SU876715A1 - Способ вы влени распределени гуанилатциклазы в ткан х - Google Patents
Способ вы влени распределени гуанилатциклазы в ткан х Download PDFInfo
- Publication number
- SU876715A1 SU876715A1 SU802879203A SU2879203A SU876715A1 SU 876715 A1 SU876715 A1 SU 876715A1 SU 802879203 A SU802879203 A SU 802879203A SU 2879203 A SU2879203 A SU 2879203A SU 876715 A1 SU876715 A1 SU 876715A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- distribution
- enzyme
- detecting
- organs
- guanylate cyclase
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ РАСПРЕдаЛЕНИЯ ГУАНИЛАТЦИКД1АЗЫ
1
изобретение относитс к медицине, а именно к цитЪхимии, и може быть использовано дл электронно-микроскопического вы влени гуанилатциклазы .
Известен способ вы влени распределени гуанилатциклазы в ткан х 1.
Однако такой способ позвол ет получить только количественный анализ определени активности фермента и не обеспечивает возможности локализации и органной специфичности гуанилатциклазы в клетке в норме и патологии.
Цель изобретени - повышение точности способа и упрощение его.
Указанна цель достигаетс тем, что при осуществлении способа вы влени распределени гуанилатциклазы в ткан х последние инкубируют при температуре 30-34С в течение 5055 мин в среде, содержащей 80 мМ трисмадеатного буфера,13-14 мМ глюкозы , 1-2 мМ теофиллина,0,1-0,5 мМ ГТФ и 4 мМ Ва (HQ)I, затем Их обезвоживают , заливают в эпоксидную смолу и провод т электронную микроскопию .
Способ осуществл ют следующим образом .
В ТКАНЯХ
Провод т фиксацию в 1%-ном глютаральдегиде на 0,05 М какодилатном буфере с 4,5%-ной глюкозой 1ч при комнатной температуре,рН фиксатора -.7,4.
Промывают в 0,05 М какодилатном буфере с глюкозой в течение 1 сут. На следукнций день производ т отбраковку материала дл оптимального инку10 бировани материала.
Инкубацию осуществл ют при + 30 + 34°С в течение 50-55 мин (оптимальна продолжительность инкубации).
Дл оптимизации вы влени фермента были испробованы 6 вариантов инкубационной смеси.
В табл. 1 представлены материалы оптимизации температурного режима и врем инкубации.
С помощью табл.2 установлено, что
20 дл определени активности гуанилат -. циклазы в различных органах необхо- , ДИМ определенн1 й вариант.
Инкубационна смесь включает,мМ: трисмалеатный буфер 80
25 глюкоза13
теофиллин1 2
MnCIa0,1-0,5
Ъа(НО)4
30 Кроме предлагаемой иккубационной смеси, примен етс инкубационна смесь, в состав которой помимо указа ных компонентов входит еще MaN -ази натри , который вл етс спёщифичесКИМ активатором гуанилатциклазы. Пос ле удалени азида натри из инкубационной смеси активность гуанилатциклазы возвращаетс к норме. Дл оптимизации вы влени фермента с помощью активатора гуанилатцикл зы азида натри были испробованы так же 6 вариантов инкубационной смеси которые приведены в табл.3. Например, дл оптимального выделени фермента в клетках тонкого кишечника, печени и поджелудочной железы млекопитак цих необходим 1V вариант инкубационной смеси, дл оптимального вы влени фермента в клет ках легких и сердца - ГГ вариант. Теофиллин -ввод т в инкубационную смесь дл ингибации фосфодиэстаразы (ФДЭ что способствует увеличению уровн цГМФ в клетке, необходимого дл активации катализа ферментативной реакции ГТФ или гуанилилмидодифо фат - специфический субстрат вы влени гуанилатциклазы. Ва(НО),- маркер вы влени фермента. После инкубации производ т быструю промывку материала в 0,08 м трисмалеатном буфере. Дриофиксацию в 1% OgO на 0,05 М какодиалатном буфере с глюкозой (,4) провод т в течение 1,01 ,5 ч при 4°С, прокывку - в 0,05 М какодилатном буфере с глюкозой (,4). Дегидратацию осуществл ют в ацетонах возрастающей крепости (30, 50, 70, 96°, 100) и заливают в смесь чпона с аралдитом. Предлагаемый способ .при исследовании кусочков тканн из некоторых органов млекопитающих (тонкого кишечника , сердца, легких, печени, поджелудочной железы) позвол ет определить строгую специфичность локализации гуанилатциклазы, а также установить ее видовую и органную специфичность, вы вление гуанилатциклазы поможет вскрыть механизмы активации фермента как в физиологических, так и в некоторых патологических состо ни х, что вл етс чрезвычайно важным моментом в расшифровке проблем молекул рной биологии. Таблица 1
Фермент не
Фермент не вы вл етс вы вл етс
Слаба
Слаба реакци реакци вы влени вы влени фермента фермента
Слаба
Слаба реакреакци ци вы влени ферменвы влени фермента та
Реакци
Оптимальна неравнореакци мерна вы влени фермента
13
80
1Г
13
80
Г1Г80
13
IV 80
13
13
80
13
VI 80
8%
80
1Г80
8%
Таблица 2
0,5 ОД
Фермент не вы вл етс
0,3
Оптимальна реакци дл клеток сердца и легких
0,50,5
Слаба реакци во всех органах
0,1
Оптимальна реакци дл клеток тонкого каучука, поджелудочной железы, печени
0,1 0,3
Слаба реакци во всех органах
Фермент не
0,1 0,5 вы вл етс
Таблица 3
0,5
Нет
0,5 0,1
Оптималь0 ,3 на реак- ци дл клетоЛ сердца и легких
ГП 80
0,5 0,5
8%
IV 80
8%
0,1 0,1
8%
0,3 0,3
80
8%
0,5 0,5
Claims (1)
- vr 80 Формула изобретени Способ вы влени распределени гуанилатциклазы в ткан х, о т л ичающ-ийс тем, что, с целью вышени точности способа и упрощени его, ткани инкубируют при темпе ратуре 30-34С в течение 50-55 мин в среде, содержащей 80 мМ трисмалеатного буфера, 13-14 мМ клюкозы, 1-2 мМ теофиллина, 0,1-0,5 мМ ГТФПродолжение табл. 3.Слаба реакци во всех органахОптимальна реакци дл клеток пищеварительной системыСлаба реакци во всех органахНет и 4 мМ Ba(NOj)i3 затем из обезвоживают , заливают в эпоксидную смолу и провод т электронную микроскопию. Источники информации прин тые во внимание при э кспертизе 1. Schultz G., Hardman J.G, et а 1 I A new enzymattc assay for guanosine 3,5-cyeIic monophosphate and its application to the ductus referens of the rat. Proc. Nat 1 . Acad, Sci. USA. 1973, T. 70, 6, c. 1721-1725.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU802879203A SU876715A1 (ru) | 1980-02-08 | 1980-02-08 | Способ вы влени распределени гуанилатциклазы в ткан х |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU802879203A SU876715A1 (ru) | 1980-02-08 | 1980-02-08 | Способ вы влени распределени гуанилатциклазы в ткан х |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU876715A1 true SU876715A1 (ru) | 1981-10-30 |
Family
ID=20876253
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU802879203A SU876715A1 (ru) | 1980-02-08 | 1980-02-08 | Способ вы влени распределени гуанилатциклазы в ткан х |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU876715A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001020023A2 (de) * | 1999-09-15 | 2001-03-22 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Verfahren zum nachweis von oxidierten formen der löslichen guanylatzyklase |
-
1980
- 1980-02-08 SU SU802879203A patent/SU876715A1/ru active
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001020023A2 (de) * | 1999-09-15 | 2001-03-22 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Verfahren zum nachweis von oxidierten formen der löslichen guanylatzyklase |
WO2001020023A3 (de) * | 1999-09-15 | 2001-11-15 | Aventis Pharma Gmbh | Verfahren zum nachweis von oxidierten formen der löslichen guanylatzyklase |
US6500631B1 (en) | 1999-09-15 | 2002-12-31 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Method for detecting oxidized forms of soluble guanylate cyclase |
US6913898B2 (en) | 1999-09-15 | 2005-07-05 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Luminescent method of detecting soluble guanylate cyclase |
US7309579B2 (en) | 1999-09-15 | 2007-12-18 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Method for screening for activators of soluble guanylate cyclase having oxidized heme iron |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Neilands | [69] Lactic dehydrogenase of heart muscle: l (+)-Lactate+ DPN↔ Pyruvate+ DPNH+ H+ | |
Markert et al. | Multiple forms of enzymes: tissue, ontogenetic, and species specific patterns | |
Minkin et al. | Carbonic anhydrase and bone remodeling: sulfonamide inhibition of bone resorption in organ culture | |
JP2001149081A (ja) | 脱アセチル化酵素の活性測定方法、並びにこれら酵素の阻害剤もしくは促進剤のスクリーニング方法 | |
Camici et al. | The complete amino acid sequence of the low molecular weight cytosolic acid phosphatase | |
Rosenthal | Investigations of canavanine biochemistry in the jack bean plant, Canavalia ensiformis (L.) DC: II. Canavanine biosynthesis in the developing plant | |
Sugiyama | Occurrence of mucopolysaccharides in the early development of the sea urchin embryo and its role in gastrulation | |
Himmelhoch et al. | The histochemical demonstration of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase activity | |
Davies | The Krebs cycle enzyme system of pea seedlings | |
JP2003500045A (ja) | 哺乳動物細胞調製物中の微生物を、atp生物発光を利用して迅速に検出して計数する方法 | |
US4271265A (en) | Method and reagent for the determination of glutamate-oxalacetate transaminase and glutamate-pyruvate transaminase | |
Coles | Carbohydrate metabolism of larval Schistosoma mansoni | |
SU876715A1 (ru) | Способ вы влени распределени гуанилатциклазы в ткан х | |
Chvapil et al. | Hydroxylation of proline in vitro | |
Roy | The sulphatase of ox liver. 6. Steroid sulphatase | |
US20050227308A1 (en) | Method for detecting oxidized forms of soluble guanylate cyclase and a method for screening for activators of soluble guanylate cyclase having oxidized heme iron | |
Browne et al. | Alkaline phosphatase activity in kidneys of glomerular and aglomerular marine teleosts | |
Irr et al. | Synthesis of ppGpp by mouse embryonic ribosomes | |
Goldenberg et al. | Preparation of peroxisomes from carp liver by zonal rotor censity gradient centrifugation | |
Michaeli et al. | A rise and fall in 1, 2-diacylglycerol content signal hexamethylene bisacetamide-induced erythropoiesis. | |
Chen et al. | Studies on the transamination reactions in the larval fat body of Drosophila melanogaster | |
Stavy et al. | Protein synthesis in vitro with fractions of sea urchin eggs and embryos | |
Moore et al. | Isolation and properties of a germinative and a non-germinative cell population from postembryonic mouse, rabbit, and human epidermis | |
Sair et al. | Metabolism and histochemistry of skeletal muscle from stress‐susceptible pigs | |
Bäckström | Reduction of blue tetrazolium in developing sea urchin eggs after addition of various substrates and phosphopyridine nucleotides |