไดโปแตสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟต (K2HPO4) 2 และโปแตสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (KH2PO4) 2.5 นึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาที ปรับพีเอชของอาหารเพาะเลี้ยงเท่ากับ 6.0 หลังนึ่งฆ่าเชื้อ โดยใช้กรดไฮโดรคลอริก (HCI) ความเข้มข้น 0.1 โมลาร์ หรือโซเดียมไฮดรอกไซด์ (NaOH) ความเข้มข้น 0.1 โมลาร์ ที่ปลอดเชื้อ (ข.2) กล้าเชื้อ เตรียมกล้าเชื้อ L. plantorum WU-P19 ในอาหารเหลวสูตร แมน, โรโกซา และ ชาร์ป ในภาวะนิ่ง (ไม่เขย่าภาชนะเพาะเลี้ยง และไม่เติมอากาศ) ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน 18 ชั่วโมง โดยควบคุมค่าพีเอชในระหว่างการเลี้ยงเชื้อให้เท่ากับ 6.0 ด้วยโซเดียมไฮดรอกไซด์ความเข้มข้น 6 โมลาร์ ที่ปลอดเชื้อ (ปรับพีเอช ทุก ๆ 2 ชม. เพื่อควบคุมให้ค่าพีเอชคงที่เท่ากับ 6.0)(ค) การเตรียมกรดไลโนเลอิกและไคโตซาน (ค.1) กรดไลโนเลอิก การเตรียมกรดไลโนเลอิกความเข้มข้น 100 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตรกระทำได้ดังนี้ เติมน้ำกลั่นที่มี ทวีน 80 ความเข้มข้นร้อยละ 1 (โดยปริมาตร) ปริมาตร 88.9 มิลลิลิตร ลงในกรดไลโนเลอิก 10 กรัม(99% LA, Sigma-Aldrich, USA) ทำให้สารอยู่ในรูปสารแขวนลอยหรืออิมัลชั่น แล้วทำให้ปลอดเชื้อด้วยการกรองสารแขวนลอยผ่านเมมเบรนขนาด 0.45 ไมโครเมตร ซึ่งอิมัลชั่นที่เตรียมได้ถูกเก็บรักษาในภาชนะทึบแสงที่อุณหภูมิ-20 องศาเซลเซียส (ค.2) ไคโตซาน การเตรียมไคโตซานดังนี้ ชั่งไคโตซาน 1 กรัม (190-310 kDa, 75-85% deacetylation) หน้า 2 ของจำนวน 3 หน้าผสมกับน้ำกลั่นที่มีกรดแอซีติกความเข้มข้นร้อยละ 1 (โดยปริมาตร) ปริมาตร 100 มิลลิลิตร กวนให้สารละลายอย่างสมบูรณ์ ปรับพีเอชสารละลายเท่ากับ 6.0 ด้วยโซเดียมไฮดรอกไซด์ ความเข้มข้น 4 โมลาร์ นึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาที เก็บไคโตซานที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส(ง) ส่วนผสมสำหรับการหมักกากฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก (ง.1) ใช้ส่วนผสมที่เตรียมตาม (ก.2) ปริมาณ 1 กิโลกรัม (โดยน้ำหนัก) และกล้าเชื้อ L. ptantarum WU-P19 ที่เตรียมจากข้อ (ข.2) ปริมาตร 5 มิลลิลิตร (โดยปริมาตร) เติมลงในภาขนะบรรจุสเตนเลส ที่ผ่านการทำลายเชื้อปนเปื้อน ที่มีความจุ 2000 มิลลิลิตร คลุกเคล้าให้ (ก.2) ผสมกับ (ข.2) แล้วทำการหมักในภาวะนิ่ง ที่ 37 องศาเซลเซียส นาน 16 ชั่วโมง จากนั้นเติมไคโตซานที่เตรียมจาก (ค.2) 6 มิลลิลิตร (ความเข้มข้นสุดท้ายของไคโตซานเท่ากับร้อยละ 0.006) ลงในภาชนะบรรจุ คลุกเคล้าให้ (ค.2) ผสมกับส่วนผสมที่อยู่ในภาชนะหมัก แล้วบ่มเลี้ยงในภาวะนึ่ง ที่ 37 องศาเซลเซียส อีก 2 ชั่วโมง จึงเติมกรดไลโนเลอิกที่เตรียมจาก (ค.1) 12 มิลลิลิตร (ความเข้มข้นสุดท้ายของกรดไลโนเลอิกเท่ากับ 600 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร) ลงไป คลุกเคล้าให้ (ค.1) ผสมกับส่วนผสมที่อยู่ในภาชนะหมัก แล้วบ่มเลี้ยงในภาวะนึ่ง ที่ 37 องศาเซลเซียส หยุดการหมักเมื่อค่าพีเอชของกากฝรั่งหมักอยู่ในช่วง3.2-3.5 ซึ่งใช้เวลาหมักรวมทั้งหมด 36-48 ชั่วโมง ทั้งนี้ขึ้นกับปริมาณน้ำตาลซูโครสที่เติมในส่วนผสม (ง.2) ใช้ส่วนผสมที่เตรียมตาม (ก.2) ปริมาณ 1 กิโลกรัม (โดยน้ำหนัก) และกล้าเชื้อ L. plantorum WU-P19 ที่เตรียมจากข้อ (ข.2) ปริมาตร 5 มิลลิลิตร (โดยปริมาตร) เติมลงในภาชนะบรรจุสเตนเลส ที่ผ่านการทำลายเชื้อปนเปื้อน ที่มีความจุ 2000 มิลลิลิตร คลุกเคล้าให้ (ก.2) ผสมกับ (ข.2) ทำการหมักในภาวะนิ่ง ที่ 37 องศาเซลเซียส หยุดการหมักเมื่อค่าพีเอชของกากฝรั่งหมักอยู่ในช่วง 3.2-3.5 ซึ่งใช้เวลาหมักรวมทั้งหมด 36-48 ชั่วโมงทั้งนี้ขึ้นกับปริมาณน้ำตาลซูโครสที่เติมในส่วนผสมดังแสดงใน (ก.2) จากนั้นเติมเชื้อ L. ptantarum WU-P19 ที่ผ่านการกระตุ้นให้สร้างคอนจูเกตไลโนเลอิก ปริมาณ 1.5 กรัมน้ำหนักเซลล์เปียก (คิดเป็นน้ำหนักเซลล์แห้ง 0.25กรัม) ลงในฝรั่งหมักและคลุกเคล้าให้เข้ากัน(จ) การผลิตเยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโบเลอิก (จ.1) ส่วนผสมสำหรับการผลิตเยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ดังนี้ กากฝรั่งหมักจากข้อ (ง.1) หรือข้อ(ง.2) อย่างใดอย่างหนึ่ง หนัก 1 กิโลกรัมน้ำหนักเปียก น้ำเชื่อมกลูโคส (แบะแซ) 110 กรัม น้ำตาลซูโครส 200-700 กรัม เจลาติน (ชนิดผง) 40-83 กรัม (จ.2) การขึ้นรูปเยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก มีขั้นตอนดังนี้ (จ.2.1) เติมกากฝรั่งหมักจากข้อ (ง.1) หรือข้อ (ง.2) อย่างใดอย่างหนึ่ง 1 กิโลกรัมน้ำหนักเปียก ลงในกระทะทองเหลือง นำไปตั้งไฟโดยปรับระดับไฟปานกลาง (จ.2.2) ผสมส่วนผสมตามสูตรข้อ (จ.1) ได้แก่ น้ำตาลซูโครส เจลาติน และกรดซิตริก ให้เข้ากัน และค่อยๆ เติมลงในกากฝรั่งหมักในข้อ (จ.2.1) คนให้ส่วนผสมละลาย หน้า 3 ของจำนวน 3 หน้า (จ.2.3) เติมน้ำเชื่อมกลูโคส ตามสูตรข้อ (จ.1) คนให้ส่วนผสมละลาย (จ.2.5) กวนจนส่วนผสมจับตัวกัน โดยใช้ไฟค่อนข้างอ่อน แล้วยกออกจากความร้อน (จ.2.6) นำมาใส่ภาชนะสำหรับขึ้นรูป ทิ้งไว้ให้คงตัวที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส นาน 1-2 ชั่วโมง หรือทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง นาน 4-6 ชั่วโมง อย่างใดอย่างหนึ่ง จากนั้นตัดแต่งให้มีรูปร่างต่างๆ เช่น รูปทรงเรขาคณิต (จ.2.7) คลุกเคล้าเยลลี่แห้งฝรั่งจากข้อ (จ.2.6) ด้วยแป้งมันผสมน้ำตาลทรายละเอียด โดยใช้แป้งมัน 1ส่วนโดยน้ำหนัก ต่อ น้ำตาลทรายละเอียด 1 ส่วนโดยน้ำหนัก จะได้ผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ซึ่งมีคอนจูเกตไลโนเลอิก1 ช่วง 0.4-4.3 ไมโครกรัมต่อกรัมเยลลี่แห้ง คอนจูเกตไลโนเลอิก2 ช่วง 0.4-2.3ไมโครกรัมต่อกรัมเยลลี่แห้ง และกรดไลโนเลอิก 58-278 ไมโครกรัมต่อกรัมเยลลี่แห้ง2. กรรมวิธีการผลิตผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งส่วนสมดังกล่าวสามารถประกอบเพิ่มด้วย กรดซิตริก (ชนิดผง) 0-5 กรัม สีผสมอาหาร 0-2 มิลลิลิตร กลิ่นน้ำฝรั่ง (Guava flavor,เคมีภัณฑ์) 0-3 มิลลิลิตร โดยเติมหลังจากที่เติมน้ำเชื่อมกลูโคส ในข้อ (จ.2.3) คนให้ส่วนผสมละลาย ------------ หน้า 1 ของจำนวน 2 หน้า ข้อถือสิทธิ (1) กรรมวิธีการผลิตและผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก โดยการเตรียมฝรั่งที่ซึ่งมีลักษณะ พิเศษคือ ฝรั่งที่ผ่านการคั้นน้ำออกแล้ว ในที่นี้คือ กากฝรั่ง (2) กรรมวิธีการผลิตและผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ (1) มีองค์ประกอบ ของส่วนผสมดังนี้ กากฝรั่งบดร้อยละ 30 โดยน้ำหนัก น้ำร้อยละ 70 โดยน้ำหนัก และน้ำตาลซูโครสร้อยละ 2.0- 6.0 โดยน้ำหนัก แล้วปรับพีเอชของส่วนผสม ให้เท่ากับ 6.0 (3) กรรมวิธีการผลิตและผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ (1) และ (2) และ โดยการหมักด้วยเชื้อ Lactobacillus plantarum WU-P19 ในภาวะนิ่ง (ไม่เขย่าภาชนะเพาะเลี้ยง และไม่เติม อากาศ) (4) กรรมวิธีการผลิตและผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ (1) และ (2) และ (3) และโดยการเติมกรดไลโนเลอิกและไคโตซานในระหว่างการหมัก (5) กรรมวิธีการผลิตและผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ (1) และ (2) และ (3) และโดยการเติมเชื้อ Lactobacillus plantarum WU-P19 ที่ผ่านกระตุ้นให้สร้างคอนจูเกตไลโนเลอิกตามข้อ ถือสิทธิของอนุสิทธิบัตร คำขออนุสิทธิบัตรเลขที่ 1703002394 เรื่องกรรมวิธีการผลิตคอนจูเกตไลโนเลอิกจากเชื้อ L. plantarum WU-P19 ที่ชักนำด้วยกรดไลโนเลอิกและไคโตซาน (6) กรรมวิธีการผลิตและผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ (1) และ (2) และ (3) และ (4) และที่ซึ่งนำกากฝรั่งที่ผ่านการหมัก 1 กิโลกรัม ผสมกับน้ำเชื่อมกลูโคส (แบะแซ) 110 กรัม น้ำตาล ซูโครส 200-700 กรัม เจลาติน (ชนิดผง) 40-83 กรัม กรดซิตริก (ชนิดผง) 0-5 กรัม และสีผสมอาหาร 0-2 มิลลิลิตร และกลิ่นน้ำฝรั่ง 0-3 มิลลิลิตร และให้ความร้อนเพื่อให้เกิดการขึ้นรูป เช่น รูปทางเรขาคณิต ของ ผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก (7) กรรมวิธีการผลิตและผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ (1) และ (2) และ (3) และ (5) และที่ซึ่งนำกากฝรั่งที่ผ่านการหมัก 1 กิโลกรัม ผสมกับน้ำเชื่อมกลูโคส (แบะแซ) 110 กรัม น้ำตาล ซูโครส 200-700 กรัม เจลาติน (ชนิดผง) 40-83 กรัม กรดซิตริก (ชนิดผง) 0-5 กรัม และสีผสมอาหาร 0-2 มิลลิลิตร และกลิ่นน้ำฝรั่ง 0-3 มิลลิลิตร และให้ความร้อนเพื่อให้เกิดการชื้นรูป เซ่น รูปทางเรขาคณิต ของ ผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก (8) กรรมวิธีการผลิตและผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ (1) และ (2) และ (3) และ (4) และ (6) และ (7) และที่ซึ่งนำผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก มาคลุกเคล้ากับแป้ง มันผสมน้ำตาลทรายละเอียด โดยใช้แป้งมัน 1 ส่วน ต่อ น้ำตาลทรายละเอียด 1 ส่วน หน้า 2 ของจำนวน 2 หน้า (9) กรรมวิธีการผลิต และผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ตามข้อถือสิทธิ (1) และ (2) และ (3) และ (5) และ (6) และ (7) และที่ซึ่งนำผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก มาคลุกเคล้ากับแป้ง มันผสมน้ำตาลทรายละเอียด โดยใช้แป้งมัน 1 ส่วน ต่อ น้ำตาลทรายละเอียด 1 ส่วน (10) ผลิตภัณฑ์เยลลี่แห้งฝรั่งเสริมคอนจูเกตไลโนเลอิก ที่มีคอนจูเกตไลโนเลอิกเป็นส่วนประกอบ2. The process for producing conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly product, as per claim 1, which may include the following components: citric acid (powder) 0-5 g, food coloring 0-2 ml, guava flavor 0-3 ml, added after adding glucose syrup in clause (c.2.3), stir until the mixture dissolves. ------------ ------17/06/2019------(OCR) Page 1 of 3 pages of claim 1. The process for producing conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly product has the following steps: (a) Preparation of guava pulp and ingredients (a.1) Guava pulp. The preparation of guava pulp is as follows: Wash the guava with clean water, separate the seeds from the pulp, cut the guava pulp into small pieces and grind it finely with a blender. Then squeeze the juice out of the guava using cheesecloth. Store the guava pulp at 4 degrees Celsius until use. Preparation of 30% by weight guava pulp (a.2) Ingredients: The preparation of the mixture is as follows: mix 30% by weight guava pulp, 70% by weight water and 2.0-6.0% by weight sucrose, then adjust the pH of the mixture to 6.0. (b) Preparation of culture medium and preparation of starter cultures (b.1) Culture medium: Use the Man, Rogosa and Sharp liquid medium formulas. The composition of the medium (grams per liter) is as follows: meat extract 10, peptone 10, yeast extract 5, glucose 20, tween 80 1, sodium acetate 5, diammonium Di-ammonium hydrogen citrate (2%), manganese sulfate monohydrate (MnSO4.H2O) (0.055%), magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4.7H2O) (0.2%), dipotassium hydrogen phosphate (K2HPO4) (2%), and potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) (2.5%) were sterilized by autoclaving at 121°C for 15 minutes. The pH of the culture medium was adjusted to 6.0 after autoclaving using sterile 0.1 M hydrochloric acid (HCl) or 0.1 M sodium hydroxide (NaOH) (B.2). Starter cultures of L. plantorum WU-P19 were prepared in Man, Rogosa, and Sharp liquid media under static conditions (without shaking the culture container). and without aeration) at 37°C for 18 hours, controlling the pH value during cultivation to be equal to 6.0 with sterile 6 M sodium hydroxide (adjust pH every 2 hours to maintain a constant pH value of 6.0)(c) Preparation of linoleic acid and chitosan (c.1) Linoleic acid The preparation of 100 mg/ml linoleic acid is done as follows: Add 88.9 ml of distilled water with 1% (by volume) Tween 80 to 10 g of linoleic acid (99% LA, Sigma-Aldrich, USA), making the substance into a suspension or emulsion. The mixture was then sterilized by filtering the suspended solids through a 0.45 µm membrane. The prepared emulsion was stored in an opaque container at -20 °C (C.2). Chitosan: To prepare chitosan, weigh 1 gram of chitosan (190-310 kDa, 75-85% deacetylation) (page 2 of 3) and mix with 100 ml of distilled water containing 1% (by volume) acetic acid. Stir thoroughly until the solution is completely dissolved. Adjust the pH of the solution to 6.0 with 4 molar sodium hydroxide. Sterilize at 121 °C for 15 minutes. Store the chitosan at 4 °C (d). Mixture for fermentation of guava pomace fortified with conjugated linoleic acid (d.1). Use 1 kg (by weight) of the mixture prepared according to (a.2) and 5 ml (by volume) of the L. ptantarum WU-P19 starter culture prepared from (b.2). Add to a sterilized stainless steel container with a capacity of 2000 ml. Mix (a.2) with (b.2) and ferment in a static environment at 37 °C for 16 hours. Then add 6 ml of the chitosan prepared from (c.2) (final concentration of chitosan = 0.006%) to the container. Mix (c.2) with the mixture in the fermentation container. Then, incubate under sterilization at 37°C for another 2 hours. Add 12 ml of linoleic acid prepared from (C.1) (final concentration of linoleic acid is 600 mcg/ml). Mix (C.1) thoroughly with the mixture in the fermentation container and incubate under sterilization at 37°C. Stop fermentation when the pH of the fermented guava pomace is in the range of 3.2-3.5, which takes a total of 36-48 hours, depending on the amount of sucrose added to the mixture. (D.2) Use 1 kg (by weight) of the mixture prepared according to (A.2) and 5 ml (by volume) of L. plantorum WU-P19 starter culture prepared from (B.2) and add it to the stainless steel container. The fermented guava pulp, with a capacity of 2000 ml, is mixed with (a.2) and (b.2). Fermentation is carried out in a stationary environment at 37°C. Fermentation is stopped when the pH of the fermented guava pulp is in the range of 3.2-3.5, which takes a total fermentation time of 36-48 hours, depending on the amount of sucrose added to the mixture as shown in (a.2). Then, 1.5 g wet weight (equivalent to 0.25 g dry cell weight) of L. ptantarum WU-P19, which has been stimulated to produce conjugated linoleic acid, is added to the fermented guava pulp and mixed thoroughly. (e) Production of Conjugated Linoleic Acid-Free Guava Jelly (e.1) Ingredients for the production of conjugated linoleic acid-free guava jelly are as follows: 1 kg wet weight of fermented guava pulp from either (d.1) or (d.2). Glucose syrup (corn syrup) 110 g, sucrose sugar 200-700 g, gelatin (powder) 40-83 g (J.2). The process for shaping conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly is as follows: (J.2.1) Add 1 kg wet weight of fermented guava pulp from either step (d.1) or step (d.2) into a brass pan. Heat over medium heat. (J.2.2) Mix the ingredients according to the formula in step (J.1), namely sucrose sugar, gelatin, and citric acid, together and gradually add to the fermented guava pulp in step (J.2.1), stirring until the mixture dissolves. (J.2.3) Add the glucose syrup according to the formula in step (J.1) and stir until the mixture dissolves. (J.2.5) Stir until the mixture thickens over relatively low heat, then remove from heat. (J.2.6) Pour into molding containers. Leave to stabilize at 4°C for 1-2 hours or at room temperature for 4-6 hours, whichever is better. Then cut into various shapes, such as geometric shapes (J.2.7). Mix the dried guava jelly from step (J.2.6) with tapioca starch mixed with granulated sugar, using a ratio of 1 part tapioca starch by weight to 1 part granulated sugar by weight. This will yield a dried guava jelly product fortified with conjugated linoleic acid, containing conjugated linoleic acid 1 range of 0.4-4.3 micrograms per gram of dried jelly, conjugated linoleic acid 2 range of 0.4-2.3 micrograms per gram of dried jelly, and linoleic acid 58-278 micrograms per gram of dried jelly. 2. Production method of dried guava jelly product fortified with conjugated linoleic acid. According to claim 1, the mixture can be further composed of 0-5 g of citric acid (powder), 0-2 ml of food coloring, and 0-3 ml of guava flavor (chemical), added after adding glucose syrup in clause (c.2.3), stirring until the mixture dissolves. ------------ Page 1 of 2 pages. Claim (1) A process for the production and product of conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly by preparing guava which has a special characteristic, i.e., guava after the juice has been extracted, in this case, guava pulp. (2) A process for the production and product of conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly according to claim (1) with the following composition: 30% by weight of crushed guava pulp, 70% by weight of water, and 2.0-6.0% by weight of sucrose sugar, then adjust the pH of the mixture to 6.0. (3) A process for the production and product of conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly. (4) The process for producing conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly products according to claims (1) and (2) and (3) and by adding linoleic acid and chitosan during fermentation. (5) The process for producing conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly products according to claims (1) and (2) and (3) and by adding Lactobacillus plantarum WU-P19 that has been stimulated to produce conjugated linoleic acid according to the patent claims, patent application No. 1703002394 on the process for producing conjugated linoleic acid from L. plantarum WU-P19 induced with linoleic acid and chitosan. (6) The process for producing conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly products. According to claims (1) and (2) and (3) and (4), where 1 kg of fermented guava pulp is mixed with 110 g of glucose syrup (glucose syrup), 200-700 g of sucrose sugar, 40-83 g of gelatin (powder), 0-5 g of citric acid (powder), and 0-2 ml of food coloring and 0-3 ml of guava flavoring, and heated to form shapes such as geometric shapes of the conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly product (7), the manufacturing process and the conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly product. According to claims (1) and (2) and (3) and (5) and in which 1 kg of fermented guava pulp is mixed with 110 g of glucose syrup (glucose syrup), 200-700 g of sucrose sugar, 40-83 g of gelatin (powder), 0-5 g of citric acid (powder), and 0-2 ml of food coloring and 0-3 ml of guava flavoring and heated to create a moist, geometric shape of the conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly product (8) The manufacturing process and the conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly product according to claims (1) and (2) and (3) and (4) and (6) and (7) and in which the conjugated linoleic acid-fortified dried guava jelly product is mixed with tapioca starch and granulated sugar using 1 part tapioca starch to 1 part granulated sugar. Page 2 of 2 pages (9) Manufacturing process and the conjugated linoleic acid dried guava jelly products under claims (1) and (2) and (3) and (5) and (6) and (7) and in which the conjugated linoleic acid dried guava jelly products are mixed with tapioca starch and granulated sugar using 1 part tapioca starch to 1 part granulated sugar (10) Conjugated linoleic acid dried guava jelly products containing conjugated linoleic acid as an ingredient