SU821484A1 - Method of making chamber for cell culturing - Google Patents
Method of making chamber for cell culturing Download PDFInfo
- Publication number
- SU821484A1 SU821484A1 SU782599541A SU2599541A SU821484A1 SU 821484 A1 SU821484 A1 SU 821484A1 SU 782599541 A SU782599541 A SU 782599541A SU 2599541 A SU2599541 A SU 2599541A SU 821484 A1 SU821484 A1 SU 821484A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- cells
- plate
- chamber
- chambers
- making chamber
- Prior art date
Links
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
tt
Изобретение относитс к микробиологическим и гематологическим видам исследованийг св занных с выращиванием клеток in vitro и in. vivo и может быть исследовано в микробиологических , гематологических, им syнологических и других исследовани х при создании камер дл закономерностей роста и развити клеток (микро ,организмов, тканевых клеток) и определени вли ни на них различных факторов.The invention relates to microbiological and hematological types of research related to the cultivation of cells in vitro and in. vivo and can be studied in microbiological, hematological, synologic and other studies in creating chambers for the patterns of growth and development of cells (micro, organisms, tissue cells) and determining the influence of various factors on them.
Наиболее близким к изобретению по технической сущности вл етс способ изготовлени камеры дл культивировани клеток, заключающийс в том, что формируют стенки и днище с образованием полости дл взвеси клеток, закрывают крышкой и герметизируют.The closest to the invention according to the technical essence is the method of making a cell culture chamber, which consists in forming walls and a bottom with formation of a cavity for cell suspension, is covered with a lid and sealed.
Стенки камеры по известному способу изготавливают из пластмассовых колец, а крышку изготавливают из ниллипоровых фильтров путем наиесени на фильтр насечек, стерилизации и вырезани затем кружков. Полученные кружки тщательно приклеивают к кольцам клееМг полученным путеп растворени фильтров в ацетоне- так, чтобы матова сторона их была обращена к клеткам (она считаетс менее токсичной ). Затем камеры в разобранном виде помещают в чашки Петри и стерилизуют под лучами бактерицидной лампы . Б последующем кольца с фильтрами помещают на увлгикненные средой 199 стерильные марлевые салфетки, В кольца Енос т среду 199 дл проверки качества фильтра и герметичности камеры. В стерильных услови х на The walls of the chamber according to a known method are made of plastic rings, and the cover is made of nillipore filters by placing a notch on the filter, sterilizing and then cutting circles. The resulting circles were carefully glued to the rings of glueMg by the path of dissolving the filters in acetone so that their matte side was facing the cells (it is considered less toxic). Then the camera in disassembled form is placed in Petri dishes and sterilized under the rays of a bactericidal lamp. Subsequently, filter rings are placed on sterile gauze cloths cleaned with medium 199, B Rings Wear medium 199 to check the quality of the filter and the tightness of the chamber. Under sterile conditions
0 фильтры в кольца помещают исследуемую суспензию клеток, .Ожидают, пока культуральна просочитс через фильтры и на них останутс только клетки. Потом накладывают кольца0 filters in the rings are placed on the test cell suspension, waiting for the culture to pass through the filters and only the cells will remain on them. Then impose rings
5 друг на друга (меньшее в большее), придавливают сверху лопаткой дл сопоставл-эни и герметизируют, проклеива щель между ними клеем. Полученные таким образом камеры имплантируют в I организм животного 1.5 at each other (smaller to larger), press down from above with a spatula for correlating-en and seal, glue the gap between them with glue. The chambers thus obtained are implanted into animal body I of animal 1.
00
к недостатксЦ известного способа относ тс сложность и трудоемкость изготовлени большого количества камер , а также то, что полученные ка5 меры, хот и позвол ют выращивать клетки iin vivo и in .vitro, однако они выполнены из :оптически непрозрачных материалов, что не позвол ет осуществл ть наблюдение за одни0 мн и теми же отдельными клетками вThe disadvantage of this method is the complexity and laboriousness of manufacturing a large number of chambers, as well as the fact that the obtained measures, although they allow to grow iin vivo and in. vitro cells, however, they are made from: optically opaque materials, which does not allow Observe one and the same individual cells in
динамике их роста и развити непосредственно в камере; дл изучени исследуемых клеток камера, в которой они выращивались, должна быть демонтирована , клетки извлечены и перенесены на предметное стекло, что нарушает первоначальное взаимораспо ложение клеток, их форму и размеры. Часть клеток может разрушатьс . Камера .не позвол ет осуществл ть непосредственное наблюдение за ростом, размножением и дифференцировкой исследуемых клеток под контролем микроскопа в состо нии их развити . Камера имеет жесткую структуру, что отрицательно вли ет на организм животного при имплантации. Методика не позвол ет получать одновременно необходимое количество кайер, так как кажда из них готовитс .отдельно.the dynamics of their growth and development directly in the chamber; in order to study the cells under study, the chamber in which they were grown must be dismantled, the cells removed and transferred onto a glass slide, which violates the initial interposition of the cells, their shape and size. Some cells may be destroyed. The camera does not allow direct observation of the growth, reproduction and differentiation of the studied cells under the control of a microscope in the state of their development. The chamber has a rigid structure, which adversely affects the body of the animal during implantation. The technique does not allow for the simultaneous production of the required kayer, since each of them is prepared separately.
Цель изобретени - упрощение, удешевление способа и возможность исследовани клеток в камере на разных этапах их развити .The purpose of the invention is to simplify, reduce the cost of the method and the possibility of studying the cells in the chamber at different stages of their development.
Дл достижени этой цели стенки днища и крышку выполн ют из полиакриламидного гел , при этом стенки и днище формируют, залива рабочий раствор в пространство между- двум параллельными пластинами, верхн из которых имеет выступы дл образовани полостей в нижней пластине,, полимеризуют смесь до образовани гел и снимают верхнюю пластину, а герметизацию камеры провод т путем наложени сверху листового материала с образованием зазора между ним и крышкой , заливают рабочий раствор и полимеризуют до образовани гел , снимают листовой материал и выштамповывают камеру. .На фиг.1 изображена камера дл культивировани клеток, общий вид; на фиг. формирование полосы дл размещеьС1 клеток; на фиг. 3 - приготовление плоской гелевой пластины; на фиг.4 - введение в полости суспензии клеток и накладывание крышек; на фиг.5 - герметизаци камер путем закреплени крышек в гелевой массе; на фиг. 6 - вырез.ание камер.To achieve this goal, the bottom walls and the cover are made of polyacrylamide gel, while the walls and the bottom form, pouring the working solution into the space between two parallel plates, the top of which has protrusions to form cavities in the bottom plate, the mixture is polymerized to form a gel and remove the top plate, and the chamber is sealed by overlaying the top sheet material with a gap between it and the lid, pour the working solution and polymerize to form a gel, remove the sheet material and punched chamber. Figure 1 shows a cell culture chamber, a general view; in fig. strip formation to place C1 cells; in fig. 3 - preparation of a flat gel plate; figure 4 - the introduction into the cavity of the cell suspension and the imposition of caps; Fig. 5 illustrates the sealing of chambers by fixing caps in a gel mass; in fig. 6 - camera cut-out.
Камера готовитс следующим образом .The chamber is prepared as follows.
Берут четыре плексигласовые пластины 1-4. На поверхность пластины 1 в шахматном пор дке на рассто нии примерно 15-2О мм приклеивают водостойким клеем предварительно вырезанные из пластика или медицинской резины плоские кружки 5 диаметром 6 мм и толщиной 1-2 мм (фиг.2а). Пластины стерилизуют кип чением.Take four plexiglass plates 1-4. On the surface of the plate 1 in a staggered order at a distance of about 15-2 mm, glue flat circles 5 with a diameter of 6 mm and a thickness of 1–2 mm (Fig. 2a) that are pre-cut out of plastic or medical rubber and glued with waterproof glue. Plates are sterilized by boiling.
Пластину 1 накладывают на пр моугольные плексигласовые подставки б толщиной 2-3 мм, расположенные по бокам пластины 2 таким образом, что-: бы плоскость с приклеенными кружками 5 пластины 1 была обращена к пластине 2 (фиг.2а,б). Пластину 3Plate 1 is placed on rectangular Plexiglas coasters b, 2–3 mm thick, located on the sides of plate 2 in such a way that the plane with glued circles 5 of plate 1 faces plate 2 (Fig. 2a, b). Plate 3
накладывают на пр моугольные плексигласовые подставки 7 толщиной 1г2 мм расположенные по бокам пластины 4 (фиг.За,б). Профильтрованные через бактериальные фильтры рабочие растворы дл получени полиакриламидного гел смешивают (стерильно) и заливают в пространство между пластинами 1 и 2 (фиг.26) и 3 и 4 (фиг.36). При этом капилл рные силы удерживают жидкость между пластинами, смесь растворов полимеризуют через 1520 мин (в зависимости от режима полимеризации ) . После этого пластиныimpose on the rectangular plexiglass supports 7 with a thickness of 1 2 mm located on the sides of the plate 4 (fig.Za, b). The working solutions filtered through bacterial filters to obtain a polyacrylamide gel are mixed (sterile) and poured into the space between plates 1 and 2 (Fig. 26) and 3 and 4 (Fig. 36). In this case, capillary forces hold the liquid between the plates, the mixture of solutions is polymerized after 1520 minutes (depending on the polymerization mode). After this plate
1и 2 снимают с подставок. На пластине 2 остаетс гелева пластина с полост ми 8 (фиг.2в)-, а на пластине 4 плоска гелева пластина (Фиг.Зв).1 and 2 are removed from the stands. On the plate 2 there is a gel plate with cavities 8 (fig. 2b) -, and on the plate 4 a flat gel plate (Fig. 3b).
Из плоской гелевой пластины сверлами дл пробок вырезают кружки, выполн ющие функцию крышек 9, диаметр которых на 2-3 мм больше диаметра полостей 8. В полости 8 внос т исследуемые клетки (фиг.4а). Сверху полости 8 покрывают крышками 9.Circles are cut out of the flat gel plate with drill bits for the plugs, which function as caps 9 that are 2–3 mm in diameter larger than the cavities 8. The cells in the cavity 8 are inserted (Fig. 4a). On top of the cavity 8 is covered with lids 9.
При исследовании в камере неприкрепл кидих клеток (например,подвижных микроорганизмов) последние прижимают ко дну луночки гелевым кружком , диаметр которого соответствует диаметру луночки. При этом камера будет без внутреннейполости.In the study in the chamber of non-attached kidich cells (for example, motile microorganisms), the latter are pressed to the bottom of the well with a gel circle, the diameter of which corresponds to the diameter of the well. In this case, the camera will be without an internal cavity.
Герметизацию камеры осуществл ют следующим образом.The sealing of the chamber is carried out as follows.
По бокам плексигласовой пластиныOn the sides of the plexiglass plate
2устанавливают подставки 10 таких размеров, что после положени на них листового материала или пластины 3 образуетс зазор в 1-2 мм между2 install supports 10 of such dimensions that, after positioning the sheet material or plate 3 on them, a gap of 1-2 mm is formed between
этим материалом (пластиной) и крышкой 9. В образовавшеес пространство заливают смесь рабочих растворов котора , полимеризу сь, соедин ет пластины между собой (фиг.56) . Листовой материал (плексигласовую пластину 3) снимают с подставок 10. Сверлами дл пробок диаметром 1215 мм вырезают камеры.with this material (plate) and lid 9. A mixture of working solutions is poured into the resulting space, which, polymerizing, connects the plates together (Fig. 56). The sheet material (Plexiglas plate 3) is removed from the supports 10. The chambers are cut out for the plugs with a diameter of 1215 mm.
Изготовленные камеры отмывают в физиологическом растворе NaCI растворе Хенкса, среде 199 в зависимости от того, какие клетки подлежат исследованию. В дальнейшем камеры имплантируют в организм животного или помещают в питательною среду- при культивировании in vitro.The manufactured chambers are washed in Hank's NaCl saline solution, medium 199, depending on which cells are to be studied. Subsequently, the chambers are implanted into the animal's body or placed in a nutrient medium — when cultured in vitro.
Методика предусматривает изготовление одновременно камеры различных размеров и в необходимом количестве в зависимости от целей исследоваии .The technique involves the manufacture of simultaneously cameras of various sizes and in the required quantity, depending on the purpose of the study.
Камеры, изготовленные- по предлагаемому способу из полиакриламидного гел , обеспечивают возможность изучени одних и,тех же отдельных клеток в динамике их роста и развити . Дл этого клетки подвергают микроско пированию непосредственно в камере. Дл облегчени нахождени клеток в камеру совместно с клетками при ихCameras manufactured by the proposed method from a polyacrylamide gel provide the opportunity to study the same individual cells in the dynamics of their growth and development. For this, cells are microscopically copied directly in the chamber. To facilitate the location of cells in the chamber together with the cells during their
посеве мо сно вводить специальные маркеры (частицы активированного угл , убитые дрожжевые клетки и да.) Через необходимое врем камеры извлекают из организма .или питательной среды Под микроскопом наход т ту же группу клеток и подвергают исследованию . При необходимости пастеровской пипеткой клетки могут быть извлечены . Камеру можно повторно имплантировать в организм или помечать в питательную среду.Sowing, it is possible to introduce special markers (particles of activated carbon, killed yeast cells and yes.) After the required time, the chambers are removed from the body or nutrient medium. Under the microscope, the same group of cells is found and examined. If necessary, the Pasteur pipette cells can be extracted. The camera can be re-implanted into the body or labeled in a nutrient medium.
Изготовление камер из полиакриламидного гел обеспечивает опт ическую прозрачность, котора позвол ет проводить наблюдени исследуемых клеток световой микроскопией в динамике их роста и размножени . Камеры эластичны, xopotdo перенос тс животными и обладают способностью конфигурировать в полост х при имплантации в организм даже пРи одновременной имплантации одному животному 2-3 камер.The manufacture of chambers from polyacrylamide gel provides optical transparency, which allows observation of the cells under investigation by light microscopy in the dynamics of their growth and reproduction. The chambers are elastic, xopotdo are transported by animals and have the ability to configure in the cavities when implanted into the body even when simultaneously implanting one animal 2-3 chambers.
Основньв 1и преимуществакш изготовленных камер данным способом вл ютс оптическа прозрачность, эластичность , биологическа инертность используемого дл изготовлени камер материала. Способ их изготовлени более прост, доступен и позвол ет одновременно получать необходимое количество камер.The main advantages of the manufactured cameras by this method are the optical transparency, elasticity, biological inertness of the material used to manufacture the cameras. The method of their manufacture is simpler, accessible and allows you to simultaneously receive the required number of cameras.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU782599541A SU821484A1 (en) | 1978-04-04 | 1978-04-04 | Method of making chamber for cell culturing |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU782599541A SU821484A1 (en) | 1978-04-04 | 1978-04-04 | Method of making chamber for cell culturing |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU821484A1 true SU821484A1 (en) | 1981-04-15 |
Family
ID=20757445
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU782599541A SU821484A1 (en) | 1978-04-04 | 1978-04-04 | Method of making chamber for cell culturing |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU821484A1 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4975377A (en) * | 1987-05-14 | 1990-12-04 | Key Marc E | Cell growth chambers and method of use thereof |
-
1978
- 1978-04-04 SU SU782599541A patent/SU821484A1/en active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4975377A (en) * | 1987-05-14 | 1990-12-04 | Key Marc E | Cell growth chambers and method of use thereof |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69802239T2 (en) | Culture vessel | |
EP0418035B1 (en) | Living tissue equivalents | |
US5792653A (en) | Substrate for cell structures | |
CA2612269C (en) | Method of producing organotypic cell cultures | |
CN113773959B (en) | Organoid culture chip and organoid culture method | |
JP2007515958A (en) | Cultured cells, cell culture methods and equipment | |
CN101218337B (en) | Device | |
KR20130131329A (en) | Cell culture insert | |
EP0529751A1 (en) | Cell culture substrate, test material for cell culture and preparations thereof | |
US20180371390A1 (en) | A cell culture device | |
US20240010962A1 (en) | Microfluidic cell culture device and method for cell cultivation | |
JP2017023049A (en) | Cell culture vessel having observation window part, cell culture apparatus, and method for observing cultured cells from the side thereof | |
SU821484A1 (en) | Method of making chamber for cell culturing | |
US6007343A (en) | Educational biology assembly | |
CN205473829U (en) | Interact's culture apparatus between cell culture and cell | |
Mancinelli et al. | Recreating cellular barriers in human microphysiological systems in-vitro | |
US20140273062A1 (en) | Cell Pack for the Growth and Manipulation of Three Dimensional Cell Cultures | |
US6043079A (en) | Cell growth apparatus for histophysiologic culture | |
CN218755810U (en) | Culture device and culture system | |
UA146819U (en) | METHOD OF LONG-TERM CULTIVATION OF HEMOPOETIC STEM CELLS | |
SU659619A1 (en) | Method of preparing nutrient medium for cultivation of microorganisms | |
SU1732975A1 (en) | Method of assessing biological compatibility of a material with the cornea | |
CN112251355A (en) | Cell culture device and culture method thereof | |
WO2023218188A1 (en) | Cell culture device | |
CN112501016A (en) | Carrier liquid device of laser confocal microscope for culturing eukaryotic cells |