SU981358A1

SU981358A1 - Субстрат дл закреплени бактерий и способ получени неспорообразующих бактерий рода рSеUDомоNаS

Info

Publication number: SU981358A1
Application number: SU813258386A
Authority: SU
Inventors: Вера Петровна Тульчинская; Галина Андреевна Кожанова; Тамара Алексеевна Беляева; Татьяна Владимировна Васильева; Людмила Алексеевна Калмазан
Original assignee: Одесский Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им.И.И.Мечникова
Priority date: 1981-09-22
Filing date: 1981-09-22
Publication date: 1982-12-15
Also published as: SU1093698A1

Description

( СУБСТРАТ ДЛЯ ЗАКРЕПЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ

И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НЕСПОРООБРАЗУЮ1ЦИХ БАКТЕРИЙ РОДА PSEIJDOHONAS

Изобретение относитс к микробиологии и методам хранени микроорганиз МОЕ, предназначенных дл очистки загр зненных вод, Известен субстрат дл закреплени спор актиномицетов, содержащий песок в смеси -с почвой 1 . Недостатком указанного субстрата вл етс то, что он предназначен дл хранени спор и не пригоден дл адсорбции клеток неспорообразующих бактерий , например, рода Pseudononas без предварительной лиофилизации. Известен субстрат дл закреплени споровых бактерий ThiobaciBPus ferrokicPous , содержаи1ий песок в смеси с пиритом 2. Однако этот субстрат также не пригоден дл хранени неспорообразующих бактерий. . Известен также способ получени и хранени неспорообразуюи(их бактерий , предусматриваюций адсорбцию микроорганизмов в дисперсном субстрате , согласно которому лиоЛилизированные клетки бактерий адсорбируют на гранулах пемзы недостаткам данного способа следует отнести необходимость использовани специальной.дорогосто щей аппаратуры дл диофилизации культур бактерий . Дл некоторых культур хранение в диофилизированном состо нии на гранулах пемзы не превышает 6 мес, что недостаточно. Цель изобретени - упрои ение способа и .удлинение сроков сохранени биохимической активности неспорообразующих бактерий рода Pseudononas. Поставленна цель достигаетс тем, что субстрат дл закреплени бактерийj содержащий песок, дополнительно содержит рыбную муку при соотношении компонентов, вес.: Рыбна мука 80-85 Песок 15-20 а также тем, что согласно способу получени неспорообразующих бактерий 398135 рода Pseudomonas, предусматривающему адсорбцию микроорганизмов в дисперсном субстрате, адсорбцию осуществл ют в процессе культивировани бактерий с cyfJcTpaTOM, в качестве которого используют смесь рыбной муки с песком, вз тых в соотношении 4:1 - 5,7:1 внесенного в среду в количестве 10 с последующим отделением адсорбированной биомассы, промыванием ее стерильным физиологическим раствором И помещением в стерильный 0,8-1, раствор хлористого натри при соотношении биомассы и раствора 1:8-1:10. Пример 1. Осуществл ют за- is крепление на субстрате и получение и хранение штамма бактерий деструкторо PS. aeruginosa КМ, способных разрушать органические красители и предназначенные дл очистки сточных вод высокой цветности. В качестве субстрата дл закрепле ни бактерий примен ют рыбную муку, промь,1тую в течение суток проточной водой и прокаленную при 200 С в течение (-X часов. Обработанна таким образом мука представл ет собой поро шок коричневого цвета. Дл предупреж дени комковани муку смешивают с песком, который подвергают аналогичной предварительной обработке. Песок и рыбную муку смешивают при следующем объемном соотношении компонентов , %: мука 80; песок 20. Дл одного опыта берут АО см муки и 10 см песка , Суточную агаровую культуру бактерий в дозе 500 млн клеток/мл внос т в минеральную среду М-9 следующего состава, г: калий фосфорнокислый однозамещенный 3,0; аммоний хлористый 1,0, вода дистиллированна 1000 мл. рН среды устанавливают добавлением 10 раствора кальци гидрата. В минеральную среду дополнительно внос т субстрат дл окислени - краситель кислотный черный С в концентрации 25 мг/л. Субстрат дл адсорбци бактерий внос т в минеральную указанного состава в количестве 10 обо%, т.е. в опыте к 300 см среды добавл ют 30 см субстрата. Адсорбцию культуры на субстрате осуществл ют в процессе культивирова . ни в течение 48 ч при 30°С. Затем, закрепленные на субстрате клети бактерий отмывают дважды стерильным физио логическим раствором, после чего суб страт с закрепленными клетками переJ 10 4 нос т в 8 пробирок размером 25 х х 1,5 см в количестве 3 см и заливают 2| см стерильного 0,8 -ного раствора хлорида натри ( объемные соотношени субстрата и раствора 1:8. Культуру хран т при +4°С и при комнатной температуре. По истечении определенных сроков хранени (6,9, 12 и 2 мес ) изучают жизнеспособность и дестру(стивную активность птамма Ps. aeruqinosa KM. Проверку жизнеспособности и деструктивной активности бактерий после хранени в услови х периодического культивировани осуществл ют следующим образом. Дл реизол ции бактерий после хранени субстрата с закрепленными клетками промывают 3 раза стерильным физиологическим раствором, растирают в стерильной ступке, а затем используют как инокул т при посеве в минеральную среду М-9. После культивировани в течение 48 ч при 30°С производ т рассев на поверхность м со-пептонного агара в чашках Петри дл выделени чистой культуры. При проверке окислительной ( деструктивной j активности бактерий используют суточную агаровую культуру, которую в дозе 500 млн. к-к/мл внос т в минеральную среду М-9, содержащую загр зн ющее вещество - краситель кислотный черный С в концентрации 100 мг/ло Микробиологическое окисление осуществл ют в процессе периодического культив.ировани при 30 С в течение 48 ч в стационарных услови х. Результаты деструкции учитывают методом фотоэлектроколориметрии на ФЭК-56 при А 750-760 мм (красный светофильтр} после осаждени микробных клеток центрифугированием при 4 тыс. об/мин в течение 8 мин. Культура бактерий Ps. aeruginasa KM после 6, 9, 12 и 24 мес. хранени независимо от температурного режима сохран ет способность к росту в ми неральной среде М-9 и вызывает 98100 -ную деструкцию красител кислотного черного С (таблица). Пример 2. Осуществл ют закрепление на субстрате и получение и хранение штамма бактерий деструкторов PS. fluorescens ., Обработку рыбной муки и песка осуществл ют как указано в примере 1.

Муку и песок смешивают при следующем объемном соотношении компонентов , %: мука 85;о песок 15- Дл опыта берут З см и 8 см песка.

Суточную агаровую культуру бактерий D дозе 500 млн к-к/мл внос т в минеральную среду М-9, в которую дополнительно ввод т субстрат дл окислени - краситель кислотный черный С в концентрации 75

Адсорбцию культуры на субстрате осуществл ют как указано в примере 1.

Хранение осуществл ют в 8 пробирках под слоем стерильного 1,0%-ного раствора хлорида натри при объемном соотношении субстрата и раствора 1:10/3 см субстрата заливают 30 см раствора хлорида натри , при +if С и при комнатной температуре

По истечении определенных сроков хранени (.6, 9, 12 и мае) изучают жи-знеспособность и деструктивную активность штамма Ps. fPuorescens 2, как указано в примере 1 (загр знитель - краситель кислотный черный С в концентрации 75 мг/л ),

Культура бактерий Ps. fPuorescens 2 после 6, 9, 12 и 2 мае хранени независимо от температурного режима сохран ет способность к росту в минеральной среде М-9 и вызывает 90100 -ную даструкцию красител кислотного черного С в концентрации 75 мг/л

Пример 3. Осуществл ют закрепление на субстрате и получение и хранение штамма бактерий деструкторов PS. species 6, предназначенных дл очистки от формальдегида сточных вод химических производств.

Обработку рыбной муки и паска осуществл ют , как указано в примера 1. Муку и пасок смешивают при следующем (Объемном соотношении компонентов,: мука 82,5; пасок 17,5. Дл опыта берут 1 см муки и 9 см песка.

Суточную агаровую культуру бактерий ti доза 500 млн к-к/мл внос т в минеральную среду М-9, в которую дополнительно ввод т субстрат дл окислени - формальдегид в концантрации ,100 мг/л.

Адсорбцию культуры на субстрате осуществл ют как указано в примере 1,

Хранение осуществл ют в пробирках под слоем стерильного 1,0%-ного раствора хлорида натри при объемном соотношении субстрата и раствора 1:9/ /3 см субстрата и 27 см раствора хлорида натри при +Ц°С и при комнатной температуре.

По истечении определенных сроков хранени изучают жизнеспособность бактерий, как указано, и деструкцию формальдегида в концентрации 500 мг/л колориметрическим методом с применением хромотроповой кислоты.

Птамм PS. species 6 после 6, 9 12 и t.k мес хранени независимо от температурного режима сохран ет способность к росту в минеральной среде М-9 и вызывает деструкцию формальдегида.

Схема опыта и сроки хранени биохимически активных бактерий представлены в таблице.

Т.е., на примере 3 штаммов бактерий деструкторов рода Psaudomonas установлено , что после мес хранени предлагаемым способом на новом субстрате бактерии сохран ют высокую окислительную активность, что позвол ет использовать их дл микробной очистки водной среды от токсикантов-загр знителей после длительного хранени .

Предлагаемое изобретение обуславливает социальный эффект, так как упрощает процесс хранени микроорганизмов .

Возможность использовани бактерий дл микробной очистки водной среды от токсикантов-загр знителей после длительного хранени обусловливает экологический эффект в аспекте борьбы за охрану окружающей среды.

Таким образом, реализаци изобретени позвол ет длительно хранить не спорообразуюи1ие бактерии рода Pseudomonas , использу упрощенный способ хранени и обеспечить сохранение их биохимической активности.

JCM

о

vO

СП

CO

s s J

0

«

s «.

(U LO

TO

n

0)

n:

с s

H

o

H

o a

СУ &Q

31 Lr L.,

Ш 3

(3 чО 7 m

о u)

IT СП

rvl rо о

CO -

00 гс -3 a z «x м

Ь

л (U о

о Ш ж

го О

ft) it

(С о X о и v и

Z0) и

X

0)

s:

Z (

ж; с:

tj с

о.

a

а

0) ш

0)

S

з: а

s

о.

Q.

Claims

Формула изобретени

1 о Субстрат дл закреплени бактерий , содержащий песок, отличающийс тем, что, с целью уд инени сроков хранени неспорообразующих бактерий рода Pseudomonas, субстрат дополнительно содержит рыбную муку при соотношении компонентов, вес.%: .

Рыбна мука 80-85

Песок15-20
2. Способ получени неспорообразующих бактерий рода Pseudomonas, предусматривающий адсорбцию бактерий в дисперсном субстрате, отличающийс тем, что, с целью упрощени способа и удлинени сроков сохранени биохимической активности бактерий рода Pseudomonas, адсорбцию осуществл ют в процессе культивировани бактерий с субстратом, в качестве ко981358

10

торого используют смесь рыбной муки с песком, вз тых в соотношении trl5 ,7tl, внесенного в среду в количестве 10% с последующим отделением адсо бированной биомассы, промыванием ее стерильным физиологическим раствором и помещением в стерильный 0,81 ,0%-ный раствор хлористого натри при соотношении биомассы и раствора 1:8-1:10.

Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе

1.Истоды хранени коллекционных культур микроорганизмов. М„, Наука

1967, ,

2.Авторское свидетельство СССР по за вке К 2781918/28-13,

кл. С 12 N 1/00, 1979.
3.JuvenB.I. А simple method for long-termpreservation of stock cultures of lacti acid bacteria. - J. . Bacteriol., 1979, «7 N 9.