SU913255A1

SU913255A1 - Способ определения пирогенности инъекционных растворов 1 _ . ·

Info

Publication number: SU913255A1
Application number: SU802954195A
Authority: SU
Inventors: Lyudmila E Shchedrina; Leonid I Brutko; Arkadij V Karyakin
Original assignee: Vnii Farmatsii Inst Geokhimii
Priority date: 1980-07-10
Filing date: 1980-07-10
Publication date: 1982-03-15

Description

Изобретение относится к технике определения пирогенности инъекционных растворов и может быть использовано в фармацевтической промышленности.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ определения пирогенности инъекционной воды путем физико-химического анализа пробы, заключающийся в введении в исследуемую воду раствора родамина 6Ж в концентрации 4 Ю"⁴ г/ мл с последующей регистрацией спектра люминесценции, при этом по интенсивности люминесценции при длине волны (Λ) 555 нм определяют наличие пирогенных веществ в воде СП.

Однако указанный способ не может применяться для обнаружения пирогенов в некоторых инъекционных растворах^ обладающих способностью влиять на интенсивность люминесценции род2

амина 6Ж, например для 0,9%-ного раствора натрия хлорида, так как ионы хлора в такой большой концентрации обладают способностью тушить интенсивность люминесценции родамина

⁵ 6Ж.

Целью изобретения является упрощение и повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определе^,0 ния пирогенности инъекционных растворов путем физико-химического анализа пробы, анализируемую пробу подвергают ультрафильтрации, затем регист,₅ рируют спектр поглощения и по величине оптической плотности при длине волны 259 нм определяют пирогенность исследуемого раствора.

Способ осуществляют следующим _ю образом.

8 качестве источника пирогенных веществ берут липополисахариды, выделенные из Е соН о 11, Е. со1 ΐ .055.» 5а1топе11ае 0901 гр. 0, З.СурЫ, Р5.

913255

аегид'тоза (3 основных серотипа, вы-» деленные из ран ожоговых больных), и пирогенообразующие микроорганизмы Е.со,1 675» Вас.зиЬННз 720, Рз. аегид|поза 21.

Первоначально в УФ-области снимают спектры поглощения очищенных бактериальных пирогенов. Исследуемые раствора пирогенов готовят на а.пирогенной дистиллированной воде и отдельно на апирогенном 0,9%“ном растворе натрия хлорида. Раствором сравнения служат соответственно дистиллированная вода и 0,9%-ный раствор натрия хлорида.

Спектры поглощения .всех указанных бактериальных поригенов имеют один максимум поглощения в области длин волн 259 нм. Для повышения чувствительности оптическую плотность исследуемых раствооов измеряют на спектрофотометре СФ-16 в кварцевых кюветах с толщиной рабочего слоя 10 см.

Аналогичным образом изучают спектральные свойства пиоогенообразующих микроорганизмов. Исследуемые растворы готовят из выращенных на мясо-пептонном агаре 18-часовых культур микроорганизмов. Разведения проводят по 'бактериальному стандарту мутности.

Спектры поглощения растворов исследуемых микроорганизмов обладают максимумом поглощения при длине волны 260 нм, при этом наблюдается прямо пропорциональная зависимость между поглощением исследуемых суспензий и их концентрацией.

Таким образом, на примере пяти очищенных бактериальных пирогенах и трех видов пирогенообразующих культур микроорганизмов выявлено, что поглощение в УФ-области при Лщах 259-260 нм является общим свойством бактериальных пирогенов, выделенных из разных культур микроорганизмов.

Минимальные' пирогенные дозы для исследуемых липополисахаридов (ЛПС) составляют, г/мл: для ЛПС из Е.соП ОШ 5,0*10'⁴ , 5.ГулЫ 1 ,ΟΊΟ’⁷ , Е. соН 055-6,0-1 О'⁸ , Р5аегид1поза (3 основных серотипа, выделенные из ран, ожоговых больных) - 1,5 Ю ⁷ ; 5а,шопе11а 0901 гр, 0 9,0-10^-8 при вдеде-нии 1 мл на 1 кг массы кролика.

Чувствительность спектрофотометрического метода позволяет определять при величине оптической плотности, равной 0,1, следующие количества липополисахаридов , гр/мл:, выделенных из Е.со, ί 0 1Ц 7,0 10'⁷ , Е.со, ί 055" 9,0*10 ⁷ , 5.1урЫ 15¹ 10* , Рзаегид}поза (3 основных серотипа, выделен-.

5 ные из ран ожоговых больных) - 1,8 10"⁴ ; 5а1топе,1ае 0901 гр. 0 14'10'*, что составляет для каждого липополисахарида около 15 МИД.

При определении пирогенной актив»0 ности липополисахаридов биологическим методом отбирают кроликов по весу, которые должны быть не менее 1,5 и не более 2,5 кг. Поэтому в среднем чувствительность биологического испы15 тания (при использовании кроликов весом около 2-х кг) примерно в 2 раза больше 1 минимальной пирогенной дозы (т.е. равна 2-м МП.Д). Таким образом, для сравнения определения пи20 рогенов спектрофотометрическим способом с официальным биологическим испытанием на пирогенность на кроликах пирогены в исследуемых растворах достаточно концентрировать в 7”8 раз.

25 Однако, учитывая возможную вариабельность результатов, полученных биологическим методом, проводят концентрирование исследуемых растворов 10 раз.

При необходимости обнаружения

30 меньших количеств бактериальных пирогенов исследуемые жидкости предварительно концентрируют в соответствующее число раз.

Пример. 500 мл исследуемо₃₅ го раствора (0,9% раствора натрия хлорида) подвергают ультрафильтрации под вакуумом с использованием воронки фирмы "ЧН Проге" диаметром 45мм, мембраны РТ6С "Μ'ι 1 П роге" и колбы

₄₀ Бюмзена емкостью 500 мл. В системе поддерживают глубину вакуума 0,5кг/ см¹-, используя электрический вакуумоотсасыватель".

Концентрат (объем около 30 мл)

⁴⁵ переносят в мерную колбу 50 мл, промывают мембрану 0,9%-ным апирогенным раствором натрия хлорида 3 раза по 5 мл и объем раствора доводят этим же растворителем до метки.

Полученный раствор используют для измерения оптической плотности при длине волны (Арпах) 259 нм. Раствором сравнения служит апирогенный 0,9%ный раствор натрия хлорида, который

55 не обладает поглощением в УФ-области. Образцы исследуемых растворов, имеющие оптическую плотность больше 0,1, считают пирогенными.

5 9132

Спектрофотометрический метод обнаружения бактериальных пирогенных веществ является специфичным для дистиллированной воды и инъекционных растворов, не обладающих собственным 5 поглощением в УФ-области, так как испытание на пирогенность проводят после химического контроля исследуемых растворов, при этом наличие έ исследуемых растворах каких-либо хи- 10 мических' примесей, в том числе и примесей, обладающих поглощением в УФ-свете, недопустимо.

Предлагаемый способ определения 15 пирогенности инъекционных растворов прост и позволяет повысить точность определения пирогенности как дистиллированной воды, так и инъекционных растворов, в частности 0,9%**ный раст•5. 6

вор натрия хлорида для инъекций, по сравнению с известным.

Claims

Формула изобретения

Способ определения пирогенности инъекционных· растворов путем физикохимического анализа пробы, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности способа, анализируемую пробу подвергают ультрафильтрации, затем регистрируют спектр поглощения пробы и по величи- . не оптической плотности при длине волны 259 нм определяют пирогенность исследуемого раствора.