SU824053A1

SU824053A1 - Method of measuring fibrin blob lysis rate

Info

Publication number: SU824053A1
Application number: SU792798602A
Authority: SU
Inventors: Владимир Петрович Торчилин; Елена Владимировна Ильина; Елена Георгиевна Тищенко
Original assignee: Всесоюзный Кардиологический Научныйцентр Академии Медицинских Наук Cccp
Priority date: 1979-07-22
Filing date: 1979-07-22
Publication date: 1981-04-23

Description

Химотрипсий раствор ют в 0,1 и. фосфатном буфере рВ 7,4.Chymotrypsy is dissolved in 0.1 and. phosphate buffer pB 7.4.

Концентраци 0,25 мг/м . Начальную оптичеЬкую плотность замер ют на спектрофотометре при длине волны 280 нм.Concentration 0.25 mg / m. The initial optical density is measured on a spectrophotometer at a wavelength of 280 nm.

Получение фибринового сгустка. Перед внесением растворов фибриногена и тромбина в трубку, нижний срез которой зат нут сеткой, последнюю с внешней стороны зат гивают пленкойGetting fibrin clot. Before introducing the solutions of fibrinogen and thrombin into the tube, the lower section of which is closed with a mesh, the latter is pulled from the outside with a film

О,5 МП раствора фибриногена и 0,1 мл раствора тромбина внос т последовательно на сетку при помощи дозирук цнх микропипеток, быстро перемешивают тонкой стекл нной пилочкой и полученную массу вьвдерживают при комнатной температуре в течение 1ч. Затем с сетки удал ют пленку и трубк с образовавшимс сгустком помещают в стаканчик с 20 мг раствора фермента на глубину 2-5 мм. Раствор фермеита перемешивают при помс ци магнитной мешалки со скоростью 150 об/мин. За скоростью лизиса фибринового сгустка след т по изменению (увеличению) оптической плотности при длине волны 280 нм во времени.About 5 MP of a solution of fibrinogen and 0.1 ml of a solution of thrombin are applied successively to the mesh using dosiruk tsnch micropipettes, quickly mixed with a thin glass file and the resulting mass is held at room temperature for 1 hour. Then, a film and a tube with a clot formed are removed from the grid and placed in a glass with 20 mg of the enzyme solution to a depth of 2-5 mm. The feriteite solution is stirred at 150 rpm with a magnetic stirrer. The rate of lysis of the fibrin clot is followed by a change (increase) in optical density at a wavelength of 280 nm with time.

При проведении эксперимента берут два параллельных образца с тромбами и одну контрольную пробу.During the experiment, take two parallel samples with blood clots and one control sample.

Контрольна проба - изменение оптической плотности раствора фермента без фибринового сгустка, так как у раствора фермента в результате автолиза со временем происходит изменение оптической плотности.The control sample is the change in the optical density of an enzyme solution without a fibrin clot, since the enzyme solution changes its optical density with time as a result of autolysis.

При проведении эксперимента заполн ют таблицу, стро т график приращени оптической плотности от времени и определ ют tg ot,In the experiment, the table is filled in, the graph of the optical density increment versus time is plotted, and tg ot is determined.

В таблице приведены изменени оптической плотности в зависимости от времени.The table shows the changes in optical density versus time.

За .100% принимают оптическую плотйость при полном растворениисгустка Фиксируемое при этом врем , это врем полного растворени сгустка и оно служит величиной сравнени между образцами.The optical density is taken as .100% at complete dissolution of the clot. The time fixed at this time, this time of the complete dissolution of the clot, and it serves as the value of the comparison between the samples.

По данньол таблицы стро т график приведенный на чертеже.According to the table, the graph is shown in the drawing.

По оси абсцисс отложено врем мин, at по оси ординат-приращение птической плотности в % при длине олны 280 нм. tg ciL определ ют построением графика и уточн ют методом наименьших квадратов. Примеру1 соответствует пр ма 1 на чертеже, tg угла наклона пр мой равен 0,60..The abscissa axis is the time min, at the ordinate axis is the increment of the avian density in% at a length of 280 nm. tg ciL is determined by plotting and refined using the least squares method. Example 1 corresponds to straight line 1 in the drawing, the straight angle of inclination tg is 0.60.

Пример 2. Этот пример прр§од х в тех же услови х, что и приfcp 1, однако концентраци фибриногена Ё сгустке 7 мг/мл. Концентрации химотрипсина та же, что и в примере 1 и составл ет 0,25 мг/мл. Примеру соответствует лини 2 на чертеже, где tg угла наклона равен 0,74.Example 2. This example of the product is under the same conditions as for fcp 1, however, the fibrinogen concentration in the clot is 7 mg / ml. The concentrations of chymotrypsin are the same as in Example 1 and are 0.25 mg / ml. The example corresponds to line 2 in the drawing, where tg of the angle of inclination is 0.74.

Пример 3. Услови те же, что и в примере 1. Концентраци фибриногена в сгустке 7 мг/мл. Концентраци химотрипсина 0,125 мг/мл. Примеру соответствует пр ма 3 с tg угла наклона 0,44.Example 3. The conditions are the same as in Example 1. The concentration of fibrinogen in the clot is 7 mg / ml. Chymotrypsin concentration 0.125 mg / ml. The example corresponds to straight line 3 with a tg angle of inclination of 0.44.

Пример 4. Услови и концентраци реагентов те же, что и в приглере 1. Опыт провод т через мес ц послё проведени примера 1. Примеру также соответствует пр ма 1с tg угла наклона 0,61. ., Из приведенного графика видно, iTo- tg угла наклона пр мой характеризует скорость растворени фибринового сгустка, причем с увеличением скорости увеличиваетс tg угла наклона.Example 4. The conditions and concentration of the reagents are the same as in the primer 1. The test is carried out one month after the carrying out of example 1. The example also corresponds to a straight angle of 1c tg of inclination of 0.61. ., From the above graph, it can be seen that iTo-tg of the angle of inclination of the straight line characterizes the rate of dissolution of the fibrin clot, and with an increase in the rate of increase of tg of the angle of inclination.

С увеличением концентрации фибриногена плотность фибринового сгуста возрастает, скорость растворени уменьшаетс , а следовательно, уменьшаетс tg угла наклона пр мой.As the concentration of fibrinogen increases, the density of the fibrin concentration increases, the dissolution rate decreases, and consequently, the tg angle of the straight line decreases.

С увеличением концентрации фермента ,лизирующего сгусток,скорость лизиса увеличиваетс .With increasing concentration of the clot lysing enzyme, the rate of lysis increases.

Предлагаемый способ быстро и с большой точностью позвол ет определить скорость лизиса фибринового сгустка, а в известном способе дл получени результата необходимо 10-20 опытов.The proposed method quickly and with high accuracy allows to determine the rate of lysis of the fibrin clot, and in the known method, 10-20 experiments are necessary to obtain the result.

0,481 0,487 0,487 0,4880.481 0.487 0.487 0.488

О 5About 5

12 2412 24

Способ определени скорости лизиса фибринового сгустка путем инкубации его с раствором фибринолитического фермента с последующим измерением оптической плотности инкубационной среды, отличающийс тем, Что, с целью повышени точности способа, фибриновый сгусток перед инкубацией помещают на прониПродолжение таблицыThe method of determining the rate of lysis of a fibrin clot by incubating it with a solution of a fibrinolytic enzyme, followed by measuring the optical density of the incubation medium, characterized in that, in order to improve the accuracy of the method, the fibrin clot is placed on the perforation.

располагают на поверхности раствора фермента и процесс инкубации ведут при посто нном равномерном перемешив ании раствора.The enzyme is placed on the surface of the solution and the incubation process is carried out with constant uniform mixing of the solution.

Источники информации,Information sources,

прин тые во внимание при экспертизе If Caffney P.S. and Whitaher A.lftaken into account when examining If Caffney P.S. and Whitaher A.lf

Thrombosis Res, 1979, vol.14,Thrombosis Res, 1979, vol.14,

p. 85-94.p. 85-94.

kk

тt

Claims

Claim

A method for determining the velocity of lysis of the fibrin clot by incubating it with a solution of a fibrinolytic enzyme and then measuring the absorbance of the incubation medium, characterized i in that, in order to increase the accuracy of the method, the fibrin clot before incubation placed on the Prony ^g-permeable for the protein substrate is then placed on the surface the dc enzyme solution and the incubation process are carried out with constant uniform mixing of the solution. ''