TH14170U - เวกเตอร์ที่มียีนนำส่งโปรตีนออกนอกเซลล์เชื้อแลคโตบาซิลลัส คาเซอิ (Lactobacillus casei) - Google Patents

Abstract

เวกเตอร์ที่มียีนนำส่งโปรตีนออกนอกเซลล์ของเชื้อแลคโตบาซิลลัส คาเซอิ (Lactobacillus casei) มีลักษณะเป็นวงแหวนดีเอ็นเอขนาด 6,224 คู่เบส ซึ่งมีส่วนประกอบคือ ยีนในการสร้างโปรตีนออก นอกเซลล์ ได้แก่ ยีนโปรโมเตอร์ (promoter), ยีนเปปไทน์ส่งสัญญาณ (signal peptide) และยีนกรีนฟลูออเรส เซนต์ (green fluorescent protein ,GFPuv), ยีนต้านยาแอมพลิซิลิน (Ampicillin, APR) และยีนต้านยาอิริโทมัย ซิน (Erythromycin, EryR), ยีนของโปรตีนเรพลิเคชั่นเอวัน(replication A1, RepA1), จุดเริ่มต้นของการเพิ่ม จำนวน(origin of replication, Ori) และตำแหน่งมัลติเปิลโคลนนิ่งไซท์ (Multiple cloning site) ที่จำเพาะต่อ เอ็นไซม์ 14 ชนิด ได้แก่ AatII, NotI, SacII, EcoRI, HindIII, KptiI, AgeI, NdeI, XhoI, BamHI, SaII, SpeI, PstI และXbaI ซึ่งเวกเตอร์ดังกล่าวสามารถสร้างโปรตีนเป้าหมายที่ต้องการศึกษาให้หลั่งออกมาภายนอกเซลล์ ของเชื้อแลคโตบาซิลลัสคาเซอิ (Lactobacillus casei)

Claims (3)

1. เวกเตอร์ที่มียีนนำส่งโปรตีนออกนอกเซลล์ของเชื้อแลคโตบาซิลลัส คาเซอิ (Lactobacillus casei) มีลักษณะเป็นวงแหวนดีเอ็นเอ ซึ่งมีส่วนประกอบดังนี้ ก. ยีนในการสร้างโปรตีนออกนอกเซลล์ ประกอบด้วย โปรโมเตอร์ (promotor) เป็นยีนแลคเตดดีไฮโดรจีเนส (Lactate dehydrogenase promoter, LdhProl) ของเชื้อแลกโตบาซิลลัส คาเซอิ (Lactobacillus casei) โดยอยู่ในตำแหน่งของลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 4858 - 5102 ของเวกเตอร์ ซึ่งเป็นตำแหน่งให้เอนไซม์อาร์เอนเอโพลีเมอเรส (RNS polymerase) จับ และเคลื่อนที่ ไปยังยีนโครงสร้างเพื่อสังเคราะห์อาร์เอนเอ (RNA) ยีนเปปไทน์ส่งสัญญาณ (signal peptide) เป็นยีนเซลล์วอลแอสโซชิเอเทดไฮโดรเลส (Cell wall- associated hydrolase, Cwh) ที่ทำหน้าที่ในการนำส่งโปรตีนเป้าหมายข้ามเยื่อหุ้มเซลล์และนำออกภายนอก เซลล์เชื้อแลกโตบาซิลลัส คาเซอิ (Lactobacillus casei) โดยอยู่ในตำแหน่งของลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 5103 - 5238 ของเวกเตอร์ ยีนกรีนฟลูออเรสเซนต์ (green fluorescent protein,GFPuv ) เป็นยีนที่ใช้สร้างโปรตีนกรีนฟลูออ เรสเซนต์ซึ่งเป็นโปรตีนติดตามโปรตีนเป้าหมาย (โปรตีนที่ต้องการศึกษา) โดยอยู่ในตำแหน่งของลำดับนิ วคลีโอไทด์ที่ 5239 -5946 ของเวกเตอร์ ข. ยีนต้านยาอิริโทมัยซิน (Erythromycin, EryR), อยู่ในตำแหน่งของลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 97- 828 ของเวกเตอร์ สำหรับใช้ในการคัดเลือกในเชื้อแลคโตบาซิลลัส คาเซอิ (Lactobacillus casei) ค. ยีนเรพพริเคชั่นเอวัน (replication A1, RepA1) มีตำแหน่งนิวคลีโอไทด์อยู่ที่ 1377-2225 ของ เวกเตอร์ ซึ่งเป็นส่วนยีนสร้างโปรตีนเรพพริเคชั่นเอวัน (replication A1) ที่ช่วยในการเพิ่มจำนวน ของเวกเตอร์ในเชื้อแลคโตบาซิลลัส คาเซอิ (Lactobacillus casei) ง. ส่วนจุดเริ่มต้นการเพิ่มจำนวนในเชื้อแลคโตบาซิลลัส คาเซอิ (ori) มีตำแหน่งนิวคลีโอไทด์อยู่ที่ 2365-2468 ของเวกเตอร์ ซึ่งเป็นตำแหน่งที่ทำให้เวกเตอร์สามารถเพิ่มจำนวนได้ในเชื้อแลคโต บาซิลลัส คาเซอิ (Lactobacillus casei) จ. ส่วนจุดเริ่มต้นการเพิ่มจำนวนในเชื้อ เอสเชอริเชีย โคไล (E.coli ori) มีจุดเริ่มต้นที่ตำแหน่งนิวคลี โอไทด์ที่ 3972 ซึ่งเป็นตำแหน่งที่ทำให้เวกเตอร์สามารถเพิ่มจำนวนได้ในเชื้อเอสเชอริเชีย โคไล ฉ. ยีนต้านยาแอมพิซิลิน (Ampicillin, APR) อยู่ในตำแหน่งของลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 4691-3834 ของเวกเตอร์ สำหรับใช้ในการคัดเลือกในเชื้อเอสเชอริเชีย โคไล (Escherichia coli) ช. ตำแหน่งมัลติเปิลโคลนนิ่งไซท์ (multiple cloning site) เป็นตำแหน่งที่มีลำดับยีนบนเวกเตอร์ ที่ สามารถตัดด้วยเอนไซม์ตัดจำเพาะ (restriction enzyme site) เพื่อใช้เป็นบริเวณสำหรับแทรกยีนที่ สนใจเข้าตรงตำแหน่งตัดจำเพาะ โดยที่เวกตอร์นี้มีตำแหน่งมัลติเปิลโคลนนิ่งไซท์ (multiple cloning site) ที่จำเพาะต่อเอนไซม์ 14 ชนิด ดังนี้ - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ AatII มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่ 4822 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ NotI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทดลำดับที่ 4848 และ5991 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ SacII มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำตับที่ 4852 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ EcoRI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่ 4858, 5973, 6224 และ2185 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ HindIII มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่5104, 1030 และ 2652 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ KpnI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่ 5239,12 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ AgeI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่ 5242 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ NdeI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทค์ลำดับที่ 5483 และ 6011 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ XhoI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่ 5675 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ BamHI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่ 5774, 1000 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ SalI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่ 5857, 6005,24, 987 และ1012 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ SpeI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่ 5979 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ PstI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่ 5999 และ 1018 - ตำแหน่งจำเพาะต่อเอนไซม์ XbaI มีตำแหน่งอยู่ที่นิวคลีโอไทด์ลำดับที่ 1006

2. เวกเตอร์ที่มียีนนำส่งโปรตีนออกนอกเซลล์ของเชื้อแลคโตบาซิลลัส คาเซอิ (Lactobacillus casei) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งมีขนาด 6,224 คู่เบส

3. เวกเตอร์ที่มียีนนำส่งโปรตีนออกนอกเซลล์ ของเชื้อแลคโตบาซิลลัส คาเซอิ (Lactobacillus casei) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 2 ที่ซึ่งสามารถแทรกยีนหรือชิ้นดีเอ็นเอ (DNA) ช่วงขนาดตั้งแต่ 100 ถึง 1888 คู่เบส