SU877437A1

SU877437A1 - Способ количественного определени липопротеидов в биологических жидкост х

Info

Publication number: SU877437A1
Application number: SU802882576A
Authority: SU
Inventors: Виталий Ефимович Формазюк; Геннадий Евгеньевич Добрецов; Владимир Александрович Полесский; Юрий Андреевич Владимиров
Original assignee: Второй Московский Ордена Ленина Государственный Медицинский Институт Им. Н.И.Пирогова
Priority date: 1980-02-28
Filing date: 1980-02-28
Publication date: 1981-10-30

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к способам количественного определения липопротеидов в биологических жидкостях с диагностической целью.

Известен способ, количественного определения липопротеидов в биологических жидкостях путем выделения липопротеидов с последующей обработкой их химическими реактивами [1].

Однако известный способ сложен и трудоемок, требует сложной аппаратуры и не обеспечивает надежных результатов из-за низкой чувствительности.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа и упрощение его.

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа количественного определения липопротеидов в биологических жидкостях пу^гем выделения липопротеидов с. последующей обработкой их химическими реактивами, липопротеиды последовательно обрабатывают 0,01-0,15 молярным трис· •НС) буфером, 5-15%-ным раствором хлористого натрия и 0 ,1-0.5.%· раствора ЭДТА, в полученный раствор вводят 10-100 мкм 1-анилинонафталин-8~сульфоната, проводят флуориметрирование раствора при возбуждений флоуресценции от 340 до 420 нм при длине волны испускания 460-530 нм и определяют концентрацию липопротеида по формуле _г _ А · Д ^е В ’ Р ' где С - количество липопротеида, мг/1 мм раствора;

Д - содержание фосфолипидов в конкретном классе липопротеида ;

А - интенсивность флуоресценции

1-анилинонафталин-8-сульфоната в растворе липопротеида;

В - интенсивность флуоресценции 1-анилинонафталии-8-сульфоната в 35%-ном растворе этанола;

Р - коэффициент зависимости интенсивности флуоресценции раствора 1-анилинонафталин-

8-сульфоната от концентрации фосфолипидов. ,

Пример 1. У донора В, 37' лет, через 12 ч после приема пищи берут кровь для анализа. Из полученной после осаждения клеточных элементов плазмы методом последовательного :ультрацентрифугирования вьщеляют липопротеиды высокой и низкой плотности. По предлагаемому методу определяют концентрацию липопротеидов. Для этого выделенные липопротеиды растворяют в 0,01 молярном трис. НС1, добавляют 5% хлористого натрия, 0,1% этилендиаминтетраацетата и раствор 1-анилинонафталин-8- cj/льфоната до конечной концентрации 50 мкМ. Измеряют флуоресценцию полученного раствора при 480 нм и возбуждении при 365 нм. Полученное значение интенсивности флуоресценции делят на интенсивность флуоресценции 1-анилинбнафталин-8-сульфоната в 35%-ном этаноле, умножают на процентное содержание фосфолипидов в данном классе липопротеида и делят на коэффициент Р. Время анализа 5 мин, объем плазмы для определения концентрации липопротеидов 7 мкл. Концентрация липопротеидов высокой плотности и низкой плотности у донора В. равны 225 м 2% и 250 мг% соответственно.

Приме р2. У пациента К., 48 лет, который страдал атеросклерозом коронарных артерий, что клинически проявлялось в приступах стенокардии, специфических изменениях ЭКГ, брали кровь из кубительной вены. Выделенные ^последовательным ультрацентрифугированием липопротеиды высокой и низкой плотности растворами в 0,15 молярном трис HCI, добавляют 15% хлористого натрия и 0,5% этилендиамининтетраацетата. В полученный раствор вводят 1.0 мк’М 1-анилинонафталин-8-сульФоната и проводят флуорометрирование раствора при 400 км (при возбуждении 340 нм). Концентрацию липопротеидов определяют также как В примере .1. Объем используемой плазмы 5 мкл, время анализа 5 мин. Кон.центрация липопротеидов высокой плотности и низкой плотности у пациента К,· равны 180 мг% и 350 мг % соответственно.

Пример 3. У кролика-самца породы Шиншилла весом 2,5 кг вызывали экспериментальный атеросклероз скармливанием холестерина из расчета 0,2 г/1 кг веса животного. Через 4 мес кормления кролика забивают, из крови выделяют липопротеиды высокой и низкой плотности последовательным ультрацентрифугированием. Липопротеиды растворяют в 0,01 молярном трис. НС1, добавляют 5% хлористого натрия, 0,1% этилендиаминтетраацетата и раствор 1-анилинонафталин-8“сульфоната до конечной концентрации 100 мкМ. Далее проводят флуорометрирование полученного раствора при 530 нм и возбуждении при 420 нм. Осуществляют расчет концентрации липопротеидов аналогично примеру 1. Время анализа : 5 мин, объем плазмы 6 мкл. Содержание липопротеидов низкой и высокой плотности у кролика с алиментарной гиперхолестеринемией равно 735 мг % и 123 мг % соответственно. Предлагаемый способ обладает большой чувствительностью, что повышает точность и информативность полученных результатов, при этом способ '0 прост и экономичен и не требует дефицитных и дорогих химических реактивов и сложной аппаратуры.

Claims

'Способ количественного определения липопротеидов в биологических жидкостях путем выделения липопротеи2Q дов с последующей обработкой их химическими реактивами, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа и упрощения его, липопротеиды последовательно обрабатывают 0,01-0,15 молярным 25 трис· НС 1 буфером·, 5-15%-ным раствором хлористого натрия и 0,1-0,5 % раствора ЭДТА, в полученный раствор вводят 10-100 мкм. 1-анилинонафталин8-сульфоната, проводят флуориметриро30 вание раствора при возбуждении флуо-³ресценции от 340 до 420 нм при длине волны испускания 460-530 нм и определяют концентрацию липопротеида по формуле _{Р =} А · Д В v Р. ' количество липопротеида, мг/1 мм раствора;

содержание фосфолипидов в конкретном классе липопротеида;

интенсивность флуоресценции 1-анилинонафталин-8-сульфоната в растворе липопротеида; интенсивность флуоресценции 1-анилинонафталин-8-сульфоната в 35%-ном растворе этанола;

коэффициент зависимости интенсивности флуоресценции раствора 1-анилинонафталин8-сульфоната от концентрации фосфолипидов.