SU930122A1

SU930122A1 - Способ определени активности малатдегидрогеназы в биологических ткан х

Info

Publication number: SU930122A1
Application number: SU792873074A
Authority: SU
Inventors: Виктория Алексеевна Пахомова; Галина Николаевна Крюкова; Наталия Петровна Козлянина
Original assignee: Одесский научно-исследовательский институт стоматологии
Priority date: 1979-12-20
Filing date: 1979-12-20
Publication date: 1982-05-23

Description

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ТКАНЯХ

Изобретение относитс к медицине, а именно к способам изучени энергетического обмена в ткан х животных и человека.

Известен способ определени малатдегидрогенаэы в биологических ткан х, включеиощий инкубацию гомогената исследуемой ткани в буферном растворе с субстратом, внесение в инкубационную смесь кофермента и спектрофотометрию полученной смеси l.

Однако известный способ имеет недостаточную чувствительность и неспецифичен , вследствие того, что запуск реакции -коферментом приводит к активации многих других НАДФ-зависшлых дегидрогеназ .

Цель изобретени - повышение чувствительности и специфичности спосо ба.

Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу определени малатдегидрогеназы в биологических ткан х , включающего инкубацию гомогената исследуемой ткани в буферном растворе с субстратом, внесение в инкубационную смесь кофермента и спектрофотометрию полученной смеси, кофермент внос т непосредственно в раствор гомогената, выдерживают в тече.1|ие

5-60 мин в физиологическом режиме, далее добавл ют субстрат.

Способ осуществл етс следующим образом.

После забора ткани хран т и гомогенизируют на холоду в 0,05м трисбуфере в соотношении 1:20. Инкубационна смесь состоит, мл: 0,05М трис-буфер ,4 2,5; МпСЁ 0,03м-0,1;

10 НАДФ 0,1 (3 мг в мл), гомогенат 0,2.

Общий объем 3 МП. Предварительную инкубацию проб -с (после встр хивани ) провод т в течение 5-60 мин при 37°С. Реакцию запускают добавление 0,ЗЗМ субстрата 0,25 натри блочнокислого. Активность определ ют по разности экстинкции на первой-тридцатой-шести20 дес той минуте и выражают в наномол х на 1 г ткани за 1 ч.

П.р и м е р 1. Печень гомогенизируют на холоду в 0,05М трис-буфере

25 в соотношении 1:20. Затем провод т преинкубацию при 37 С в течение 5 мин в инкубационной смеси следующего состава, мл: 0,05М трис-буфер рн 7,4-2,5; 0,ОЗМ ,; НАДФН (3 мг

30 в мл) 0,1; гомогенат 0,2. ./

Общий объем пробы - 3 мп.

Реакцию запускают добавлением 0,33 мл субстрата натри блочного 0,25 мл. Активность определ ют по разности экстинкций на 0-30-60 мин и выражают в наномол х на 1 г ткани за 1 ч. Подсчет активности фермента .проводилс по следующей фор:Муле: Д --;j , - разность

экстенкций, 3 - объем кюветы, к коэффициент мол рной экстинции НАДФН п г разведение ткани.

Пример 2. ДеснзчИ слюнные железы (околоушна и прлчелюстна ) гомогенизируют на холоДу в 0,05М трис-буфере в соотнсжаении 1:20. Затем провод т преинкубацию при 37°С в течение 30 мин в инкубационной смеси. Состав смеси и остальное ансшогично прицеру 1. Активность малой дегидрогеназы в этих ткан х 50 и 25-45 нмоль/г/ч.

Пример 3, Выделенные гшьвеол рный отросток и ребро гомогенизируют на холоду в 0,05м трисбуфере в соотношении 1:20. Затем провод т преинкубацию при в течение 60 мин в инкубационной смеси . Состав смеси и остальное аналогично примеру 1. Активность малатдегидрогеназы - 5,5 и 55 нмоль/г/ч. Предлагаемый способ обладает высокой чувствительностью, и специфичностью , что позвол ет примен ть его дл определени активности малатдегидрогеназы во всех ткан х.

Формула изоб1 етени

Способ определени малатдегидро-.

геназы в биологических ткан х, включающий инкубацию гомогената исследуемой ткани в буферном растворе с субстратом, внесение в инкубационную смесь кофермента и спектрофотометрию полученной смеси, отличающийс тем, что, с целью повышени чувствительности и специфичности способа, кофермент внос т непосредственно в раствор гомогената,

выдерживают в течение 5-60 мин в физиологическом режиме, далее добавл ют субстрат.

Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе

.1. Степанова Н.Г. НАДФ-ферменты в нормальной сердечной мышце и при экспериментальном миокардите, Вопросы мед.хим., 1969. 15, с. 346-351.

Claims

Формула' изобретения

Способ определения малатдегидро-. геназы в биологических тканях, вклю* чающий инкубацию гомогената исследуемой ткани в буферном растворе с субстратом, внесение в инкубационную смесь кофермента и спектрофотометрию полученной смеси, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности способа, кофермент вносят непосредственно в раствор гомогената, выдерживают в течение 5-60 мин в физиологическом режиме, далее добавляют субстрат.