TH1422B - กรรมวิธีการเตรียมปฏิชีวนะเอ/16686 แฟคเทอร์เอ2?และ?ปฏิชีวนะเอ/16686 แฟคเทอร์เอ1 และเอ3 ที่เกิดร่วม?กัน - Google Patents

Abstract

การประดิษฐ์นี้เกี่ยข้องกับสารปฏิชีวนะที่มีคลอรีนอยู่ด้วย ได้ตั้งชื่อว่าปฏิชีวนะ เอ/16686 แฟคเทอร์ เอ2 ในฟอร์ม บริสุทธิ์ที่สำคัญ การประดิษญ์นี้ยังเกี่ยวกับกรรมวิธีสำหรับการผลิตปฏิชีวนะ เอ/16686 แฟคเทอร์เอ2 โดยการเลี้ยงเชื้อพันธุ์ แอคทิโน เฟลนส์ และผลิตปฏิชีวนะ เอ/16686 แฟคเทอร์ เอ1 และ เอ3 เกิดรวม กันอีกด้วย ปฏิชีวนะ เอ/16686 แฟคเทอร์ เอ1,เอ2และ เอ3เช่นเดียวกัน กับ เกลือที่สมนัยกัน เกิดขึ้นจากการรวมกับกรดซึ่งยอมรับใช้ใน ทาง สรีรวิทยา ไม่เป็นพิษ เป็นสารต่อต้านเชื้อจุลินทรีย์ โดย เฉพาะ แสดงฤทธิ์ต่อต้านกรัม-พอสซิทีพ แบคทีเรีย

Claims (6)

1.กรรมวิธีสำหรับการผลิตปฏิชีวนะเอ/16686 แฟคเทอร์ เอ2 ที่บริสุทธิ์และเกลือที่เกิดจากการรวมกับกรดที่ยอมรับใช้ในทาง สรีรวิทยาซึ่งไม่เป็นพิษโดยอาศัยเกณฑ์ที่เป็นหลักในการแยก คือ เอ) เป็นผงอสัณฐานสีขาวซึ่งหลอมเหลวพร้อมกับสลายตัวที่ประ มาณ 210-220ฺซ บี) ละลายได้มากในน้ำ, ไดเมธิลฟอร์มามีด, เมธานอลในน้ำ, และ 0.1 N HCl; ละลายได้น้อยในแอบโซลูทเอธานอล และนอร์ มอล-บิว ทานอล, และตกตะกอนออกจากสารละลายในน้ำโดยการเติมสารละลาย อิ่ม ตัว NaHCO3; ซี) การวิเคราะห์หา ธาตุแสดงค่าโดยประมาณมีคาร์บอน 54.57% ไฮโดรเจน 6.19% ไนโตรเจน 10.88% และคลอรีน 1.37% ดี) อินฟราเรด แอบซอพชันสเพคทรัมในนูจอล แสดงแอบซอพชันสูง สุดดังนี้ 3290, 2930 และ 2860 (นูจอล), 1765, 1635, 1510,1455 และ 1375 (นูจอล), 1240, 1175, 1130, 1060, 1015, 975, 840 และ 815 ซมยกกำลัง-1 อี) อัลทราไวโอเลทแอบซอพซันสเพคทรัมแสดงแอบซอพชันสูงสุด (1) ในเมธานอลที่เป็นกลาง 234 นาโนเมตร (##สูตรทางเคมี) 268 นาโนเมตร (##สูตรทางเคมี) (2) ในเมธานอบที่มี 0.1 N HCl 233 นาโนเมตร (##สูตรทางเคมี) 271 นาโนเมตร (##สูตรทางเคมี) (3) ในเมธานอลที่มี 0.1 N NaOH 251 นาโนเมตร (##สูตรทางเคมี) 300 นาโนเมตร (โค้งเป็นไหล่) เอฟ) สเพซิฟิคโรเทชัน (##สูตรทางเคมี) จี) ต่อไปนี้เป็นค่า Rf ที่ทำด้วยเพเพอร์โครมาไทกราฟิบน กระดาษวอทแมน เลขที่ 1, ใช้ บี.ซับทิลิส เอทีซีซี 6633 เป็น สิ่งมีชีวิตที่ใช้ตรวจสอบ ระบบอีลูชัน (ปริมาตร/ปริมาตร/ปริมาตร) ค่า Rf 1) นอร์มอล-บิวทานอลที่ทำให้อิ่มตัวด้วย ซอเรนเชนบัฟเฟอร์, พีเอช 6.0 0.00 2) นอร์มอล-บิวทานอล ที่ทำให้อิ่มตัวด้วยน้ำ ที่มี 2% พารา โทลูอีนซัลโฟนิก แอซิด 0.00 3) นอร์มอล-บิวทานอล ที่ทำให้อิ่มตัวด้วยน้ำที่มี 2% แอมโม เนียมไฮดรอกไซด์ 0.00 4) ชอเรนเชน บัฟเฟอร์, พีเอช 6.0, ทำให้อิ่มตัวด้วย นอร์ มอล- บิวทานอล 0.00 5) นอร์มอล-บิวทานอล:เมธานอล:น้ำ 4:1:2 0.48 6) เอธิล แอซีเทททำให้อิ่มตัวด้วยน้ำ 0.00 7) นอร์มอล-บิวทานอล:รกดแอซีทิก:น้ำ 2:1:1 0.44 เอช) ต่อไปนี้เป็นค่า Rf ที่ทำในระบบซิลิกาเจล ธิน-เล เยอร์โครมาโทกราฟิ แสดงอยู่ข้างล่าง ระบบอีลูชัน (ปริมาตร/ปริมาตร/ปริมาตร) ค่า Rf 1) 2.5% HCOONH4:CH3CN 65:35 ในน้ำ 0.36 2) นอร์มอล-บิวทานอล:กรดแอซีทิก:น้ำ 4:2:5 0.80 3) นอร์มอล-บิวทานอล:กรดแอซีทิก:น้ำ 4:2:5 0.52 4) นอร์มอล-โพรพานอล:นอร์มอล-บิวทานอล: IN NH4 OH2:3:4 (วัฎภาคชั้นบน) 0.12 5) นอร์มอล-บิวทานอล:กรดแอซีทิก:น้ำ 4:1:5 0.15 1,2-บนแผ่นซิเลนไนส์ ซิลิกาเจล 60 เอฟ254 3,4,5 บนแผ่นซิลิกาเจล 60 เอฟ254 (มาตรฐานที่ใส่เข้าไว้ด้วย : แคเฟอีน Rf 0.60, คอร์ทิโชน Rf 0.35, เคกชะมีธาโชน 0.30) ไอ) การวิเคราะห์อะมิโน แอซิด หลังจากการไฮโดรไลส์ด้วย 6N กรดไฮโดรคลอริกที่ 110ฺซ นาน 6 ชั่วโมงซึ่งแสดงอย่าง น้อยที่ สุดมีอะมิโน แอซิดต่อไปนี้อยู่:อะลานีน, ลูซีน, ไกลซีน แอส พาร์ ทิก แอซิด, เฟนิลอะลานีน, ออร์นิธีน, พารา-ไฮดรอกซิเฟนิล ไกลซีน และไฮดรอกซิ, คลอโร-ซับสทิทิวเทด เฟนิลไกลซีน เจ) การวิเคราะห์คาร์โบไฮ เดรทจาก แอซิดไฮโดรลิเซทที่ได้ จากภายหลัง 2 ชั่วโมงใน 2N H2 SO4 ที่ 100ฺซ ซึ่งแสดงว่ามี ดี- แมนโนสอยู่ด้วย เค) ต่อไปนี้ เป็นปฏิกิริยาที่บ่งลักษณะเฉพาะนินไฮดริน (3% สารละลายเอธานอล) บวก มอลิช บวก ไบอูเรท บวก มิลลอน ลบ 1%FeCl3-1%K3Fe(CN)6 ในน้ำ สีเขียว KMnO4 (กรด) บวก H2SO4 เข้มข้น ลบ แอล) รีเทนชันไทม์ (tR) 124.43 ซม (4' 99/100")เมื่อวิ เคราะห์โดยรีเวอร์สเฟสเฮชพีแอลซีด้วยการใช้ -บอนดาแพท C18 คอ ลัมน์ (3.9 มม.เส้นผ่าศูนย์กลางX300 มม.) และของผสม HCOONH4 0.025 M/CH3CN 60/40 (ปริมาตร/ปริมาตร) เป็นวัฏภาคเคลื่อน ที่ ด้วยอัตราการไหล 2 มิลลิลิตร/นาที (มาตรฐานที่ใส่เข้าไว้ ด้วย: แอนธราซีน tR 1067.26 ซม. (35'18/100") อัลฟา-ไนโทรแนพธา ลีน tR 335.64 ซม. (11' 14/100") โพลูอีน 245.47 ซม. (8'64/100 ")และ เอ็ม) ในรูปของไฮโดรคลอไรด์ จุดหลอมเหลวประมาณ 250ฺ ซ (สลายตัว) ซึ่งกรรมวิธีการผลิตนี้ประกอบด้วยการเลี้ยงเชื้อ พันธ์ แอคทิโนเพลนส์ เอสพี. เอทีซีซี 33076 ภายใต้การหมัก เชื้อ จุลินทรีย์นี้ให้อยู่ในออกซิเจนที่อยู่ในตัวกลางมีอาหาร เสริมใน น้ำซึ่งมีแหล่งคาร์บอนและไนโตรเจน และเกลืออนินทรีย์ที่ถูก ดูด ซึมเข้าได้รวมอยู่ด้วย จนกระทั่งผลิตเนื้อสารถึงระดับที่ แสดง ฤทธิ์ทางปฏิชีวนะ นำเอาสารที่แสดงฤทธิ์ปฏิชีวะซึ่งประกอบ ด้วย ปฏิชีวนะ เอ/16686 แฟตเทอร์ เอ2 ในฟอร์มของเชิงซ้อนกับแฟค เทอร์ อื่นที่เป็นส่วนน้อยอีกสองชนิดซึ่งตั้งชื่อว่าปฏิชีวนะ เอ/16686 แฟคเทอร์เอ1 และเอ3 ออกจากตัวกลางที่ใช้หมัก แยกปฏิชีวนะ เอ/16 เอ/16686 แฟดเทอร์ เอ2 จากสารปฏิชีวนะเชิงซ้อน และแยกออก เป็น สารประกอบปฏิชีวนะบริสุทธิ์ที่สำคัญแต่ละชนิด

2.กรรมวิธีตามที่กำหนดไว้ในข้อถือสิทธิ 1 ซึ่งนำเอาสารที่ แสดงฤทธิ์ทางปฏิชีวนะออกจากขั้นสุดท้ายการหมัก โดยการสกัด มวลเส้นใยของเซลล์เชื้อราด้วยการเลือกใช้ตัวทำละลาย อินทรีย์จากแอลคานอลโมเลกุลเล็ก และแอซีโทน

3. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิ 2 ซึ่งตัวทำละลายที่ใช้ในการ สกัดคือ เมธานอล

4. กรรมวิธีตามที่กำหนดไว้ในข้อถือสิทธิ 1 ซึ่งแยกเอา ปฏิชีวนะ เอ/16686 แฟคเทอร์เอ2 ออกโดยคอลัมน์โครมาโทกราฟ ใช้ " แอมเบอร์ไลท์rR เอกซ์เอดี-2 " คอลัมน์ และของผสมของ น้ำและแอซีโทไนทริล หรือของผสมของแอมโมเนียม ฟอร์เมทในน้ำ และแอซีโทไนทริล เป็นสารสำหรับอีลูท (elute)

5. กรรมวิธีตามที่กำหนดไว้ในข้อถือสิทธิ 1 รวมถึงการใช้ ลักษณะเฉพาะแยกทั้งหมดสามแฟคเทอร์ เอ1, เอ2 และ เอ3 ออกจาก กันต่อไปด้วย 5เอ) เกณฑ์ในการแยกปฏิชีวนะ เอ/16686 แฟคเทอร์ เอ1 ที่อยู่ ในรูปเบสอิสระและเกลือที่เกิดจากการรวมกับกรดที่ยอมรับใช้ ในทางสรีรวิทยาซึ่งไม่เป็นพิษของสารคือ เอ) เป็นผงอสัณฐานสีขาว หลอมเหลวพร้อมสลายตัวที่ประมาณ 210-220 องศาเซลเซียส บี) ละลายได้มากในน้ำ, ไดเมธิลฟอร์มามีด, และเมธานอลในน้ำ, ละลายในเมธานอล และเอธานอล, แต่ไม่ละลายในเอธิล อีเธอร์, พิโทรเลียม อีเธอร์ และเบนซีน, ซี) การวิเคราะห์หาธาตุแสดงค่าโดยประมาณมีคาร์บอน 50.31% ไฮโดรเจน 6.00% ไนโตรเจน 9.92%, คลอรีน (มีทั้งหมด) 0.61% , คลอรีนไอออน 0.9%, สิ่งที่เหลืออยู่ 6.07% ดี) อินฟราเรด แอบซอพซันสเพคทรัมในนูจอลแสดงแอบซอฟซันสูง สุดดังนี้ 3290,2930 และ 2860 (นูจอล) , 1765, 1630, 1510,1455 และ 1375 (นูจอล), 1260,1235,1175, 1150, 1130,1060,1015,975,840 และ 810 ซม.-1 อี) อัลทราไวโอเลทแอบซอพซันสเพคทรัมแสดงแอบซอพชันสูงสุด (1) ในเมธานอลที่เป็นกลาง 233 นาโนเมตร (E 1% 1ซม= 202) 266 นาโนเมตร (E1% 1ซม= 106) (2) ในเมธานอลที่มี 0.1 N HCI 232 นาโนเมตร (E1% 1 ซม= 219) 270 นาโนเมตร (E1% 1 ซม= 110) (3) ในเมธานอลที่มี 0.1 N NaOH 251 นาโนเมตร (E1% 1 ซม= 264) ~ 290 นาโนเมตร (โค้งเป็นไหล่) เอฟ) สเพซิฟิค โรเทชัน (สูตรเคมี) (C=0.51,H2O) จี) ต่อไปนี้เป็นค่า Rf ที่ทำด้วยเพเพอร์โครมาโทรกราฟิบนก ระดาษวอทแมน เลขที่ 1 ใช้ บี.ซับทิลิส เอทีซีซี เป็นระบบ ตรวจสอบ ระบบอีลูชัน (ปริมาตร/ปริมาตร/ปริมาตร) 1) นอร์มอล - บิวทานอล ทำให้อิ่มตัวด้วยซอเรนเซน บัฟเฟอร์ พีเฮช 6.0 0.00 2) นอร์มอล - บิวทานอล ทำให้อิ่มตัวด้วยน้ำที่มี 2% พา รา-โทลูอีนซัลโฟนิ แอซิด 0.00 3) นอร์มอล- บิวทานอล ทำให้อิ่มตัวด้วยน้ำที่มี 2% แอมโมเนียม ไฮดรอกไซด์ 0.00 4) ซอเรนเซน, พีเอช 6.0, ทำให้อิ่มตัวด้วย นอร์มอล-บิวทา นอล 0.05 5) นอร์มอล-บิวทานอล; เมธานอล: น้ำ 4:1:2 0.48 6) เอธิล แอซิเทท ทำให้อิ่มตัวด้วยน้ำ 0.00 7) นอร์มอล-บิวทานอล; กรดแอซีทิก: น้ำ 2:1:1 0.44 เอช) ต่อไปนี้เป็นค่า Rf ที่ทำในระบบซิลิกาเจล ธิน-เลเยอร์ โครมาโทกราฟิ แสดงอยู่ข้างล่าง ระบบอีลูชัน (ปริมาตร/ปริมาตร/ปริมาตร) 1) 2.5% HCOONH4 :CH3CN65:35 ในน้ำ 0.40 2) นอร์มอล-บิวทานอล; กรดแอซีทิก: น้ำ 4:2:5 0.80 3) นอร์มอล-บิวทานอล; กรดแอซีทิก: น้ำ 4:2:5 0.52 4) นอร์มอล-โพรพานอล: นอร์มอล-บิวทานอล 1N NH4OH 2:3:4 (วัฏภาคชั้นบน) 0.12 5) นอร์นอล-บิวทานอล: กรดแอซีทิก: น้ำ 4:1:5 0.15 1,2 ทำบนเพลทส์ซิเลนไนส์ ซิลิกาเจล 60 เอฟ254 3,4,5 ทำบนเพลทส์ ซิลิกาเจล 60 เอฟ 254 (มาตรฐานที่ใส่เข้าไว้ด้วย แคเฟอีน Rf 0.60, คอร์ทิโซน Rf 0.35; เตกซะมีธาโซน Rf 0.30) ไอ) การวิเคราะห์อะมิโน แอซิด หลังจากการไฮโดรไลส์ด้วย 6N กรดไฮโดรคลอริกที่ 110 องศาเซลเซียส นาน 6 ชั่วโมง ซึ่ง แสดงว่าอย่างน้อยที่สุดมีอะมิโน แอซิด ต่อไปนี้อยู่ด้วย อะ ลานีน, ลูซีน, ไกลซีน, แอสพาร์ทิก แอซิด, เฟนิลอะลานีน, ออร์นิลีน, พารา - ไฮดรอกซิเฟนิลไกลซีน, และไฮดรอกซิ คลอ โร-ซับสทิทิวเทค เฟนิลไกลซีน เจ) การวิเคราะห์คาร์โบไฮเดรทจาก แอซิดไฮโดรลิเซทที่ได้จาก ภายหลัง 2 ชั่วโมง ใน 2N H2-SO4 ที่ 100 องศาเซลเซียส ซึ่ง แสดงว่า มี ดี - แมนโนสอยู่ด้วย เค) รีเทนซันไทม์ (tR) 93.57 ซม. (3'84"100) เมื่อ วิเคราะห์โดยวิธีเวอร์สเฟสเฮซพีแอลซีใช้"u -บอนดาแพค RC18 " คอลัมน์ (3.9มม. เส้นผ่าศูนย์กลาง x 300 มม.) และของผสม HCOONH 4 0.025M/CH3CN 60/40 (ปริมาตร/ปริมาตร) เป็นวัฏภาค เคลื่อนที่ด้วยอัตราการไหล 2 มิลลิลิตร/นาที (มาตรฐานที่ ใส่เข้าไว้ด้วย: แอนธราซีน tR 1067.26 ซม (35' 18/100) (สัญลักษณ์เคมี-ไนโทรแนพธาลีน tR 335.64 ซม (11' 14'/100), โทลูอีน tR 245.47 ซม (8'64/100)) 5บี) เกณฑ์ในการแยกปฏิชีวนะ เอ/16686 แฟคเทอร์เอ 3 ที่อยู่ ในรูปเบสอิสระ และ เกลือที่เกิดจากการรวมกับกรดที่ยอมรับ ใช้ในทางสรีรวิทยาซึ่งไม่เป็นพิษของสารคือ เอ) เป็นผงอสัณฐานสีขาว หลอมเหลวพร้อมกับสลายตัวที่ประมาณ 220 องศาเซลเซียส บี) ละลายได้มากในน้ำ, ไดเมธิล ฟอร์มามีด, และเมธานอลใน น้ำ, ละลายในเมธานอล และเอธานอล, แต่ไม่ละลายในเอธิล อี เธอร์, พิโทรเลียมอีเธอร์ และ เบนซีน, ซี) การวิเคราะห์หาธาตุ แสดงค่าโดยประมาณมีคาร์บอน 48.41% , ไฮโดรเจน 5.84% ไนโตรเจน 9.09% คลอรีน(มีทั้งหมด) 1.68% คลอรีนไอออน 1.16% สิ่งที่เหลืออยู่ 9.1% ดี) อินฟราเรด แอบซอพชันสเพคทรันในนูจอลแสดงแอบซอพซันสูง สุดดังนี้ 3290,2930 และ 2860(นูจอล) , 1765,1635,1510,1455 และ 1375 (นูจอล), 1260,1240,1175,1100,1060,1020,975,840, และ 850 ซม-1 อี) อัลทราไวโอเลทแอบซอพซันสเพคทรัมแสดงแอบซอพชันสูงสุด (1) ในเมธานอลที่เป็นกลาง 234 นาโนเมตร (E 1% 1 ซม.= 147) 267 นาโนเมตร (E 1% 1 ซม.= 74) (2) ในเมธานอลที่มี 0.1 N HCl 232 นาโนเมตร (E1% 1ซม=132) 270 นาโนเมตร (E1% 1ซม=76) (3) ในเมธานอลที่มี 0.1 N NaOH 270 นาโนเมตร (E1% 1ซม=202) ~ 295 นาโนเมตร (โค้งเป็นไหล่) เอฟ) สเพซิฟิคโรเทชัน (สูตรเคมี) (C=0.48, HCl N/100) จี) ต่อไปนี้เป็นค่า Rf ที่ทำด้วยเพเพอร์โครมาโทกราฟิบนกระ ดาษวอทแมน เลขที่ 1 ใช้บี.ซับทิลิส เอทีซีซี 6633 เป็นสิ่ง มีชีวิตที่ใช้ตรวจสอบ ระบบอีลูชัน (ปริมาตร/ปริมาตร/ปริมาตร) 1) นอร์มอล - บิวทานอล ทำให้อิ่มตัวด้วยซอเรนเซน บัฟเฟอร์ พีเฮช 6.0 0.00 2) นอร์มอล - บิวทานอล ทำให้อิ่มตัวด้วยน้ำที่มี 2% พา รา-โทลูอีนซัลโฟนิ แอซิด 0.00 3) นอร์มอล- บิวทานอล ทำให้อิ่มตัวด้วยน้ำที่มี 2% แอมโมเนียม ไฮดรอกไซด์ 0.00 4) ซอเรนเซน, พีเอช 6.0, ทำให้อิ่มตัวด้วย นอร์มอล-บิวทา นอล 0.05 5) นอร์มอล-บิวทานอล; เมธานอล: น้ำ 4:1:2 0.48 6) เอธิล แอซิเทท ทำให้อิ่มตัวด้วยน้ำ 0.00 7) นอร์มอล-บิวทานอล; กรดแอซีทิก: น้ำ 2:1:1 0.44 เอช) ต่อไปนี้เป็นค่า Rf ที่ทำในระบบซิลิกาเจล ธิน-เลเยอร์ โครมาโทกราฟิ แสดงอยู่ข้างล่าง ระบบอีลูชัน (ปริมาตร/ปริมาตร/ปริมาตร) 1) 2.5% HCOONH4 :CH3CN65:35 ในน้ำ 0.40 2) นอร์มอล-บิวทานอล; กรดแอซีทิก: น้ำ 4:2:5 0.80 3) นอร์มอล-บิวทานอล; กรดแอซีทิก: น้ำ 4:2:5 0.52 4) นอร์มอล-โพรพานอล: นอร์มอล-บิวทานอล 1N NH4OH 2:3:4 (วัฏภาคชั้นบน) 0.12 5) นอร์นอล-บิวทานอล: กรดแอซีทิก: น้ำ 4:1:5 0.15 1,2 ทำบนเพลทส์ซิเลนไนส์ ซิลิกาเจล 60 เอฟ254 3,4,5 ทำบนเพลทส์ ซิลิกาเจล 60 เอฟ 254 (มาตรฐานที่ใส่เข้าไว้ด้วย แคเฟอีน Rf 0.60, คอร์ทิโซน Rf 0.35; เตกซะมีธาโซน Rf 0.30) ไอ) การวิเคราะห์อะมิโน แอซิด หลังจากการไฮโดรไลส์ด้วย 6N กรดไฮโดรคลอริกที่ 110 องศาเซลเซียส นาน 6 ชั่วโมง ซึ่ง แสดงว่าอย่างน้อยที่สุดมีอะมิโน แอซิด ต่อไปนี้อยู่ด้วย อะ ลานีน, ลูซีน, ไกลซีน,แอสพาร์ทิก แอซิด, เฟนิลอะลานีน, ออร์นิธีน , พารา ไฮดรอกซิเฟนิลไกลซีน, และไฮดรอกซิ, คลอโร ซับสทิทิวเทดเฟนิลไกลซีน เจ) การวิเคราะห์คาร์โบไฮเดรทจาก แอซิดไฮโดรลิเซทที่ได้จาก ภายหลัง 2 ชั่วโมง ใน 2N H2-SO4 ที่ 100 องศาเซลเซียส ซึ่ง แสดงว่า มี ดี - แมนโนสอยู่ด้วย เค) รีเทนซันไทม์ (tR) 93.57 ซม. (3'84"100) เมื่อ วิเคราะห์โดยวิธีเวอร์สเฟสเฮซพีแอลซีใช้"u -บอนดาแพค RC18 " คอลัมน์ (3.9มม. เส้นผ่าศูนย์กลาง x 300 มม.) และของผสม HCOONH 4 0.025M/CH3CN 60/40 (ปริมาตร/ปริมาตร) เป็นวัฏภาค เคลื่อนที่ด้วยอัตราการไหล 2 มิลลิลิตร/นาที (มาตรฐานที่ ใส่เข้าไว้ด้วย: แอนธราซีน tR 1067.26 ซม (35' 18/100) (สัญลักษณ์เคมี-ไนโทรแนพธาลีน tR 335.64 ซม (11' 14'/100), โทลูอีน tR 245.47 ซม (8'64/100))

6. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิ 1 หรือ 5 ซึ่งประสบความสำเร็จ การแยกปฏิชีวนะ เอ/16686 แฟคเทอร์ เอ1,เอ 2 และ เอ3 โดย วิธีรีเวอร์สเฟสเฮชพีแอลซี ใช้ u-บอนคาแพค R C18" คอลัมน์ และของผสมแอมโมเนียม ฟอร์มิเอท์ในน้ำ และแอซีโทไนทริลใน อัตราส่วนที่เปลี่ยนแปลงได้เป็นวัฏภาคเคลื่อนที่ (ข้อถือสิทธิ 6 ข้อ, 7 หน้า, 7 รูป)