TH11840A - การทดสอบหาจำนวนสัมบูรณ์ชนิดขั้นตอนเดี่ยว - Google Patents

Abstract

การประดิษฐ์นี้ประกอบด้วยวิธีชนิดขั้นตอนเดียวสำหรับตรวจหาและนับจำนวนสัมบูรณ์ของกลุ่มเซลล์หนึ่งหรือมากกว่าหนึ่ง กลุ่มในตัวอย่างเลือด วิธีการนี้จะใช้รีเอเจนท์ที่ประกอบ ด้วยของผสมของเซลล์มาร์คเกอร์หนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งตัว อนุภาคฟลูโอเรสเซนซ์ขนาดเล็ก และตัวตรึง รีเอเจนท์นี้อาจ ใช้ร่วมกับเลือดครบส่วนที่ไม่ได้ไลซิส และวิเคราะห์โดยการ ใช้โฟรว์ไซโตมิเตอร์

Claims (15)

1. วิธีสำหรับตาจำนวนสัมบูรณ์ของเซลล์หนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งกลุ่มภายในตัวอย่างเลือดครบส่วนหรือไขกระดูกโดยโฟรว์ ไซโตมิเตอร์ ซึ่งประกอบด้วยขั้นตอนของ a) การเติมตัวอย่างลงในหลอดทดลองโดยที่หลอดทดลองมีตัวทำ เจือจางอยู่โดยที่ตัวทำเจือจางนั้นมีเซลล์มาร์คเกอร์หนึ่ง หรือมากกว่าหนึ่งอันเพื่อว่าเซลล์แต่ละกลุ่มในตัวอย่างได้ รับกาาติดฉลากด้วยเซลล์มาร์คเกอร์ และอนุภาคฟลูโอเรสเซนซ์ ขนาดเล็กที่ทราบจำนวน b) การตั้งชะนวนฟลูโอเรสเซนต์เพื่อรวมอนุภาคขนาดเล็กและ เซลล์ทั้งหมดในกลุ่มที่จะต้องนับ c) การตั้งฟลูโอเรสเซนต์เกตหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งเกตเพื่อ แยกแต่ละเซลล์มาร์คเกอร์ออกจากอนุภาคขนาดเล็ก d) การนับเซลล์จากขั้นตอน (c) ที่พอดีหรือสูงกว่าชะนวนฟลู โอเรสเซนซ์และ e) การคำนวณจำนวนเซลล์ต่ออนุภาคขนาดเล็กสำหรับแต่ละฟลูโอเ รสเซนซ์เกตจากขั้นตอน (d) และคูณแต่ละค่าด้วยความเข้มข้น ของอนุภาคขนาดเล็กที่ได้จากค่าสัมบูรณ์ของเซลล์ต่อหน่วย ปริมาตร

2. วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ตัวอย่างนั้นเป็นเลือด ครบส่วนที่ไม่ได้ไลซิส

3. วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่เซลล์มาร์คเกอร์หนึ่ง หรือมากกว่าหนึ่งอันประกอบด้วยอิมมูโนฟลูโอเรสเซนซ์มาร์ค เกอร์ โดยที่อิมมูโนฟลูโอเรสเซนซ์มาร์คเกอร์นั้นประกอบ ด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดีจับอยู่กับฟลูโอโรโครม

4. วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 3 โดยที่โมโนโคลนอลแอนติบอดีนั้น คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอนติ -CD4 แอนติ - CD3 แอน ติ - CD14 แอนติ -CD 15 และ แอนติ -CD45 โมโนโคลนอล แอนติบอดี

5. วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 4 โดยที่ฟลูโอโรโครมนั้นคัดเลือก จากกลุ่มที่ประกอบด้วยไฟโคบิลีโปรตีน อนุพันธ์ฟลูโอเรสซีน โรคามีน อนุพันธ์พธาโลไซยานิน สารประกอบเพอริดินิน คลอ โรฟิล และ อนุพันธ์คูมาริน

6. วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่อนุภาคขนาดเล็กนั้นคัด เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย เม็ดเลือดแดงของไก่ที่ได้รับ การตรึง ไลโพโซมที่มีสีฟลูโอเรสเซนซ์ บีดคูมาริน บีดฟลูโอเ รสเซนซ์ บีดโรคามีน เซลล์ฟลูโอเรสเซนซ์ที่ได้รับการตรึง ฟลูโอเรสเซนซ์เซลส์นิวคลีไอจุลชีพ บีดที่ติดฉลากที่ผิวที่ ติดด้วยสีฟลูโอเรสเซนซ์

7. วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่เซลส์มาร์คเกอร์หนึ่ง หรือมากกว่าหนึ่งอันประกอบด้วยสารที่ติดฉลากฟลูโอเรสเซนซ์

8. วิธีตามข้อถือสิทธิที่ 7 โดยที่สารที่ติดฉลากฟลูโอเรส เซนซ์นั้นคัดเลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วยสีกรดนิวคลีอิค 7-อะมิโน-แอคติโนมัยซิน D ไธอะโซล ออเรนจ์ ไธโอเฟรวิน T LDS-751 และ อะคริดีน ออเรนจ์

9. วิธีทางจำนวนสัมบูรณ์ของเซลล์กลุ่มหนึ่งภายในตัวอย่าง เลือดครบส่วนโดยใช้โฟลว์ไซโตมิเตอร์ที่ประกอบด้วยขั้นตอน ของ a) การเติมตัวอย่างลงในหลอดทดลองโดยที่หลอดทดลองมีตัวทำ เจือจางอยู่โดยที่ตัวทำเจือจางนั้นประกอบด้วยไอโซโท นิคบัฟเฟอร์ อิมมูฟลูโอเรสเซนซ์มาร์คเกอร์หนึ่งอันเพื่อ เซลล์ในตัวอย่างจะได้ติดฉลากด้วยอิมมูฟลูโอเรสเซนซ์มาร์ค เกอร์ สารที่ใช้ตรึงและอนุภาคขนาดเล็กที่มีออโตฟลูโอเรส เซนซ์ในช่องฟลูโอเรสเซนซ์สองช่องที่ทราบความ b) การตั้งชะนวนฟลูโอเรสเซนซ์ในช่องฟลูโอเรสเซนต์ในช่องที่ สองเพื่อรวมอนุภาคขนาดเล็กและเซลล์ทั้งหมดในกลุ่มที่จะต้อง นับ c) การนับอนุภาคขนาดเล็กและเซลล์ที่ติดฉลากอิมมูโนฟลูโอเรส เซนซ์ทั้งหมดที่เท่ากับหรือมากกว่าชะนวนฟลูโอเรสเซนต์ใน ช่องฟลูโอเรสเซนซ์ที่สองโดยใช้โฟล์วไซโตมิเตอร์ 3 d) การตั้งเกตฟลูโอเรสเซนต์ในช่องฟลูโอเรสเซนซ์ที่หนึ่งและ สองเพื่อแยกอิมมูโนฟลูโอเรศเซนซ์มาร์คเกอร์ออกจากอนุภาค ขนาดเล็ก e) การนับจำนวนของเซลล์ต่ออนุภาคขนาดเล็กจากขั้นตอน (f) และคูณด้วยความเข้มข้นของอนุภาคขนาดเล้กที่ได้จากค่า สัมบูรณ์ของ e) การนับจำนวนของเซลส์ต่ออนุภาคขนาดเล็กจากขั้นตอน (f) และคูณด้วยความเข้มข้นของอนุภาคขนาดเล็กที่ได้จากค่า สัมบูรณ์ของเซลล์ต่อหน่วยปริมาตร

10. วิธีสำหรับหาจำนวนสัมบูรณ์ของลิมโฟไซท์ CD4+ ภายในตัว อย่างเลือดครบส่วนโดยใช้โฟลว์ไซโตมิเตอร์ซึ่งประกอบด้วย ขั้นตอนของ a) การเติมตัวอย่างลงในหลอดทดลองโดยที่หลอดทดลองมีตัวทำ เจือจางอยู่โดยที่ตัวทำเจือจางนั้นมี แอนติ -CD4+ โมโน โคลนอลแอนติบอดีที่จับกับโฟโคอีริธิน พาราฟอร์มัลดีไฮด์ และอนุภาคออโตฟลูโอเรสเซนต์ขนาดเล็ก 2 um ที่ทราบความเข้ม ข้น b) การตั้งชะนวนฟลูโอเรสเซนซ์ในช่องฟลูโอเรสเซนซ์ช่องที่ สองเพื่อรวมอย่างน้อย 99% ของอนุภาคขนาดเล็กและลิมโฟไซท์ CD+4 ทั้งหมด c) การตั้งเกตฟลูโอเรสเซนซ์ในช่องฟลูโอเรสเซนซ์ที่หนึ่งและ สองเพื่อแยกระหว่างไฟโคอิริธรินฟลูโอเรสเซนซ์ที่เกี่ยวข้อง กับการติดฉลากลิมโฟไซท์ CD4+ และออโตฟลูโอเรสเซนซ์ของ อนุภาคขนาดเล็ก d) การนับจำนวนของลิมโฟไซท์ CD4+ และอนุภาคขนาดเล็กจากขั้น ตอน (c) และ e) การคำนวณจำนวนของ CD4+ ลิมโฟไซท์ต่ออนุภาคขนาดเล็กจาก ขั้นตอน (d) โดยคูณด้วยความเข้มข้นของอนุภาคขนาดเล็กที่ได้ จากค่าสัมบูรณ์ดของลิมโฟไซท์ CD4+ ต่อหน่วยปริมาตร

11. สารละลายสำหรับย้อมเลือดครบส่วนที่ไม่ไลซิสซึ่งประกอบ ด้วย ตัวทำเจือจาง โดยตัวทำเจือจางประกอบด้วยโมโนโคลนอล แอนติบอดีที่ติดฉลากด้วยฟลูโอเรสเซนซ์ตัวตรึง และอนุภาคฟลู โอเรสเซนซ์ขนาดเล็ก

12. สารละลายของข้อถือสิทธิ 11 โดยที่แอนติบอดีตัวหนึ่ง เป็น แอนติ-CD4 โมโนโคลนอลแอนติบอดี

13. สารละลายของข้อถือสิทธิที่ 35 โดยที่ส่วนติดฉลากฟลูโอเ รสเซนซ์เป็นไฟโคอีริธริน

14. สารละลายของข้อถือสิทธิที่ 35 โดยที่สารที่เป็นตัวจริง คือ พาราฟอร์มัลดีไฮด์

15. สารละลายสำหรับย้อมลิมโฟไซท์ CD4+ และ CD8+ ในตัวอย่าง เลือดครบส่วนที่ไม่ไลซิส โดยที่สารละลายประกอบด้วย แอน ติ-CD4 โมโนโคลนอล แอนติบอดีที่จับกับฟลูโอโรโครม แอน ติ-CD8 โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จับกับฟลูโอโรโครม ตัวที่สอง แอนติ-CD3 โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จับกับฟลูโอโรโครมตัวที่ สาม พาราฟอร์มัลดีไฮด์ และบีคออโตฟลูเรสเซนต์ (ข้อถือสิทธิ 15 ข้อ, 4 หน้า, 4 รูป)