TH116152A - กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon) ด้วยวิธีการแช่แข็ง - Google Patents

Abstract

------21/12/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้า บทสรุปการประดิษฐ์ การประดิษฐ์นี้เกี่ยวกับกรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนำเชื้อกุ้งกุลาดำ (Penaeus ทาonodori) ด้วยวิธีการแช่แข็งโดยการใช้สารละลายบัฟเฟอร์ปรับสมดุลถุงเก็บน้ำเชื้อ และใช้สารไครโอโพรเทคแทนท์ป้องกันเซลล์สเปิร์มขณะแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว ก่อนที่จะทำการแช่แข็งจะต้องลดอุณหภูมิของถุงเก็บนี้เชื้อโดยใช้อัตราการลดอุณหภูมิ 2 องศาเซลเซียสต่อนาที จนอุณหภูมิสุดท้ายอยู่ระหว่าง -80 ถึง - 90 องศาเซลเซียส พักนานประมาณ 1 - 5 นาที จึงนำไปแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว เมื่อจะนำไปใช้ก็เพียงแต่ละลาย (thaw) ในน้ำที่มีอุณหภูมิระหว่าง 30-35 องศาเซลเซียส นานไม่เกิน 1นาที ถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งที่ใช้การแช่แข็งนี้สามารถเก็บไว้ได้นานโดยที่สเปิร์มยังคงมีชีวิตและนำไปใช้ในการผสมเทียมได้เหมือนการรดน้ำเชื้อสดๆ จากพ่อพันธุกุ้ง นอกจากนี้ยังสามารถนำไปใช้กับไข่ ตัวอ่อนระยะต่างๆ ของกุ้งกุลาดำ และครัสเตเชี่ยนนอกเหนือจากกุ้ง ได้แก่ ปู กั้ง ปลาหมึก ------------ การประดิษฐ์นี้เกี่ยวกับพัฒนากรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งกุลาดำ (penaeus monodon) ด้วยวิธี การแช่แข็ง โดยการ ใช้สารละลายบัฟเฟอร์ปรับสมดุลถุงเก็บน้ำเชื้อ และใช้สารไคโอโพ รเทคแทนท์ป้องกันเซลล์สเปิร์มขณะ แช่แข็งในไนโตรเจนเหลว ก่อนที่จะทำการแช่แข็งจะต้องลดอุณหภูมิของถุงเก็บน้ำเชื้อโดยใช้อัตราการลดอุณหภูมิ 2 องศา เซลเซียสต่อนาที จนอุณหภูมิสุดท้ายอยู่ระหว่าง -80 ถึง -90 องศาเซลเซียส พักนานประมาณ 1 - 5 นาที จึงนำไปแช่ แข็งในไนโตรเจนเหลว เมื่อจะนำไปใช้ก็เพียง แต่ละลาย (thaw) ในน้ำที่มีอุณหภูมิระหว่าง 30-35 องศาเซลเซียส นานไม่เกิน 1 นาที ถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งที่ใช้การแช่แข็งนี้สามารถเก็บไว้ได้นานหลายปีโดยที่สเปิร์มยังคงมีชีวิตและนำไปใช้ในการผสม เทียมได้เหมือนการน้ำเชื้อสด ๆ จากพ่อพันธุ์กุ้ง นอกจากนี้ ยังสามารถนำไปใช้กับไข่ ตัวอ่อนระยะต่าง ๆ ของกุ้งกุลาดำ และครัสเต เชี่ยนชนิดอื่นๆ เช่น ปู กั้ง ปลาหมึก ฯลฯ

Claims (9)

ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :------21/12/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 2 หน้า ข้อถือสิทธิ

1. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนํ้าเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ที่มีลักษณะเฉพาะคือ ใช้สารละลายบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมในการปรับสมดุลถุงเก็บนาเชือของกุ้งและใช้สารละลายใครโอโพรเทคแทนท์ (cryoprotectant) เพื่อป้องกันเซลล์สเปิร์มขณะแช่แข็ง โดยนำถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งแช่สารละลายบัฟเฟอร์และสารละลายไครโอโพรเทคแทนท์ จนกระทั่งถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งอยู่ในภาวะสมดุล ทำการลดอุณหภูมิเพื่อแช่แข็งถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้ง ปล่อยพักไว้ แล้วนำไปแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวตามระยะเวลาที่เหมาะสม เมื่อจะนำถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งที่แช่แข็งไปใช้จะทำการละลายถุงเก็บน้ำเชื้อดังกล่าว

2. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ชึ่ง การละลายถุงเก็บน้ำเชื้อดังกล่าว มีลักษณะเฉพาะคือ นำถุงเก็บน้ำเชื้อที่ถูกแช่แข็งมาละลาย (thawing) ในซึ่งมีอุณหภูมิระหว่าง 30-35 องศาเซลเซียสนานไม่เกิน1นาที แล้วนำถุงเก็บน้ำเชื้อไปใช้ประโยชน์ต่อไป

3. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ เป็นวิธีที่ใช้กับกุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon)

4. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ สารละลายบัฟเฟอร์ที่เหมาะสม ได้แก่ แคลเซียมฟรีซาสิน (Calcium Free saline, Ca Free saline, C-F saline) ซึ่งเตรียมโดยนำโซเดียมคลอไรด์ (NaCI) 20-25 กรัม, โปแตสเชียมคลอไรด์ (KCI) 1-5 กรัม, ไตรไฮโดรเจนโบร์ไมด์ (FI3BO3) 0.5-1กรัม, โซเดียมไฮดรอกไซด์ (NaOH) 0.1-0.3 กรัม และแมกนีเซียมซัลเฟต (MgSo4.7FI20) 1-5 กรัม เจือจางในน้ำกลั่นปริมาตร 1 ลิตร แล้วปรับความเป็นกรดด่าง (pH) ให้อยู่ระหว่าง 7-8 โดยใช้กรดไฮโดรคลอรค (HCI)

5. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ สารไครโอโพรเทคแทนท์ (cryoprotectant) เลือกได้จาก นาตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ และ/หรือไดเมทธีลซัลฟอกไซด์ (dimethylsulfoxide หรอ DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ชนิดใดชนิดหนึ่ง หรือสองชนิดรวมกัน

6. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ตามข้อถือสิทธิที่ 1,3, 5ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง สารไครโอโพรเทคแทนท์ (cryoprotectant) มีการเตรียมที่มีลักษณะเฉพาะคือ ชั่งน้ำตาลซูโครส และ/หรือ ดีเอ็มเอสโอ แล้วเจือจางในนำกลั่นใน 3 ลักษณะคือ ก. ใส่น้ำตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์โดยปริมาตร พร้อมกับดีเอ็มเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น5-10 เปอร์เซ็นต์โดยปริมาตร อย่างละปริมาณเท่ากันในบีกเกอร์ให้ได้ ความเข้มข้นสุดท้ายของสารละลายไครโอโพรเทคแทนท์เป็นครึ่งหนึ่งของความเข้มข้นตั้งต้น แล้วแช่ถุงเก็บน้ำเชื้อลงไปในสารละลาย ข. เตรียมน้ำตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์โดยปริมาตร ก่อนในบีกเกอร์แล้ว แช่ถุงเก็บน้ำเชื้อทั่งไว้ 10 นาที แล้วใส่ดีเอ็มเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์โดย ปริมาตร ในปริมาณที่เท่ากับปริมาณสารละลายซูโครส (sucrose solution) ที่ใส่ลงไปเพื่อให้ได้หน้า 2 ของจำนวน 2 หน้าความเข้มข้นสุดท้ายของสารละลายไครโอโพรเทคแทนท์ (cryoprotectant) เป็นค\'รึงหนึงของความเข้มข้นเดิม แล้วแช่ถุงเก็บนาเชือลง1ไป\'ในสารละลายค. เต่รืยมดีเอ็มเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์โดย!]ริมาตร ในปีกเกอร์แล้วแซ่ถุงเก็บนาเชือลงไปในสารละลาย

7. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนาเชือของกุ้งด้วยการแซ่แข็งตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ เวลาที่ใช้แซ่ถุงเก็บนํ๋าเชือกุ้งในสารละลายไครโอโพรเทคแทนท์ เพื่อให้เกิดภาวะสมดุล (equilibration period) นานไม,เกิน 60 นาที

8. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนํ้าเชือฃองกุ้งด้วยการแซ่แข็งตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ อัตราการลดอุณหภูมิ คือ 2 องศาเซลเซียสต่อนาที

9. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนํ้าเซือฃองกุ้งด้วยการแซ่แข็งตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ อุณหภูมิสุดท้าย (final temperature) ที่ต้องการ มีค่าระหว่าง -80 ถืง -90 องศาเซลเซียส ปล่อยพักไว้นาน 1-5 นาที1 กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนํ้าเชือฃองกุ้งด้วยการแซ่แข็งตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ ระยะเวลาเก็บรักษาถุงเก็บนํ้าเชือในไนโตรเจนเหลวเก็บได้นานกว่า 1 เดือน โดยที่คุณภาพสเปิร์มภายในถุงเก็บนาเชือไม่เปลี่ยนแปลง1 กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนาเชือของกุ้งด้วยการแซ่แข็ง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 -10ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง สามารถนำไปใช้กับ ไข่ ตัวอ่อนระยะต่างๆ ของกุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon) และลัตว์ครัสเตเชี่ยนนอกเหนือจากกุ้ง คือ กัง ปูปลาหมึก ------------ กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง มีลักษณะเฉพาะคือ ใช้สารละลายบัฟเฟอร์ที่ เหมาะสมในการปรับสมดุล ถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งและใช้สารละลายไคโอโพรเทคแทนท์ (cryopro tectant) ชนิดต่าง ๆ เพื่อ ป้องกันเซลล์เปิร์มขณะแช่แข็ง โดยนำถุง เก็บน้ำเชื้อกุ้งแช่สารละลายบัฟเฟอร์และสารละลายไคโอโพรเทคแทนท ์ จน กระทั่งถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งอยู่ในภาวะสมดุล ทำการลดอุณหภูม ิเพื่อแช่แข็งถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้ง ปล่อยพักไว้ แล้วนำไปแช่แข็งใน ไนโตรเจนเหลวตามระยะเวลาที่เหมาะสม กรรมวิธีการละลายถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งที่ถูกเก็บรักษาด้วยวิธี การแช่แข็ง มีลักษณะเฉพาะ คือ นำถุงเก็บน้ำ เชื้อที่ถูกแช่แข็งมา ละลาย (thawing) ในน้ำซึ่งมีอุณหภูมิระหว่าง 30-35 องศาเซลเซีย ส นานไม่เกิน 1 นาที แล้วนำถุงเก็บ น้ำเชื้อไปใช้ประโยชน์ต่อไป กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตา มข้อถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ เป็นวิธีที่ ใช้กับกุ้งกุลา ดำ (penaeus monodon) กรรมวิธีเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตามข้ อถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ สารละ- ลายบัฟเฟอร์ที่เหมาะสม ไ ด้แก่ แคลเซียมฟรีซาลีน (Calcium Free saline, Ca Free saline, C -F saline) ซึ่งเตรียมโดยนำ โซเดียมคลอไรด์ (NaCl) ประมาณ 20-25 ก รัม, โปแตสเซียมคลอไรด์ (KCl) ประมาณ 1-5 กรัม, ไตรไฮโดรเจนโบร์ ไมด์ (H3BO3) ประมาณ 0.5-1 กรัม และแมกนีเซียมซัลเฟต (MgSo4.7H 2O) ประมาณ 1-5 กรัม เจือจางในน้ำกลั่นปริมาตร 1 ลิตร แล้วปรับค วามเป็นกรดด่าง (pH) ให้อยู่ระหว่าง 7-8 โดยใช้กรดไฮโดรคลอริค ( Hcl) กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตา มข้อถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ สารไค โอโพรเทคแทน (cryoprot ectant) ชนิดต่างๆ ได้แก่ น้ำตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5- 10 เปอร์เซ็นต์, ไดเมทธิลซัล โฟไซด์ (dimethylsulfoxide หรือ DMS O) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ สารไครโอโพรเทคแทน (cryoprotectant) ที่ใช้ในกรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ตามข้อถือสิทธิข้อ 5 มีลักษณะเฉพาะคือ 6.1 ใส่น้ำตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ พ ร้อมกับดีเอ็มเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ อย่างล ะปริมาณเท่ากันในบีกเกอร์ให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ สารละลายไ คโอโพรเทคแทนท์เป็นครึ่งหนึ่งของความเข้มข้นตั้งต้น แล้วแช่ถุงเ ก็บน้ำเชื้อลงไปใน สารละลาย 6.2 เตรียมน้ำตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซนต์ ก่อนในบีกเกอร์แล้วแช่ถุงเก็บน้ำ เชื้อทิ้งไว้ 10 นาที แล้วใส่ ดีเอ็มเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ ในปริมาณที่เ ท่า กับปริมาณสารละลายซูโครส (sucrose solution) ที่ใส่ลงไปเ พื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ สารละลายไคโอโพรเทคแทนท์ (cryo protectant) เป็นครึ่งหนึ่งของความเข้มข้นเดิม แล้วแช่ถุง เก็บน้ำเชื้อลงไปในสารละลาย 6.3 เตรียมดีเอ็ทเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ ใน บีกเกอร์แล้วแช่ถุงเก็บน้ำเชื้อลง ไปในสารละลาย กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตามข้อ ถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ เวลาที่ ใช้แช่ถุงเก็บน้ำเชื้อก ุ้งในสารละลายไคโอโพรเทคแทนท์ เพื่อให้เกิดภาวะสมดุล (equilibr ation period) นานไม่เกิน 60 นาที กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตา มข้อถือสิทธิ 1 มีลักษณะฉพาะ คือ อัตรา การลดอุณหภูมิ คือ 2 องศาเซลเซีย สต่อนาที กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตา มข้อถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะฉพาะคือ อุณหภูมิ สุดท้าย (final te mperature) ที่ต้องการ มีค่าระหว่าง -80 ถึง -90 องศาเซลเซียส ปล่ อยพักไว้นาน 1-5 นาที 1 กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งต ามข้อถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะฉพาะคือ ระยะ เวลาเก็บรักษาถุงเก็บ น้ำเชื้อในไนโตรเจนเหลวเก็บได้หลายปีโดยที่คุณภาพสเปิร์มภายในถุงเก็บน้ำเชื้อไม่เปลี่ยนแปลง 1 1.กรรมวิธีการประดิษฐ์ตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1-10 สามารถนำไปใช ้กับ ไข่ ตัวอ่อนระยะต่างๆ ของกุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon) แล ะสัตว์ครัสเตเชี่ยนชนิดอื่นๆ เช่น กั้ง ปู ปลาหมึก ฯลฯ