SU943577A1

SU943577A1 - Способ определени активности ферментов в сыворотке крови

Info

Publication number: SU943577A1
Application number: SU802984654A
Authority: SU
Inventors: Валерия Ивановна Крупенина
Original assignee: Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт
Priority date: 1980-09-22
Filing date: 1980-09-22
Publication date: 1982-07-15

Description

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ В СЫЮРОТКЕ КРОВИ

Claims

Изобретение относитс к медидане, а имен но к ферментной ди гностике заболеваний. Известен способ определени активности ферментов в сыворотке крови путем разведени пробы, инкубировани ее с ферментным субстратом, внесени индикатора с последующим (|ютометрическим измерением полученного окрашенного комплекса t. Однако известный способ не обеспечивает высокой точности. Цель изобретени - повышеине точности способа. Цель достигаетс тем, что при осуществлении способа определени активности ферменто в сыворотке крови путем разведени пробы, инкубировани ее с ферментным субстратом, внесени индикатора с последующим фотометрическим измерением полученного окрашенного комплекса отличительной особенностью вл етс то, что пробу развод т 2-5 М растворо хлористого натри или 0,2-0,5%-ным растворо желатины. Пример 1. Получив очень высокие экстинкшш при определении активности трансаминаз в сыворотке крови, повтор ют определение с разбавленной в несколько раз сывороткой . Сыворотку развод т в 10 раз 0,2%- .ным раствором желатина и дальнейшую рабЬ« ту провод т так же как и при полной пробе по методу Reitman S. и Frankel S. В пробирке: контрольную , со стандартным раствором, и опытную напивают по 0,5 мл субстратного раствора, содержащего дл ,определени аланин-аминотрансферазы 1 мкМ а-кетоглутаровой кнслоты и 50 мкМ L-аланина , дл определени аспартат-аминотрансферазы1 мкМ а-катоглутаровой кислоты и 50 мкМ L-аспарагиновой кнслоты (рН 7,4) и нагревают 15 мин при 37С. После прогревани в контрольную пробу приливают 0,1 мл дистиллированной воды, в пробирку со стандартом 0,1 мл раствора стандарта (0,20 мкМ пирувата натри при определении аланин-аминотрансферазы или 0,20 мкМ шавелево : уксусной кислоты при определении аспартат-амипотрансферазы ), в опытные пробирки добавл ют по О,Г мл разведенной 1:10 исслсдуемой сыворотки. Пробы инкубируют при 60 мин. После инкубации во все пробы прибавл ют по 0,5 мл раствора динитрофенилгидра: ина (19,8 мг 2,4-динитрофенилп1Дразина в 100 мл 1 н, HCt), выдерживают 15 мин, при комнатной температуре и добавл ют 5,0 0,4 н. раствора NaOH. Через 20 мин колориметрируют против контрол в 1,0 см кюветах при сине-зеленом светофильтре (). При расчете активности трансаминаз по- , лученную активность умножают на степень разведени сыворотки и получают линейную зависимость активности фермента от разведени Пример
2. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повтор ют определение с разбавленной сывороткой . Сыворотку развод т в 10-20 раз 0,4%-ным раствором желатина. Определение активности и ее расчет провод т, как описано в примере 1. Пример
3. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повтор ют определение с разбавленной сывороткой . Сыворотку развод т в 10-20 раз 0 %-ным раствором желатина. Определение . активности и ее расчет провод т, как описан в примере 1. Пример
4. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови по втор ют определение с разбавленной сывороткой . Сьторотку развод т в 10-20 раз 2М раствором хлористого натри . Определение активности и ее расчет провод т, как описано в примере 1. Пример
5. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повтор ют определение с разбавленной сывороткой . Сыворотку развод т в 10-20 раз 4М 4 pacTfeopOM хлористого натри . Определение активности и ее расчет провод т, как описано в примере 1. . Пример
6. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови Повтор ют определение с -разбавленной сывороткой . Сыворотку развод т в 10-20 раз 5М раствором хлористого натри . Определение активности и ее расчет провод т, как описано примере 1. Предлагаемый способ позвол ет исключить йёпропорциональное возрастание удельной активности ферментов при разведении сыворотки ., т. а. делает возможным определить истинную активность ферментов, когда необходимо разведение сыворотки из-за высокой активности ферментов, наблюдающейс при многих патологических процессах и превышаю.щей нормальные значени в 10-50 и более раз. Способ не требует дополнительных количеств крови изменений условий постановки опытов и дополнительных материальных затрат. Формула изобретени Способ определени активности ферментов в сыворотке крови путем разведени пробы, инкубировани ее с ферментным субстратом, внесени индикатора с последующим фотометрическим измерением полученного окрашенного комплекса, отличающ,ийс тем, что, с целью повышени точности способа, пробу развод т 2-5 М раствором хлористого натри или 0,2-0,5%-ным раствором желатины. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Асатиани. В. С. Ферментные методы анаиза . М., Медицина, 1969, с. 574-608.