SU773485A1

SU773485A1 - Способ фиксации исследуемых нервных клеток на тестирующем электроде и устройство дл его осуществлени

Info

Publication number: SU773485A1
Application number: SU792743832A
Authority: SU
Inventors: Александр Иванович Сызганов
Original assignee: Горьковский Государственный Медицинский Институт Им. С.М.Кирова
Priority date: 1979-04-02
Filing date: 1979-04-02
Publication date: 1980-10-23

Description

(54) СПОСОБ ФИКСАЦИИ ИССЛЕДУЕМЫХ НЕРВНЫХ КЛЕТОК НА ТЕСТИРУЮЩЕМ ЭЛЕКТРОДЕ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

t

Изобретение относитс к медицине и предназначено дл изучени вли ни растворов различных веществ на электрическую активность нервных клеток.

Известен способ фиксации исследуе-5 мых нервных клеток на тестирующем электроде. Способ осуществл ют устройством , содержащим камеру с тестирующим и индифферетным электродами 1.10

Недостатком данного способа вл етс то, что ограниченное врем и ненадежность закреплени нервной клетки на микроэлектроде (расположенное в жидкости тело клетки легко смещает- 5 с относительно кончика тестирук дего микроэлектрода) не позвол ют следить за динамикой электрической активности клетки в данном растворе и исследовать вли ние нескольких раз- 20 личных растворов с известной концентрацией на одну и ту же клетку.

Цель изобретени - обеспечение продолжительной и надежной фиксации исследуемой нервной клетки на тести- 25 рующем электроде при заполнении или смене клеточной культуры или воздействующих веществ.

Указанна цель достигаетс тем, что на тестирующий и индифферентный ЗО

электроды подают напр жение посто нного тока, причем на тестирующий электрод подают положительный потенциал , а на индифферентный электрод отрицательный потенциал напр жени посто нного тока.

Данный способ может быть осуществлен устройством содержащим камеру с тестирующим и индифферентным электродами , в который введены последовательно соединенные источник напр жени посто нного тока, коммутатор пол рности и переключатель, причем тестирующий электрод соединен с переключателем , а индифферентный электрод соединен с коммутатором пол рности.

На чертеже изображена схема устройства дл осуществлени способа фиксации исследуемых нервных клеток на тестирующем электроде.

Устройство содержит микроэлектрофоретическую камеру 1 (высотой 2 мм, шириной 10 мм и длиной 15 мм) в длинных стенках которой вмонтированы тестирующий микроэлектрод 2 и индифферентный электрод 3. В противоположных коротких стенках камеры выполнены впускное и выпускное отверсти 4, которые служат дл пропускани жидкости через камеру. Тестирующий микроэлектрод 2 и индифферентный электрод 3 через переключатель 5 и источник б напр жени посто нного тока подключены в микроэлектрофоретическую цепь. Дл изменени пол рности электродов в микроэлектрофоретическую цепь введен коммутатор пол рности . Способ осуществл етс следующим образом. Раствор хлористого натри (0,9 н.) с клетками переживающей культуры нерв ной ткани помещают в герметичную микроэлектрофоретическую камеру. Затем через систему тестирующий микроэлектрод - раствор с клетками переживающей культуры нервной ткани второй электрод пропускают электрический ток от внешнего источника ЭДС В результате к положительно зар жен ному тестирующему микроэлектроду из раствора прит гиваетс и фиксируетс нагруженна отрицательным электрокинетическим (дзета-) потенциалом одна из клеток переживающей культуры нервной ткани. Остальные клетки переживающей культуры удал ют из микроэлектрофоретической камеры путем пропускани через камеру чистого раствора хлористого натри (0,9 н.). Микроэлектрофорез прекращают. Затем провод т регистрацию электрической активности клетки, закрепленной на ког1чике тестирующего микроэлектрода за счет возникающих в результате микроэлектрофореза сил поверхностног нат жени и межмолекул рного сцеплени , В дальнейшем Физиологический раствор (0,9 н. NaCl)B микроэлектрофоретической камере замен ют на раст вор химического или фармацевтического вещества с известной концентрацией путем пропускани через камеру раствора с известной концентрацией воздействующего химического или фармацевтического вещества. Провод т повторную регистрацию электрической активности закрепленной ранее на тес тирующем микроэлектроде той же самой клетки. Пример. Взвесь клеток свежеприготовленной переживающей культуры корковой ткани мозга кошки в физиоло гическом растворе с температурой помещают в герметичную микроэле трофоретическую камеру (в 1 мм раст вора содержитс около 10 клеток). Затем через систему тестирующий мик роэлектрод -.раствор с клетками - вт рой электрод пропускают электричес кий ток от внешнего источника посто ного напр жени с ЭДС 20В в течение 3 мин. В результате микроэлектрофоре к положительно зар женному тестирую щему микроэлектроду из раствора при гиваетс и фиксируетс за счет сил i.iepXHOCTHoro нат жени и межмолеку рного сцеплени одна из клеток пееживающей культуры нервной ткани, агруженна отрицательным электрокиематическим (дзета-) потенциалом. момент контакта нервной клетки с ончиком тестирующего микроэлектроа процесс электрофореза прекращатс . Об окончании процесса электроореза свидетельствует уменьшение ротекающего через систему тока скачом от 15 мкА до неощутимо малой еличины. Остальные (незафиксированные) клетки переживающей культуры удал ют из камеры путем пропускани через нее физиологического раствора На усилителе биопотенциалов (УПТ-2) регистрируют пиковые потенциалы клетки амплитудой 25 - 30 мВ. Затем физиологический раствор в электрофоретической камере замен ют на раствор рингера с 0,1% содержанием сернокислого магни и провод т повторную регистрацию электрической активности .закрепленной ранее на тестирующем микроэлектроде той же самой клетки. По разнице картин электрической активности одной и той же клетки, зарегистрированной до и после воздействи на клетку раствором химического и фармацевтического вещества (например, по сдвигу уровн посто нного потенциала или по динамике спектральной плотности генерируемых клеткой пиковых потенциалов ), изучают эффективность вли ни действующего раствора химического или фармацевтического вещества с известной его концентрацией на данную клетку. Устройство работает следующим образом. После заполнени микроэлектрофоретической камеры 1 раствором хлористого натри с клетками переживающей культуры нервной ткани переключатель 5 став т в левое положе ние , при этом на тестирующий микроэлектрод 2 от источника 6 напр жени через коммуматор пол рности 7, наход щийс в верхнем положении, подаетс положительный полюс, а на индифферентный микроэлектрод 3 отрицательный полюс источника б напр жени . Вследствие тОго, что нервные клетки переживающей культуры мозговой ткани обладают отрицательным электрокинетическим (дзета-) потенциалом, они прит гиваютс из раствора хлористого натри к кончику тестирукщего микроэлектрода 2, обладающеЛгу поположительныл: потенциалом. Микроэлектро .форез прекращаетс , когда одна из нервных клеток окажетс зафиксированной на кончике тестирующего микроэлектрода 2. Микроэлектрофорез прекращаетс вследствие того, что сопротивление мембраны нервной

Claims

Формула изобретения

1. Способ фиксации исследуемых нервных клеток на тестирующем электроде, отличающийся тем, е что, с целью продолжительной и надежной фиксации исследуемой нервной клетки на тестирующем электроде при заполнении или смене клеточной культуры или воздействующих веществ, на тестирующий и индифферентный электроды подают напряжение постоянного тока, причем на тестирующий электрод подают положительный потенциал, а на индифферентный электрод отрицательный потенциал напряжения

15 постоянного тока.
2. Устройство для осуществления способа по п.1, содержащее камеру с тестирующим и индифферентным

20 электродами, отличаю щеес я тем, что, в него введены последовательно соединенные источник напряжения постоянного тока, коммутатор полярности и переключатель, причем тестирующий электрод соединен с переключателем, а индифферентный электрод соединен с коммутатором полярности.