SU827544A1

SU827544A1 - Method of aspargine determination

Info

Publication number: SU827544A1
Application number: SU792785109A
Authority: SU
Inventors: Ирина Николаевна Скворцова
Original assignee: Московский Ордена Ленина И Ордена Трудовогокрасного Знамени Государственный Университетим.M.B.Ломоносова
Priority date: 1979-06-28
Filing date: 1979-06-28
Publication date: 1981-05-07

Description

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу определения аминокислот, и в частности аспарагина, в различных исследуемых объектах, например в почвах, в растительных 5 тканях, в культуральной жидкости при производстве аспарагина, в сточных водах при его производстве и т. д.The invention relates to the microbiological industry, and in particular to a method for the determination of amino acids, and in particular asparagine, in various studied objects, for example, in soils, in plant 5 tissues, in culture fluid in the production of asparagine, in wastewater in its production, etc.

Известны многочисленные методы опре- 10 деления аминокислот, в частности аспарагина. Наиболее широко применяется хроматографический метод определения аминокислот [1].Numerous methods for the determination of amino acids, in particular asparagine, are known. The most widely used chromatographic method for determining amino acids [1].

Этот метод достаточно точен, но трудо- 15 емок, требует больших затрат времени, реактивов и высокого профессионального уровня. Кроме того, в один прием невозможно проанализировать большое количество образцов. Невозможно также опре- 20 делить аспарагин непосредственно в исследуемом материале без нарушения целостности вещества.This method is quite accurate, but laborious, requires a lot of time, reagents and a high professional level. In addition, in one step it is impossible to analyze a large number of samples. It is also impossible to determine asparagine directly in the test material without violating the integrity of the substance.

Известен микробиологический способ определения аминокислот, который преду- 25 сматривает введение исследуемого образца в суспензию чувствительной культуры микроорганизма, не растущей в отсутствии аминокислот, инкубирование с последующим определением по наличию зоны роста 30 вокруг исследуемого материала аминокислот и их концентрации в материале [2].A microbiological method for determining amino acids is known, which provides for the introduction of a test sample into a suspension of a sensitive culture of a microorganism that does not grow in the absence of amino acids, incubation, followed by determination by the presence of a growth zone 30 around the studied material of amino acids and their concentration in the material [2].

Однако такой метод требует получения мутантов и постоянной селекции штаммов для поддержания потребности в определенной аминокислоте, а также более длительной инкубации, например в случае применения микромицета или медленнорастущих бактерий в качестве тест-объектов.However, this method requires obtaining mutants and constant selection of strains to maintain the need for a specific amino acid, as well as longer incubation, for example, in the case of micromycetes or slow-growing bacteria as test objects.

Целью изобретения является упрощение способа и возможность определения аспарагина в природных нестериллизованных материалах.The aim of the invention is to simplify the method and the possibility of determining asparagine in natural unsterilized materials.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве тест-культуры используют микроорганизмы вида Pseudomonas lemonnieri, а определение аспарагина проводят по диаметру образующегося синего цвета пигментного кольца вокруг исследуемого образца.This goal is achieved in that microorganisms of the species Pseudomonas lemonnieri are used as a test culture, and asparagine is determined by the diameter of the blue color of the pigment ring formed around the test sample.

Присутствие аспарагина в среде индуцирует пигментообразование таким образом, что имеется прямопропорциональная зависимость пигментообразования от количества аспарагина в образце в пределах концентраций аспарагина 0,05—0,005 г/г.The presence of asparagine in the medium induces pigmentation in such a way that there is a direct proportional dependence of pigmentation on the amount of asparagine in the sample within the range of asparagine concentrations of 0.05-0.005 g / g.

Способ определения аспарагина состоит в следующем. Если исследуемый материал твердый, его измельчают, слегка увлажняют и определенное количество его помеща827544 ют в суспензию культуры Pseudomonas lemonnieri. Через сутки на определенном расстоянии от исследуемого материала образуется синего цвета пигментное кольцо за счет диффузии аспарагина в агаризованную среду, и оно тем больше, чем больше аспарагина содержится в навеске испытуемого материала (см. чертеж).The method for determining asparagine is as follows. If the test material is solid, it is crushed, slightly moistened, and a certain amount of it is placed 827544 in a suspension of Pseudomonas lemonnieri culture. A day later, at a certain distance from the test material, a blue pigment ring is formed due to the diffusion of asparagine into the agar medium, and it is the greater, the more asparagine is contained in a sample of the test material (see drawing).

Пример 1. Для обнаружения аспарагина в почвах или других материалах (почве, лесной подстилке, компостах, растительных тканях) навеску материала в 1 г при содержании аспарагина не менее 0,005 г/г образца помещают в суспензию односуточной культуры Pseudomonas lemonnieri на глюкозо-минеральной агаризованной среде: агар 2%, К.2НРО4 0,05%, глюкоза—вода водопроводная. После введения навески чашки Петри выдерживают в течение 3 ч при 10—12°С для предотвращения роста тест-культуры до начала диффузии аспарагина из навески в агаризованную среду. Спустя указанное время производят инкубирование посева при 25°С. Через 24 ч образуется пигментный круг, диаметр которого находится в соответствии с количеством аспарагина в среде.Example 1. To detect asparagine in soils or other materials (soil, forest litter, composts, plant tissues), a 1 g sample of material with an asparagine content of at least 0.005 g / g of sample is placed in a suspension of a one-day culture of Pseudomonas lemonnieri on a glucose-mineral agar medium : agar 2%, K.2NRO4 0.05%, glucose — tap water. After the introduction of the sample, the Petri dishes are kept for 3 hours at 10–12 ° С to prevent the growth of the test culture before diffusion of asparagine from the sample into the agar medium begins. After the specified time, incubation of inoculation is performed at 25 ° C. After 24 hours, a pigment circle forms, the diameter of which is in accordance with the amount of asparagine in the medium.

Пример 2. Для обнаружения аспарагина в растворе, например в культуральной жидкости, при получении аспарагина каплей раствора (0,05% К2НРО4) увлажняют фильтровальный диск диаметром 1 см и вводят в суспензии односуточной культуры Pseudomonas lemonnieri и далее поступают так же, как в примере 1.Example 2. To detect asparagine in a solution, for example, in a culture fluid, upon receipt of asparagine, a drop of a solution (0.05% K2HPO4) is moistened with a filter disk 1 cm in diameter and introduced into a suspension of a one-day culture Pseudomonas lemonnieri and then proceed as in example 1 .

Предлагаемый способ позволяет определять аспарагин в различных нестерилизованных материалах, таких, как почва, лес ная подстилка, компосты, растительные ткани, культуральная жидкость при производстве аспарагина, сточные воды от производства последнего. При этом способ мо5 жет быть использован при определении аспарагина в различных природных нестерилизованных ' объектах с целью не только качественного, но и количественного определения и позволяет наблюдать накопле0 ние и разложение аспарагина в любом из указанных природных материалов.The proposed method allows one to determine asparagine in various unsterilized materials, such as soil, forest litter, composts, plant tissues, culture fluid in the production of asparagine, and waste water from the production of the latter. Moreover, the method can be used in the determination of asparagine in various natural unsterilized objects for the purpose of not only qualitative, but also quantitative determination and allows one to observe the accumulation and decomposition of asparagine in any of these natural materials.

Кроме того, предложенный способ может быть использован в микробиологической промышленности для контроля за содержа5 нием аспарагина в культуральной жидкости, а также для контроля за содержанием аспарагина в отходах производства.In addition, the proposed method can be used in the microbiological industry to control the content of asparagine in the culture fluid, as well as to control the content of asparagine in production waste.

Claims

Claim

A method for determining asparagine in a test sample by introducing it into a suspension of a test culture and subsequent incubation, characterized in that, 5 in order to simplify the method, microorganisms of the species Pseudomonas lemonnieri are used as a test culture, and asparagine is determined by the diameter of the blue pigment ring around the test sample.