SU733685A1 - Method of producing beta-glucuronidase - Google Patents
Method of producing beta-glucuronidase Download PDFInfo
- Publication number
- SU733685A1 SU733685A1 SU782623042A SU2623042A SU733685A1 SU 733685 A1 SU733685 A1 SU 733685A1 SU 782623042 A SU782623042 A SU 782623042A SU 2623042 A SU2623042 A SU 2623042A SU 733685 A1 SU733685 A1 SU 733685A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- precipitate
- glucuronidase
- water
- centrifuged
- acetate buffer
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
1one
Изобретение относитс к химико-фармацевтической промышленности, а именно к способам получени ферментных препаратов, используемых в биохимических и медицинских исследовани х.The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry, in particular to methods for producing enzyme preparations used in biochemical and medical research.
Известен способ получени / -глюкуронидазы из экстракта измельченной печени фракционированием в ацетатном буфере рН 5,0, аутолизом при 38°С в течение 8- 10 ч, отделением осадка центрифугированием, обработкой ацетатным буфером, добавлением сульфата аммони и выделением целевого продукта в смеси ацетон-вода в соотношении 1:2 1.A method is known for preparing / -glucuronidase from crushed liver extract by fractionation in acetate buffer pH 5.0, autolysis at 38 ° C for 8-10 hours, separation of the precipitate by centrifugation, treatment with acetate buffer, addition of ammonium sulfate and isolation of the target product in acetone mixture water in the ratio of 1: 2 1.
Однако известный способ не обеспечивает получени препарата с высокой активностью (активность препарата 100000-120000 ед/г).However, the known method does not provide a preparation with a high activity (the activity of the preparation is 100000-120000 U / g).
Целью изобретени вл етс повышение активности препарата.The aim of the invention is to increase the activity of the drug.
Это достигаетс тем, что по предлагаемому способу экстракт обрабатывают водой, центрифугируют, осадок обрабатывают водой , раствор диализуют и лиофилизируют.This is achieved by the fact that according to the proposed method the extract is treated with water, centrifuged, the precipitate is treated with water, the solution is dialyzed and lyophilized.
Пример 1. Свежую печень измельчают на м сорубке. В реактор с мешалкой загружают 10 кг фарша и смешивают с 7,5 литрами 0,2 М ацетатного буфера рН 5,0. СмесьExample 1. Fresh livers are ground in m. 10 kg of minced meat is loaded into a stirred reactor and mixed with 7.5 liters of 0.2 M acetate buffer pH 5.0. Mixture
выливают в кастрюлю и выдерживают 20 ч в термостате при 37°С. Осадок отдел ют центрифугированием на «Mistral при 2500 об/мин в течение 30 мин при 15-20°С. Фермент содержитс в центрифугате. Осадок 5 промывают 3,5 л 0,2 М ацетатного буфера рН 5,0, снова центрифугируют при 2500 об/мин, 30 мин при 15-20°С. Экстракты соедин ют. Общий объем центрифугата около 18 литров. Осадок выбрасывают.poured into the pan and incubated for 20 hours in a thermostat at 37 ° C. The precipitate was separated by centrifugation on a "Mistral at 2500 rpm for 30 minutes at 15-20 ° C. The enzyme is contained in a centrifuge. Sediment 5 is washed with 3.5 l of 0.2 M acetate buffer pH 5.0, centrifuged again at 2500 rpm, 30 minutes at 15-20 ° C. Extracts are combined. The total amount of centrifugal about 18 liters. The precipitate is discarded.
К 18 л экстракта при перемешиванииTo 18 l of the extract with stirring
10 добавл ют 6 кг сухого сульфата аммони из расчета 0,334 кг на 1 л экстракта при 15-20°С.- Перемешивание продолжают еш,е 30 мин до полного растворени сульфата аммони . Раствор выдерживают 12 ч при О-4°С без перемешивани . Выпавший осадок отдел ют центрифугированием при 2500 об/мин 30 мин, тепмпература О-4°С. Центрифугат отбрасывают. Осадок промывают 5 л 23,2%-ного раствора сернокислого аммони , охлажденного до О-4°С и центри20 фугируют при 2500 об/мин в течение 30 мин при О-4°С.10 add 6 kg of dry ammonium sulphate at the rate of 0.334 kg per 1 l of the extract at 15-20 ° C. Stirring is continued until the dissolution of ammonium sulphate is complete. The solution is kept for 12 hours at O-4 ° C without stirring. The precipitated precipitate is separated by centrifugation at 2500 rpm for 30 minutes, the temperature is about -4 ° C. Centrifugal discarded. The precipitate is washed with 5 l of a 23.2% ammonium sulphate solution, cooled to -4 ° C, and centrifuged at 2500 rpm for 30 minutes at 0-4 ° C.
Промытый осадок раствор ют в 2 л деминерализованной воды и дл лучшего растворени суспензию выдерживают в термостате при 37°С 2 ч. Нерастворившиес примеси отдел ют центрифугированием при 2500 об/мин в течение 40 мин при 10-20°С. К раствору -глюкуронидазы около 2,2 л при посто нном перемешивании прибавл ют 1 кг (350 г/л) сульфата аммони и оставл ют на 12 ч при О-4°С. Выпавший осадок отдел ют центрифугированием при 2500 об/мин и 4°С в течение 40 мин. Фильтрат отбрасывают. Осадок раствор ют в 1 л воды и центрифугируют. Центрифугат диализуют в течение 4 сут и лиофильно высушивают . Выделенный препарат имеет активность 312000 е/г.The washed precipitate is dissolved in 2 liters of demineralized water and the suspension is kept in a thermostat at 37 ° C for 2 hours for better dissolution. The undissolved impurities are separated by centrifugation at 2500 rpm for 40 minutes at 10-20 ° C. To a solution of β-glucuronidase of about 2.2 l, with constant stirring, add 1 kg (350 g / l) of ammonium sulfate and leave it for 12 hours at O-4 ° C. The precipitate formed is separated by centrifugation at 2500 rpm and 4 ° C for 40 minutes. The filtrate is discarded. The precipitate is dissolved in 1 liter of water and centrifuged. Centrifugal dialysis for 4 days and freeze dried. The selected drug has an activity of 312000 e / g.
Выход - 60 г.Output - 60 g.
Осадок после последнего центрифугировани раствор ют в 0,5 л воды и отдел ют примеси центрифугированием. Центрифугат диализуют в течение 2 сут и лиофильно высушивают.The precipitate after the last centrifugation is dissolved in 0.5 l of water and the impurities are separated by centrifugation. Centrifugal dialysis for 2 days and freeze dried.
Активность - 192000 е/г.Activity - 192000 e / g.
Выход - 30 г.Yield - 30 g.
Пример 2. 8 кг печени гомогенизируют с 6 л 0,2 М ацетатного буфера рН 5,0 и гомогенат оставл ют на автолиз в течение 20 ч при 37°С. Автолизат центрифугируют. Осадок промывают ацетатным буфером рН 5,0 и центрифугируют. Центрифугаты объедин ют 16 л.Example 2. 8 kg of liver is homogenized with 6 l of 0.2 M acetate buffer pH 5.0 and the homogenate is left for autolysis for 20 hours at 37 ° C. Autolysate centrifuged. The precipitate is washed with acetate buffer pH 5.0 and centrifuged. The centrifugates combine 16 liters.
К 16 л экстракта прибавл ют сульфат аммони из расчета 0,334 кг на1 л экстракта и через 12 ч выпавший осадок отдел ют центрифугированием. Осадок промывают 4 л 23,2%-ного раствора сернокислого аммони и центрифугируют. Центрифугаты отбрасывают .Ammonium sulfate was added to 16 liters of the extract at a rate of 0.334 kg per 1 liter of the extract, and after 12 hours, the precipitated precipitate was separated by centrifugation. The precipitate is washed with 4 liters of a 23.2% ammonium sulphate solution and centrifuged. Centrifugal discarded.
Осадок, содержащий фермент ;б-глюкуронидазы , раствор ют в 0,9 л дистиллированной воды и центрифугируют. Центрифугат и осадок обрабатывают отдельно. ВодныйThe precipitate containing the enzyme; b-glucuronidase is dissolved in 0.9 L of distilled water and centrifuged. Centrifugal and sediment treated separately. Water
раствор диализуют в течение 5 сут и лиофильно высушивают. Активность выделенного препарата 320000 е/г.the solution is dialyzed for 5 days and lyophilized. The activity of the selected drug 320000 e / g
Выход - 50 г.Yield - 50 g.
Осадок после центрифугировани раствор ют в 0,7 л воды и центрифугируют. Полученный раствор диализуют и лиофильно высушивают.The pellet is dissolved in 0.7 L of water and centrifuged. The resulting solution is dialyzed and freeze-dried.
Активность выделенного препарата 100000 е/г.The activity of the selected drug 100000 e / g
Выход 30 г.Exit 30 g
Предлагаемый способ обеспечивает улучшение качества ферментного препарата / -глюкуронидазы, который широко используетс в медицинских и биохимических исследовани х . Очистка препарата от примесей предотвращает инактивацию и обеспечивает повышение активности и чистоты /5-глюкуронидазы в 3-5 раз. Использование такого препарата не требует присутстви активатора - ДНК. Исключение ацетона создает безопасность услови труда.The proposed method provides an improvement in the quality of the enzyme preparation / -glucuronidase, which is widely used in medical and biochemical research. Purification of the drug from impurities prevents inactivation and provides an increase in activity and purity of / 5-glucuronidase by 3-5 times. The use of such a drug does not require the presence of an activator - DNA. The exclusion of acetone creates a safe working environment.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU782623042A SU733685A1 (en) | 1978-06-01 | 1978-06-01 | Method of producing beta-glucuronidase |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU782623042A SU733685A1 (en) | 1978-06-01 | 1978-06-01 | Method of producing beta-glucuronidase |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU733685A1 true SU733685A1 (en) | 1980-05-15 |
Family
ID=20767787
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU782623042A SU733685A1 (en) | 1978-06-01 | 1978-06-01 | Method of producing beta-glucuronidase |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU733685A1 (en) |
-
1978
- 1978-06-01 SU SU782623042A patent/SU733685A1/en active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Kawaguchi et al. | Involvement of Sacrophaga lectin in the development of imaginal discs of Sarcophaga peregrina in an autocrine manner | |
US2884358A (en) | Process for preparing crude heparin | |
RU2409291C1 (en) | Method for production of water-soluble polypeptide complex of salmon fishes liver | |
SU1367837A3 (en) | Method of producing agent selectively inhibiting growth or reproduction of normal and leukemia cells of myeloids | |
SU733685A1 (en) | Method of producing beta-glucuronidase | |
US4128637A (en) | Process for producing thymosin | |
Diederich et al. | The effects of mercury and other resgents on Phosphoglycerate mutase− 2, 3− diphosphoglycerate Phosphatase from kidney, muscle and other tissues | |
SU910135A3 (en) | Process for separating hemo-iron from globine | |
SU651656A3 (en) | Method of joint obtaining of insulin and pancreatin | |
RU2148636C1 (en) | Method of preparing yeast low-molecular extract and substance prepared by this method | |
SU611595A3 (en) | Method of simultaneous preparation of protease and heparin inhibitor | |
SU1138410A1 (en) | Method for isolating thermostable placentar alkaline phosphatase | |
US3168448A (en) | Process of preparing a lipolytic enzyme composition | |
US2567378A (en) | Preparation of pepsinogen and pepsin | |
US2703779A (en) | Method of preparing stable watersoluble catalase of high potency | |
RU1417244C (en) | Method of preparing of substance recovering prostate gland function | |
SU1187824A1 (en) | Method of obtaining immunostimulator | |
US4394374A (en) | Thymus gland extracts | |
SU1082811A1 (en) | Method for isolating thermostable placental alkaline phosphatase | |
SU787032A1 (en) | Method of obtaining hyaluronidase | |
US3262854A (en) | Method for the recovery of heparin | |
SU632703A1 (en) | Method of obtaining hyalurohidase | |
RU2055079C1 (en) | Method for production of preparation of hyaluronic acid | |
SU389792A1 (en) | METHOD OF OBTAINING CYTOCHROME Bg | |
SU981360A1 (en) | Method for isolating complex of proteolytic enzymes from pancreatic gland of whales |