SU951138A1

SU951138A1 - Method of preparing solution series for microtitration

Info

Publication number: SU951138A1
Application number: SU802987061A
Authority: SU
Inventors: Николай Николаевич Сагайдаковский
Original assignee: Львовский Научно-Исследовательский Институт Эпидемиологии И Микробиологии
Priority date: 1980-09-15
Filing date: 1980-09-15
Publication date: 1982-08-15

Description

Изобретение относитс к биологии и медицине, в частности к микробиологии , иммунологии и вирусологии, и может быть использовано при серологических исследовани х,например дл постановки реакции агглютинации или других тестов при титровании различных, биологических жидкостей всерийныхразведени х. ,The invention relates to biology and medicine, in particular to microbiology, immunology, and virology, and can be used in serological studies, for example, to formulate an agglutination reaction or other tests for the titration of various biological fluids in serial dilutions. ,

Известен способ приготовлени серийных разведений дл микротитровани с помощью специалышх устройств - микротитраторов.Такие устройства имеют: титровальную пЛастину с чейками в виде расположенных р дами . углублений , дозировочную пипетку с капельной насадкой и приспособление дл разбавлени титруемой жидкости . Приспособление дл разбавлени жидкости выполнено в виде рубашки из термостойкой пластинки, охваты вающей с соблюдением .зазора конец металлического стержн , и образующей по существу определенной фор- мы открытый капилл рный сосуд заданного объема, прикрепленный к концу стержн . Другой конец стержн служит руко ткой приспособлени дл разбавлени жидкости. Известный способ приготовлени серийных разведений заключаетс в следующем. Описанный капилл рный сосуд при работе заполн ют титруемой жидкостью путем прикосновени стенкой этого сосуда к поверхности жидкости, имеющейс на пример, в пробирке. При этом вследствие смачиваемости стенки капилл рного сосуда поверхностный слой жидкости, наход щийс в пробирке, There is a known method of preparing serial dilutions for microtitration using special devices - microtitrators. Such devices have: a titration plate with cells in the form of rows. recesses, dosing pipette with a dropping nozzle and a device for diluting the titrated liquid. The liquid dilution device is made in the form of a jacket made of a heat-resistant plate, which, while observing the gap, complies with the end of the metal rod and forms an open capillary vessel of a predetermined volume, which is attached to the end of the rod. The other end of the rod serves as a handle for the device to dilute the liquid. A known method for preparing serial dilutions is as follows. During operation, the described capillary vessel is filled with a liquid to be titrated by touching the wall of this vessel to the surface of the liquid, such as in a test tube. In this case, due to the wettability of the capillary vessel wall, the surface layer of the liquid in the test tube,

10 разрываетс , и жидкость за счет капилл рности сосуда устремл етс в его полость, заполн ет ее и в дальнейшем удерживаетс поверхностным нат жением, в капилл рном сосуде. 10 is ruptured and, due to the capillary nature of the vessel, the liquid rushes into its cavity, fills it and is subsequently maintained by surface tension in the capillary vessel.

15 Серийныеразведени дл микротитровани готов т, использу титровальную пластину с чейками, дозировочную пипетку дл разбавител и приспособление дл разбавлени жидкос20 ти с капилл рным сосудом путем выполнени приемов с перечислентлми элементами в следующей последовательности: с помощью дозировочной пипетки разливают разбавитель в по25 ел едоват.ельный р д чеек титровальной пластины в объеме, равном объему титруемой жидкости, который удерживает капилл рный сосуд (например, в объеме 0,025 мл, что соответству30 ет однойкапле). Затем-капилл рный15 Serial microtiter dilutions are prepared using a cell titration plate, a dilution dosing pipette and a liquid diluent device with a capillary vessel by performing enumeration elements in the following sequence: dilute the diluent in a 25 ел spherical bottle with the dosing pipette The cells of the titration plate have a volume equal to the volume of the liquid being titrated, which holds the capillary vessel (for example, in a volume of 0.025 ml, which corresponds to one drop). Then capillary

сосуд, заполненный титруемой жидкостью опускают в первую чейку р да титровальной пластины, погружа капилл рный сосуд в имеющийс в чейке разбавитель, и сообщают капилл рно-. му сосуду посредством руко тки приспособлени дл разбавлени жидкости несколько вращательных движений, что приводит к смешиванию в чейке титруемой жидкости с разбавителем. При этом получают разведение в соотноше .нии 1;2 как в той части жидкости, что находитс в чейке вне капилл рного сосуда, так и в той части жидкости , котора заполн ет полость сосуда капилл рного. Затем извлекают : капилл рный сосуд из первой чейки, при этом он захватывает своей полостью за счет капилл рности половину объема разведени из первой чейки, и погружают капилл рный сосуд в разбавитель во второй чейке р да/ вращают капилл рный сосуд, получа в этой чейке разведение 1:4. Повтор последовательно цикл перечисленных приемов, готов т серийное разведение жидкости дл микротитровани в чейках титровальных пластин. В дальнейшем дл микротитровани к приготовленным описанным способом серийшлм разведени м добавл ют необходимые компоненты, примен емые при микротитровании (например , антигены, диагностикум иthe vessel filled with the liquid being titrated is immersed in the first cell of the row of the titration plate, immersing the capillary vessel in the diluent in the cell, and reporting the capillary. By means of the vessel, by means of the handle of the device for diluting the liquid, several rotational movements, which leads to mixing of the titrated liquid in the cell with the diluent. In this case, a dilution is obtained in relation to line 1; 2, both in the part of the liquid that is in the cell outside the capillary vessel and in the part of the liquid that fills the cavity of the capillary vessel. Then the capillary vessel is removed from the first cell, while it captures half the dilution volume from the first cell with the capillary, and the capillary vessel is immersed in a diluent in the second cell / the capillary vessel is rotated to obtain a dilution 1: 4. Repeating the cycle of the listed techniques in succession, preparing a serial dilution of the microtiter fluid in the wells of the titration plates. In the future, for microtitling, the necessary components used in microtitling (for example, antigens, diagnosticum and

ДР.) М«DR.) M "

Недостатком способа вл етс то, что он позвол ет готовить серийные разведени в емкост х в виде чеек титровальных пластин и. не позвол ет готовить серийные разведени дл микротитровани , на рабочей поверхности любой формы, в том числе плоской без углублений, например на простых предметных стеклах, примен емых при микроскопии, что необходимо дл титровани методом серийных раэведений, например, в вис чей капле .The disadvantage of this method is that it allows preparing serial dilutions in containers in the form of cells of titration plates and. It does not allow to prepare serial dilutions for microtitre on a working surface of any shape, including a flat one without depressions, for example, on simple slides used in microscopy, which is necessary for titration using a serial method, for example, in a drop.

Цель изобретени - приготовление серийных разведений дл микротитровани на рабочей поверхностилюбой формы, в том числе плоской без углублений .The purpose of the invention is the preparation of serial dilutions for microtitre on the working surface of any form, including flat without recesses.

Поставленна цель достигаетс предлагаемым способом приготовлений серийных разведений дл микротитровани смешиванием в требуемых соотношени х титруемой жидкости, содержащейс в открытом капилл рном сосуде , и разбавител , подаваемого с помощью дозатора, причем отличительными особенност ми способа вл етс то, что смешивание титруемой жидкости с разбавителем осуществл ют непосредственно на капилл рном сосуде путем внесени заданной ДОЭЫ разбавител в полость капилл ра, переполн его, часть полученного разведени , переполн ющую капилл р, нанос т на рабочую поверхность титровани , и процесс повтор ют необходимое число раз.The goal is achieved by the proposed method of preparing serial dilutions for microtiter mixing in the required ratios of the titrated liquid contained in the open capillary vessel and the diluent supplied by the dispenser, and the distinguishing features of the method are that the titrated liquid is mixed with the diluent directly on a capillary vessel by depositing a predetermined DOED diluent into the cavity of the capillary, overflowing it, part of the dilution obtained, overflowing w capillary is applied onto the working surface titration, and the process is repeated as necessary.

Дл приготовлени разведений при соотношени х титруемой жидкости и разбавител 1:2, 1:4, 1:8, 1:2 (где п - целое число, не равно нулю),.используют равные дозы титруемой жидкости и разбавител .For the preparation of dilutions at a ratio of the liquid to be titrated and the diluent 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1: 2 (where n is an integer, not equal to zero), use equal doses of the titrated liquid and diluent.

Более детально операции, составл ющие описываемый способ, могут быть охарактеризованы следующим образом .In more detail, the operations constituting the described method can be characterized as follows.

Смешивают титруемую жидкость в требуемых соотношени х с разбавителем при помощи дозатора, например дозировочной пипетки дл подачи разбавител , и приспособлени дл разбавлени жидкости с капилл рным сосудом. Дозировочна пипетка дл подачи разбавител имеет заполненнь1й разбавителем выгодной канал, оканчивающийс выходным отверстием, через которое подают пипеткой разбавитель в заданном объеме (дозе). Приспособление дл разбавлени жидкости представл ет собой стержень, прикрепленйым к концу этого стержн открытым капилл рным сосудом заданного объема, т.е. сосудом, обладающим -способностью заполн тьс жидкостью за счет капилл рности и удерживать заполнившую ег.о жидкость за счет капилл рности сосуда и поверхностного нат жени жидкости. Заполнивша капилл рный сосуд жидкость в дальнейшем удерживаетс в нем за счет капилл рности и поверхностного нат жени и после отдалени капилл рного сосуда от поверхности жидкости , имеющейс , например, в пробирке . Емкость капилл рного сосуда представл ет собой микрообъем (малым объемом до 0,025 мл). Капилл рный сосуд имеет форму аналогичную известному капилл рному сосуду приспособлени дл разбавлени жидкости или представлен, например, прост открытой полусферой со щел кш, прикрепленной к стержню. Используемые варианты капилл рного сосуда представл ют собой открытый капилл рный сосуд заданного объема, оба приведенных варианта капилл рного сосуда дают одинаковый эффект, не оказыва вли ни на сущность предлагаемого способа. Дл приготовлени серийных разведений титруемой жидкости -на заполненный титруемой жидкостью капилл рный сосуд нанос т разбавитель в объеме, поданном дозировочной пипеткой. При этом разбавитель в поданном объеме, слившись с титруемой жидкостью, удерживаемой капилл рным сосудом, образует смесь этих компонентов, представл ющую собой разведение титруемой жидкостиMix the liquid to be titrated in the required ratios with a diluent using a dispenser, such as a dosing pipette for supplying a diluent, and a device for diluting the liquid with a capillary vessel. A dosage pipette for supplying a diluent has a filled diluent with a favorable channel, terminated by an outlet opening through which a diluent is fed with a pipette in a given volume (dose). The liquid dilution device is a rod, an open capillary vessel of a given volume attached to the end of this rod, i.e. a vessel that has the ability to fill with a liquid due to capillary nature and to keep the liquid filled with it due to the capillary nature of the vessel and the surface tension of the liquid. The liquid filled in the capillary vessel is further retained in it due to capillary nature and surface tension and after the capillary vessel is removed from the surface of the liquid, for example, in a test tube. The capacity of the capillary vessel is a microvolume (small volume up to 0.025 ml). A capillary vessel has the form of a device for diluting a liquid similar to the known capillary vessel or is represented, for example, by a simple open hemisphere with a slit attached to a rod. The capillary vessel variants used are an open capillary vessel of a given volume, both of the above capillary vessel variants give the same effect without affecting the essence of the proposed method. To prepare serial dilutions of the titrated liquid — a capillary vessel filled with the liquid to be titrated is applied a diluent in the volume supplied by the dosing pipette. In this case, the diluent in the dispensed volume, merging with the liquid being titrated held by the capillary vessel, forms a mixture of these components, which is a dilution of the liquid being titrated

с разбавителем, которое удерживаетс на переполненном капилл рном сосуде. Одна часть этого разведени заполн ет капилл рный сосуд, а друга часть, удерживаема поверхностным нат жением жидкости, обволакивает капилл рный сосуд снаружи и переполн ет его. При сли нии поданной дозы разбавител с титруемой жидкостью, удерживаемой в капилл рном сосуде и заполн ющей его, происходит взаимное смешивание компонентов, Получив разведение титруемой жидкости путем такого переполнени разбавлением капилл рного сосуда, избыток приготовленного разведени , т.е„ переполн ющую капилл рный сосуд часть разведени , равный объему поданной дозы разбавител , нанос т на рабочую поверхность дл титровани любой формы , в том числе плоскую без углублений , например на поверхность простого предметного стекла, освобожда при этом капилл рный сосуд от переполн ющей его расти разведени , обволакивающей капилл рный сосуд снаружи. Затем на освободившийс от избытка разведени капилл рный сосуд, заполненный той частью разведени , котора осталась в нем после освобождени . капилл рного сосуда от переполн ющей части разведени (оставша с э капилл рном сосуде часть разведени равна объему капилл рного сосуда, его ёмкости, и удерживаетс в нем за счет капилл рности сосуда и поверхностного нат жени жидкости), подают с помощью дозировочной пипетки очередную дозу разбавител , равную объему разбавител , поданного при первой (предыдущей) подаче, и нанес эту дозу разбавител на капилл рный сосуд, оп ть его переполн ют . Приготовив очередное разведение также путем, указанного переполнени капилл рного сосуда, часть этого разведени , переполн ющую капилл рный сосуд, нанос т на следующий свободный участок рабочей поверхности дл титровани , освобожда капилл рный сосуд от переполн ющей его части разведени . Затем подают на капилл рный сосуд следующую дозу разбавител , и, повтор цикл пере численных приемов в указанной последовательности , готов т серийные разве 1ени жидкости дл микротитровани на рабочей поверхности любой формы. На фиг.1 схематически представлена операци заполнени сывороткой капилл рного сосуда; :на фиг.2 - операци подачи физраствора на заполненный сывороткой капилл рный сосуд; на фиг.З - начальный момент операции нанесени разведени сыворотки на рабочую поверхность дл титровани ; на фиг.4 - завершающий момент операции нанесени разведени на рабочую поверхность.with a diluent that is held in a crowded capillary vessel. One part of this dilution fills the capillary vessel, and the other part, held by the surface tension of the fluid, envelops the capillary vessel outside and overflows it. When the supplied dose of the diluent merges with the liquid being titrated held in the capillary vessel and fills it, the components are intermixed. Obtaining the dilution of the liquid being titrated by such overflowing with the dilution of the capillary vessel, the excess diluted diluent, i.e., the capillary vessel that overflows a part of the dilution equal to the volume of the diluted dose applied is applied onto the working surface to titrate any shape, including a flat one without depressions, for example, onto the surface of a simple object stack and, thus releasing the receptacle from the capillary overflow guide it grow dilution encapsulating capillary vessel outside. Then, on a capillary vessel freed from excess dilution, filled with that part of the dilution that remained in it after release. the capillary vessel from the overflow part of the dilution (the part of the dilution left with the e-capillary vessel is equal to the volume of the capillary vessel, its capacity, and is kept there by the capillary of the vessel and the surface tension of the liquid), the next dose of diluent is supplied with a dosing pipette equal to the volume of diluent supplied at the first (previous) feed, and having applied this dose of the diluent to the capillary vessel, again it is overfilled. By preparing the next dilution also by the indicated capillary vessel overflow, a part of this dilution overflowing the capillary vessel is applied to the next free surface of the working surface for titration, freeing the capillary vessel from its overflowing part of the dilution. Then, the next dose of diluent is fed to the capillary vessel, and, repeating the cycle of the listed techniques in the specified sequence, serially prepared microtiter fluids on the working surface of any shape are prepared. Fig. 1 is a schematic representation of a filling operation with a serum of a capillary vessel; Figure 2 shows the operation of supplying saline to a capillary vessel filled with serum; FIG. 3 shows the initial moment of the operation of applying the serum to the working surface for titration; Fig. 4 shows the final moment of the operation of applying the dilution to the working surface.

Дл заполнени капилл рного сосуда 1 приспособлени дл разбавлени жидкости 2, опускают это приспособление , например, в пробирку 3 и прикасаютс стенкой капилл рного сосуда к поверхности 4 сыворотки 5, не погружа капилл рного сосуда в жидкость (прикасаютс стенкой капилл рного сосуда к мениску). При этом вследствие смачиваемости капилл рного сосуда поверхностный слой, сыворотки разрываетс , и сыворотка из пробирки устремл етс в капилл рный сосуд .и его заполн ет. После заполнени сывороткой этЬт сосуд отвод т от поверхности сыворотки. Заполнивша капилл рный сосуд сыворотка в .дальнейшем удерживаетс в этом сосуде за счет капилл рности и поверхностного нат жени жидкости.To fill the capillary vessel 1 liquid dilution device 2, lower this device, for example, into the test tube 3 and touch the capillary vessel wall to the surface 4 of serum 5 without immersing the capillary vessel into the liquid (touch the meniscus wall of the capillary vessel). In this case, due to the wettability of the capillary vessel, the surface layer, the serum is torn, and the serum from the tube rushes into the capillary vessel. And it fills. After the serum was filled with this, the vessel was retracted from the serum surface. Filling the capillary vessel, the serum is subsequently retained in this vessel due to the capillary nature and surface tension of the fluid.

На заполненный сывороткой сосуд On the vessel filled with serum

0 затем подают физраствор.0 then served with saline.

Дл подачи физраствора на заполненный сывороткой капилл рный сосуд (фиг. 2) направл ют выходное отверстие 6 выходной канал Т дозировочной пипетки 8, заполненной физ5 раствором, на капилл рный сосуд 1 приспособлени дл разбавлени жидкости 2, так как устанавливают дозировочную пипетку по отношению к приспособлению дл разбавлени жид0 кости в таком положении, чтобы выходной канал пипетки оказывалс направленным (нацеленным) своим выходным , отверстием на заполненный сывороткой капилл рный сосуд, размещен5 ный напротив выходного отверсти пипетки . При этом рассто ние 9 между концом выходного канала ципетки (концом пипетки) и капилл рным сосудом подбираетс достаточным дл того, To supply saline to a capillary vessel filled with serum (Fig. 2), the outlet 6 of the output channel T of the dosing pipette 8 filled with physical solution 5 is directed to the capillary vessel 1 of the liquid diluent device 2, since the dosing pipette is installed in relation to the device to dilute the liquid in such a position that the output channel of the pipette turns out to be directed (aimed) at its output, opening onto the capillary vessel filled with serum, placed 5 opposite the output hole Ersti pipette. At the same time, the distance 9 between the end of the outlet of the cypette (the end of the pipette) and the capillary vessel is selected sufficient for

0 чтобы при имеющейс скорости вытекани физраствора из отверсти пипетки физраствор попадал, на -капилл рный сосуд и во всей поданной дозе (т.е. в заданном объеме) оказалс нанесенным на капилл рный сосуд, переполн этот сосуд. При сли нии поданного указанным образом физраствора с сывороткой, заполн пощей капилл рный сосуд, происходит взаимное смешивание этих компонентов, и In order for the saline solution to flow out of the pipette orifice, the saline solution should fall on the кап-capillary vessel and in the entire delivered dose (i.e. in the specified volume) be applied to the capillary vessel, overflowing this vessel. When merging the saline supplied in this way with the serum, filling the capillary vessel, the intermixing of these components occurs, and

0 полученна в результатеэтого смесь представл ет собой первое разведение сыворотки физраствором в серийном разведении. Одна часть данного разведени заполн ет.капилл рный со5 суд, а друга часть, равна объему поданной дозы физраствора, переполн ет капилл рный сосуд. Эта, переполн юща капилл рный сосуд часть разведени 10 обволакивает капиллгфный сосуд- и удерживаетс снаружи этого сосуда за счет поверхностного нат жени жидкости, не прикаса сь к концу пипетки. После получени на капилл рном сосуде разведени титруемой сыворотки, переполн ющуюThe resulting mixture is the first dilution of the serum with saline in serial dilution. One part of this dilution fills the capillary co-5 court, and the other part, equal to the volume of the fed saline dose, overfills the capillary vessel. This overflow capillary vessel part of the dilution 10 envelops the capillary vessel-and is held outside this vessel due to the surface tension of the liquid, without touching the end of the pipette. After receiving, on the capillary vessel, the dilution of the titrated serum, overflowing

5 капилл рный сосуд часть разведени 10 (т.е. -ту часть разведени , котора переполн ет капилл рный сосуд и равна по объему поданной на капилл рный сосуд дозе разбавител - физраствора ) нанос т на рабочую поверхность дл титровани , т.е. на поверх ность стекл нной пластины. Дл нанесени разведени сыворотк на рабочую поверхность 11 (фиг.З) приближают переполненный разведением капилл рный сосуд 1 приспособлени дл разбавлени жидкости 2 к рабочей поверхности дл титровани , обеспечива достаточный контакт (прикосновение ) переполн ющей капилл рный сосуд части разведени 10 с рабочей по верхностью. При этом капилл рный сосуд приближают до такого предела, когда сцепление между жидкостью (переполн ющей сосуд) и рабочей поверхностью отказываетс достаточным дл . того, чтобы переполн юща капилл рный сосуд часть разведени оторвалась от остальной части разведени , заполн ющей капилл рный сосуд, при выполнении следующей (очередной) операции, а именно при отдалении капилл рного сосуда от рабочей поверхности дл титровани . При удалении капилл рного сосуда 1 приспособлени дл разбавлени жидкости 2 от рабочей поверхности 11 (фиг.4) этот сосуд освобождаетс от переполн ющей его части разведени 10, котора оторвавшись от разведени , заполн ющего капилл рный .сосуд, располагаетс в виде капли на рабочей поверхности дл титрова ни . На этом завершаетс цикл операций приготовлени первого разведеJ ни сыворотки. Дл приготовлени второго разведени на капилл рный сосуд, освободившийс от переполн ющей его части первого разведени сыворотки, но заполненный оставшейс в нем частью разведени (удерживающейс в кaпилл рном сосуде за счет капилл рности и поверхностного нат жени , и равную объему этого сосуда), подают указанным образом очередную порцию физраствора в объеме, равном объему физраствора, поданного при первой подаче, оп ть переполн капилл рный сосуд-физраствором в поданной дозе. При сли нии этой второй фазы физраствора с разведением сыворотки, имеющимс в капилл рном сосуде, получают второе разведение сыворотки. Часть этого разведени в объеме, переполн ющем капилл рный сосуд, нанос т описанным образом на следующий свобо дный участок рабочей поверхности дл титровани путем приближени капилл рного сосуда к рабочей поверхности дл титровани до требуемого предела Затем капилл рный сосуд удал ют от рабочей поверхности, освобожда этим его от избытка разведени , которое в виде капли располагаетс на рабочей поверхности. На освободившийс от переполн ющей его части второго разведени капилл рный сосуд подают дозировочной пипеткой в указанном объеме (дозе) очередную порцию физраствора , и, повтор цикл перечисленных приемов, готов т серийные разведени сыворотки дл мИкротитровани на плоской рабочей поверхности стекл нных пластин. Предлагаемый способ приготовлени серийных разведений дл микротитровани 6bug использован дл постановки реакции агглютинации, котора включила приготовление серийных разведений иммунных сывороток лабораторных животных (морских свинок) дл микротитровани на плоской рабочей поверхности , представленной поверхностью стекл нной пластины. Пример. Дл приготовлени серийных разведений с помощью предлагаемого способа смешивают титруемую жидкость, в данном конкретном случае смешивают сыворотку крови иммунных животных (в дальшейшем в тексте употребл етс термин сыворотка ) в требуемых соотношени х с разбавителем , которым служил физиологический раствор (0,85%-ный раствор хлорида натри - далее в тексте физраствор) при помощи дозировочной пипетки дл подачи физраствора и приспособлени дл разбавлени жидкости с капилл рным сосудом. При подаче пипеткой физраствор вытекал через ее выходное отверстие. Эта пипетка может быть также охарактеризована более широко как простейший дозатор разбавител , имеющий :к;1ходное отверстие дл подачи через данное отверстие разбавител в заданной дозе. Приспособление дл разбавлени жидкости было представлено стержнем с прикрепленным к его концу капилл рным сосудом, т.е. открытым сосудом , обладающим свойством заполн тьс жидкостью за счет капилл рности ХФИ соприкосновении стенки этого сод суда с поверхностью жидкости, имеюцейс , например, в пробирке. С целью приготовлени серийных разведений дл микротитровани при соотношени х сыворотки и физраствора , выраженные прогрессией 1:2, 1:4, 1:8, и т.д. физраствор подают на заполненный капилл рный сосуд при каждой подаче в объеме, равном объему этого сосуда, т.е. объему.сыворотки , котора удерживаетс в капилл рном сосуде при его заполнении за счет капилл рности и поверхностного нат жени . При первой подаче физраствора получают первое разведение сыворотки в пропорции 1:2, при второй подаче физраствора первое разведение разбавл ют вдвое, получа разведение сыворотки в пропорции 1:4. При последующей подаче физраствора получают разведени - 1:8, 1:6 и т.д.5, a capillary vessel, a part of the dilution 10 (i.e., that part of the dilution that overflows the capillary vessel and is equal in volume to the dosage of the saline diluent supplied to the capillary vessel) is applied to the working surface for titration, i.e. on the surface of the glass plate. In order to apply the serum to the working surface 11 (Fig. 3), a capillary vessel 1 of the diluent liquid 2 to the working surface for titration is approached, providing sufficient contact (touch) to the capillary vessel that overflows the working surface 10. At the same time, the capillary vessel is brought to such a limit that the adhesion between the liquid (overflowing the vessel) and the working surface is rejected sufficiently for. the overflow capillary vessel part of the dilution is detached from the rest of the dilution filling the capillary vessel during the next (regular) operation, namely when the capillary vessel is removed from the working surface for titration. When the capillary vessel 1 of the liquid 2 dilution device 2 is removed from the working surface 11 (Fig. 4), this vessel is released from the overflowing part of the dilution 10, which, detached from the diluting filling capillary vessel, is placed in the form of a drop on the working surface for titer nor. This completes the cycle of preparation of the first dilution of serum. To prepare a second dilution, a capillary vessel, freed from the overflowing part of the first dilution of the serum, but filled with the remaining part of the dilution (held in the capillary vessel due to capillary nature and surface tension, and equal to the volume of this vessel), is supplied as indicated Thus, the next portion of saline in a volume equal to the volume of saline, filed at the first feed, again the full capillary vessel-saline in the delivered dose. When this second phase saline coalesces with the serum dilution present in the capillary vessel, a second serum dilution is obtained. A portion of this dilution in the volume that fills the capillary vessel is applied in the manner described above to the next free area of the working surface for titration by bringing the capillary vessel to the working surface to titrate to the required limit. Then the capillary vessel is removed from the working surface, freeing it from excess dilution which is in the form of a drop located on the working surface. A capillary vessel released from the overflowing part of the second dilution is supplied with a dosing pipette in the indicated volume (dose) another portion of saline solution, and, repeating the cycle of the above methods, prepare serial dilutions of serum for microtitling on a flat working surface of glass plates. The proposed method of preparing serial dilutions for 6bug microtiter was used to formulate an agglutination reaction, which included the preparation of serial dilutions of immune sera of laboratory animals (guinea pigs) for microtiter on a flat working surface represented by the surface of a glass plate. Example. For the preparation of serial dilutions using the proposed method, the liquid being titrated is mixed, in this particular case the serum of immune animals is mixed (the term serum is used in the text) in the required ratios with a diluent, which was served with a physiological solution (0.85% solution sodium chloride - hereinafter referred to as saline) using a dosing pipette for feeding saline and a device for diluting the liquid with a capillary vessel. When pipetting, saline flowed through its outlet. This pipette can also be described more broadly as the simplest diluent dispenser, having: a; 1 inlet for feeding a diluent through the aperture at a given dose. The device for diluting the liquid was represented by a rod with a capillary vessel attached to its end, i.e. an open vessel that has the property of being filled with a liquid due to the capillary nature of the HFI, the contact of the wall of this vessel with the surface of the liquid, for example, in a test tube. For the purpose of preparing serial dilutions for microtitration at ratios of serum and saline, expressed as 1: 2, 1: 4, 1: 8 progression, etc. saline is fed to the filled capillary vessel at each flow in a volume equal to the volume of this vessel, i.e. the volume of serum that is retained in the capillary vessel when it is filled due to capillarity and surface tension. At the first feed of saline, the first dilution of serum is obtained in a ratio of 1: 2; at the second feed of saline, the first dilution is diluted twice, obtaining a dilution of serum in a ratio of 1: 4. At the subsequent supply of saline get a dilution of 1: 8, 1: 6, etc.

К приготовленным указанным образом серийным разведени м сыворотки добавл ют при постановке реакции агглютинации антиген из риккетсйй Провачека (использовалс коммерческий препарат Львовского предпри ти по производству бакпрепаратов) В параллельной серии опытов став т реакцию агглютинации с этими же сыворотками и антигеном при приготовлении серийных разведений с помощью известного способа. Результаты реакции учитывают по высоте разведений сыворотки, т.е. по высоте титров, дающих агглютинацию.Всего в параллельных опытах было исследовано 16 сывороток.Serum dilutions prepared in this way are added to the antigen from the Provachek rickettsia when setting the agglutination reaction (Provachek rickettsii commercial preparation was used). In a parallel series of experiments, an agglutination reaction with the same sera and antigen was used in the preparation of serial dilutions using the known way. The results of the reaction take into account the height of serum dilutions, i.e. according to the height of the titers giving agglutination. Altogether in parallel experiments 16 sera were examined.

В таблице приведены результаты исследовани сывороток в реакции агглютинации .The table shows the results of the study of sera in the agglutination reaction.

Представленные в таблице данные показывают, что результаты исследовани сывороток в реакции агглютинации при приготовлении серийных разведений с помощью предлагаемого способа и микротитратора системы Такачи практически однозначны. Отмеченные колебани в пределах одного разведени представл ют собой обыч-v ное вление, неизменно наблюдаемое при сопоставительном анализе-резульo татов разного рода серологических реакций, в том числе и реакции агглютинации .The data presented in the table show that the results of the analysis of the sera in the agglutination reaction in the preparation of serial dilutions using the proposed method and the Takachi microtitrator are almost unambiguous. The observed fluctuations within a single dilution are a usual-v phenomenon, which is invariably observed in a comparative analysis of the results of various serological reactions, including agglutination reactions.

Технико-экономическа эффективность изобретени заключаетс в том, The technical and economic efficiency of the invention is

5 что предлагаемый способ позвол ет готовить серийные разведени дл микротитровани на плоской поверхности . Предлагаемый способ может быть также использован дл приготов0 лени серийных разведений на рабочей поверхности дл титровани и любой .другой формы, например, на поверхности , имеющей углублени разного профил и т.п.5 that the proposed method allows serial dilutions to be prepared for microtitre on a flat surface. The proposed method can also be used to prepare serial dilutions on the working surface for titration and in any other form, for example, on a surface having recesses of a different profile, and the like.

Claims

1. A method of preparing serial dilutions for microtitling by mixing, at the required ratios, the titrated liquid contained in the open capillary vessel and the diluent supplied by means of a dispenser,

35 by the fact that, in order to prepare the serial dilutions on the working surface of any shape, including flat, without depressions, mixing is carried out directly on the capillary vessel by introducing a predetermined dose of diluent into the capillary cavity, overfilling it, part of the dilution obtained, the overflow capillary is applied onto the titration working surface and the process is repeated 45 times, the required number of times.

2. The method according to claim 1, which is so that, with the aim of preparing dilutions for the ratio of the liquid being titrated and the diluent, 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1: 2 (n is an integer non-zero), use equal doses of the liquid being titrated and the diluent.

Sources of information taken into account in the examination 1. Instructions for the apparatus Microtitrator system Takachi. Firm Labor. . Budapest, 1972.

I "" jr- "r.y

tf tf - / tf 7