SU745524A1

SU745524A1 - Method of treating pyo-surgical infections

Info

Publication number: SU745524A1
Application number: SU782630660A
Authority: SU
Inventors: Лидия Дмитриевна Перемитина; Эльвира Андреевна Берилло; Анатолий Григорьевич Хволес
Priority date: 1978-06-16
Filing date: 1978-06-16
Publication date: 1980-07-07

Description

(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНО-ХИРУРГИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ(54) METHOD FOR TREATING PURULENT-SURGICAL INFECTIONS

Изобретение относитс к медицине и может быть использовано дл лечени больных раневыми инфекци ми. Известен способ лечени гнойнохирургических инфекций с помощью бак териофага 1 . Однако известный способ Лечени длителен (60,7 дней), а положительные результаты лечени лишь в 65% случаев. Целью изобретени вл етс сокращение сроков лечени . Эта цель достигаетс тем, что используют монофаг с литической активностью , усиленной 2-3-х кратным пасс рованием на питательных средах, и адаптированный к микрофлоре больного Пример. От больных с абсцес;сами , флегмонами, маститами, карбункулами , остеомиелитами и др. хирургичесмими заболевани ми выдел ют воз будителей из содержимого раны с помощью ватно-марлевого тампона. Среди испытуемых фагов (стафилофаг, стрептофаг , колифаг, синегнойный и протей ные фаги) отбирают наиболее активные клоны и затем литическа активность отобранных монофагов усиливаетс -путем пассажей на выделенных от дагнног больного возбудител х с применением, твердых и жидких питательных сред. Дл этого исследуемую культуру бактерий , предварительно выделенную из раны при посеве ее содержимого с там .пона, засевгиот в пробирку с м со-пептонным бульоном. Эту культуру инкубируют 3-4 ч до концентрации микробных клеток, равной 1 млрд, микробных клеток в 1 мл стандарта. Затем бульонную культуру после инкубации засевают на м со-пептонный агар в чашке Петри. Стекло дна чашки расчерчивают на клетки , количество которых соответствует, количеству фагов, имеющихс в наборе, а затем чашки подсушивают в термостате с открытой крышкой 20-30 мин.. Далее пастерЬвской пипеткой или петлей нанос т различные фаги (стафилофаг , стрёптофаг, колифаг, синегнойный или протейный фаги) в зависимости от вида культуры на поверхности питательного агара в чашке Петри, засе нного испытуемой культурой. После подсыхани капель фагов 10-20 мин чашку переворачивают крынкой вниз и инкубируют не менее 5-6 ч при 37 С до по влени зон просветлени в местах нанесени фагов. После инкубацииThe invention relates to medicine and can be used to treat patients with wound infections. There is a method of treating suppurative infections with bacteriophage 1. However, the known method of treatment is long (60.7 days), and the positive results of treatment are only in 65% of cases. The aim of the invention is to reduce the duration of treatment. This goal is achieved by using monophage with lytic activity, enhanced by 2–3-fold passaging on nutrient media, and adapted to the patient's microflora Example. Patients with an abscess, themselves, phlegmon, mastitis, carbuncles, osteomyelitis, and other surgical diseases, isolated the causative agents from the wound contents using a cotton-gauze tampon. Among the tested phages (staphylophage, streptophage, coliphage, pseudomonas, and proteous phages) select the most active clones and then the lytic activity of the selected monophages is enhanced by passages on the pathogens isolated from the deceased patient using solid and liquid nutrient media. For this, the studied culture of bacteria, previously isolated from the wound when sowing its contents from there, the seed, seeded into a test tube with mash-peptone broth. This culture is incubated for 3-4 hours to a concentration of microbial cells equal to 1 billion microbial cells in 1 ml of standard. Then, the broth culture after incubation is seeded on the m-peptone agar in a Petri dish. The glass of the bottom of the cup is drawn onto the cells, the number of which corresponds to the number of phages present in the set, and then the cups are dried in a thermostat with the lid open for 20-30 min. or proteaceous phages), depending on the type of culture on the surface of the nutrient agar in a Petri dish, seeded with the test culture. After the droplets of phages are dried for 10–20 min, the cup is turned upside down and incubated for at least 5–6 h at 37 ° C until the zones of bleaching appear at the sites of phage application. After incubation

производ т отбор фага из на11более четко выраженных зон лизиса на по- ; верхности газона испытуемой культуры Дл последующего получени соответствующих фаголизатов используют метод агаровых слоев по Грациа. В этом случае примен ют 1,2%-ный м co-пeптoн вый агар, на поверхности которого разливают О,7%-ный предварительно растопленный и охлажденный до 45-48° м со-пептонный агар с предварительно внесенной в него тщательно перемешанной смесью 0,1 мл бульонной культуры и 0,5 мл специфического Дл данной культуры фага.После застывани ВерхHeiro сЙО ага:рача1Йку Петри, перевернутую крышкой вниз инкубируют при 37°С, йрйчем дл оценки результата опыта обр ащакгт внимание либо нa.pёразбванйё зон лизиса на поверхности агара, либо на отсутствие |)оста Культуры в этом же агаре. ПосЛе 1820 ч инкубаций пЬследова- ейЁШ снимают и перенос т в стерильный флакон trHa4anaверхний слой агара,, а затем смыв с поверхности нийнехй елбй агара в объеме 5 мл м со-пептонного бульона. Полученную смесь агара в стерильном флаконе периодически встр хивают в течение 30 мин. Эту смесь затем центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость перенос т в стерильный флакон. Затем фаголизат очищают от бактериальных клеток. Дл этого производ т фильтрацию фаголизата при помощи вакуумного насоса через бактериальные свечи (лучше всего использовать свечи Шамберлена)..phage are selected from the more clearly defined lysis zones on the -; lawn surfaces of the test culture. For the subsequent preparation of the corresponding phagolysates, the Gracia agar layer method is used. In this case, 1.2% co-peptone agar is used, on the surface of which O-water is poured, 7% pre-melted and peptone agar with pre-introduced thoroughly mixed mixture is cooled to 45-48 ° C. 0.1 ml of the broth culture and 0.5 ml of the specific For this culture of the phage. After solidification of the Top Heiro XYO aha: Racha Petri, turned upside down, incubated at 37 ° C, and use to assess the result of the experiment, attention or lysis of the lysis zones surface of the agar, or in the absence of | the agar. After 1820 hours of incubation, the slurry is removed and transferred to a sterile vial of trHa4ana top layer of agar, and then rinsed from the surface of the bottom eliy agar in a volume of 5 ml of cream with peptone broth. The resulting agar mixture in a sterile vial is shaken periodically for 30 minutes. This mixture is then centrifuged for 30 minutes at 3000 rpm. The supernatant is transferred to a sterile vial. Then phagolysate purified from bacterial cells. To do this, phagolysate is filtered using a vacuum pump through bacterial suppositories (it is best to use Chamberlin candles).

Бактериальные свечи предварительно стерилиз тот вместе с приемником в автоклаве текучим паром.Bacterial suppositories are pre-sterilized with fluid vapor in the autoclave.

С целью усилени литическрй активности монофагов провод т не менее 2-/ 3 пассажей на плотной питательной ёрВДё й 1ашках , засе ннызГ с- пытуемой культурой с вноВь поЛу 1енным монофагом по указанному способу. Кроме твердых питательных сред можно использовать и жидкие питательные среды. В этом случае в 4,51Шй сбпептонного буЛьона внос т 0,5 мл то- го или иного фага (стафилофаг, стрептофаг , колифаг,. синёгнойный и протейный фаги) и 0,1 мл выделенной от ; больного бульонной культуры, инкубированный до 3-4 ч в;термостате. Эту смесь выдерживают при и сравнивают со степенью мутност Контроль- ; ного бульона, зараженного испытуемыми бактери ми без добавлени в йего фага. В результате сравнени опытной и контрольной пробирок устанавливают наличие лизиса куЛьтур. Подобный процесс повтор ют 2-3 раза самым пассируют фаг в жидкой питатель-, ной среде, повйиа его лит ческую активность путем пассажей на вЬщелен ных от данного больного возбудйте745524In order to enhance the lytic activity of monophages, at least 2- / 3 passages were performed on a dense nutrient buffer, seeded with a test culture with viable monophage by the indicated method. In addition to solid nutrient media, liquid nutrient media can be used. In this case, 0.5 ml of one or another phage (staphylophage, streptophage, coliphage, syngoic and proteic phages) and 0.1 ml of isolated from; patient broth culture, incubated for 3-4 h in; thermostat. This mixture is kept at and compared with the degree of turbidity. Control-; of broth contaminated with the test bacteria without the addition of phage to it. As a result of comparison of the test and control tubes, the presence of lysis of the culture is established. This process is repeated 2-3 times by most passaging the phage in a liquid nutrient medium, increase its lytic activity by means of passages on patients from this patient, excite 745524

л х. Полученные адаптированные моно фаги после усилени литической активности провер ют на стерильность и активность. Титрование фага провод т с целью определени количества зрелых фаговых частиц в единице объема (титр фага) . Дл этого использьтот либо плотные питательные среды, либо жидкие питательные среды. Наиболее распространенным и точным вЛ ёг с метод агаровых слоев, предложенный Грациа. Этот метод основан на допущении , что кажда частица вируса да:ет потомство, определ емое визуально по наличию на газоне чувствительной культуры бактерий зон лизиса, полу чивьоих;название негативных колоний. 1Благодар1Я данному методу устанавливают количество фаговых частиц, способных образовывать Негативные колонии. При титрованйи методом агаровых слое следует параллельно засевать не мене чашек фагом из одного и того же разведени . Титр фага определ ют путем подсчета числа негативных, колоШй на параллельных чашках. Титр мо .нофагов (их;активность по Аппельману ) обычно соответствует дл стафилококков 10 /дл стрептококков 10 дл проте 10 , Дл синегнойных палочек , дл энтеропатргенных кишечных палрчек 10.lh The resulting adapted monophages, after enhancing lytic activity, are tested for sterility and activity. Phage titration is carried out to determine the amount of mature phage particles per unit volume (phage titer). To do this, use either solid nutrient media or liquid nutrient media. The most common and accurate method of agar layer proposed by Gracia. This method is based on the assumption that each particle of a virus even has an offspring, determined visually by the presence of lysis zones on the lawn of a sensitive bacterial culture, living on it, the name of negative colonies. 1Thanks to this method, the number of phage particles capable of forming negative colonies is established. When titrated using the agar layer method, parallel to seeding at least one cup with phage from the same dilution. Phage titer is determined by counting the number of negative kols on parallel dishes. A titer of monophagous bacteria (their; Appellman activity) is usually equivalent for staphylococci 10 / for streptococci 10 for protein 10, for pseudomonas bacilli, for enteropathogenic intestinal palrheks 10.

Предлагаемый способ лечени предусматривает применение препаратов монофага либо местно в виде орошени , примочек или тампонировани , либо парэнтерально (подкожно или внутримышечно ) . В первом случае сначала промывают рану перекисью водорода и высушивают раневую поверхность, а затем удал ют пинцетом из раны рыхлую некротическую ткань. Кра раны при этом обрабатывают настойкой йода , после смоченным монофагом в количестве 7-8 мл тампоном рыхло тампонируют рану. При абсцессах монофаги примен ютс местно после вскрти и дрегировани гнойника путем смачивани тампонов, вводимых в рану илипутем промывани монофагом гнойной полости. В другом случае, например при карбункулах, эти препараты можно вводить непосредственно В очаг под основанием инфильтрата путем рбкаЛЫВани . Продолжительность лечени адаптированными монофагами зависит от т жести заболевани , специфики возбудител и своевременности лечени . При раневых инфекци х средней т жести курс Лечени монофагами не превышает 2-3 недель.The proposed method of treatment involves the use of monophage preparations, either locally in the form of irrigation, lotions or tamponing, or parenteral (subcutaneously or intramuscularly). In the first case, the wound is first washed with hydrogen peroxide and dried on the wound surface, and then loose necrotic tissue is removed with forceps from the wound. At the same time, the wound marches are treated with tincture of iodine, and after washing with a monophage in the amount of 7-8 ml, the wound is loosely padded with a tampon. In abscesses, monophages are applied topically after opening and separating the abscess by moistening tampons injected into the wound or by washing the purulent cavity with a monophage. In another case, for example, with carbuncles, these drugs can be injected directly into the nidus under the base of the infiltrate by means of rbcylA. The duration of treatment with adapted monophages depends on the severity of the disease, the specificity of the pathogen and the timeliness of treatment. In case of wound infections of medium body, the course of treatment with monophages does not exceed 2-3 weeks.

Предлагаемый способ лечени приводит к более быстрому течению раневого процесса. Как показали клинические испытани , все больные (30 чел.), леченные с применением монофагов , провели в клинике 1123 койкрдн , что на одногр больного составл ет 30,7 дней, а такое же количество Вольных, леченных с применением производственных фагов (полифагов) , находились в стационаре 1823 койкодн , что составл ет экономию в 700 койко-дней при госпитализации указанного количества больных хирургическими инфекци ми (За еп.). Кроме того, у больных, леченных монофагами , гладкое заживление раны после наложени ранних вторичных швов наступало у 10-ти чел.,.а в другой группе больных, леченных полифагами, такого результата удалось добитьс лишь у двух больных. Из группы больных , леченных адаптированными монофагами , лишь двое выписано на амбулаторное лечение с незажившими ранами, в то врем как в группе больных, леченных полифагами, таких больных оказалось 11. Способ лечени монофагами прост и дает возможность быстрого приготовлени специфического антибактериального препарата. Все это позвол ет широко использовать предлагаетй зпдсоб лечени услови х многих хирургическйх стационар6в.The proposed method of treatment leads to a more rapid course of the wound process. As shown by clinical trials, all patients (30 people) treated with monophages spent 1,123 patients in the clinic, which is 30.7 days for one patient, and the same number of Free patients treated with production phages (polyphages), In 1823 the hospital was hospitalized, which amounts to a saving of 700 bed-days with the hospitalization of a specified number of patients with surgical infections (Over BD). In addition, in patients treated with monophages, smooth wound healing after the imposition of early secondary sutures occurred in 10 people, and in the other group of patients treated with polyphages, only two patients managed to achieve such a result. Of the group of patients treated with adapted monophagous, only two were discharged for outpatient treatment with unhealed wounds, while in the group of patients treated with polyphagus there were 11 such patients. The treatment with monophages is simple and allows for the rapid preparation of a specific antibacterial drug. All this makes it possible to widely use the treatment options offered by many surgical inpatient facilities.

Claims

Invention Formula

A method for the treatment of purulent-surgical infections with a bacteriophage, characterized by

In order to shorten the treatment time, a monophage with lytic activity, enhanced by 2–3 times passaging on: nutrient media, and adapted to the microflora of the patient, is used.

Sources of information taken into account during the examination 1. Kazan Medical Journal, 1972, 2, p. 25-27.

0