SU698617A1

SU698617A1 - Synthetic medium for freezing and storing ram sperm

Info

Publication number: SU698617A1
Application number: SU782647238A
Authority: SU
Inventors: Касымжан Танирбергенович Касымов; Жолдошбек Ашимов; Жарылкасын Утесинов; Гаухар Кариповна Асильбекова
Original assignee: Казахский Научно-Исследовательский Технологический Институт Овцеводства
Priority date: 1978-07-24
Filing date: 1978-07-24
Publication date: 1979-11-25

Description

Изобретение относитс к области 1кивот15оводства и может быть использовано дл длительного хранени спермы с целью рационального и долгосрочного использовани .пле14енных баранов-прои зв одителей, Применение искусственного осеменени в овцеводстве способствует более интенсивному использованию на иболее ценных, проверенных по качеству потомства баранов-производителей и значительноускор ет качестве ное улучшение поголовь . Длительное сохранение спермы дас возможность полнее использовать про йзводителей-улучшателей, особенно в услови х госплемстанций. Известен способ глубокого замора живани спермы баранов 1, Дл разбавлени спермы используе с среда следующего состава: вода дистиллированна - 50 мл; глюкоза,4 Г; глицерин динамитный - 2 мл; токоферилацетат 10%-ный в виде масл ного раствора витамина Е) 1 г-ш желток куриного йца - 10 мл. В состав этой среды вход т.питательное вещество (глюкоза), вещества , оказьшающие защитное действие при резком понижении- температуры ( желток, глицерин)| и антиоксидант (токоферилацетат). Такой состав дает возможность сохран ть сперму в течение нескольких мес цев. Однако известна I среда недостаточна , эффективна. Известна также среда следующего состава: сахароза - 8 г; глюкоза 0 ,6 г; зтилен иаминтетрацетат - 0,8г; трис-оксимётиламинометан - 0,28 г; глицерин динамитный - 4 мл; стрептоцид бе.пый растворимый - 0,2 г; мономицин - 30 тыс, ед.; бутокситолуол БОТ) - 20 мл; вода дистиллированна до 100 мл 2. Кроме того, в состав этой среды введеныбактериологические средства (стрептоцид и мономицин), в качестве оксиданта используетс бутокситолуол (БОТ), Этилендиаминтетраацетат ввод т в среду дл понижени содержани в сперме кальци и магни , избыто к которых усиливает аглютинацию спермиев. Этилендиаминтетрацетат также тормозит активность ферментов и понижает обмен веществ в сперме, способству лучшей выживаемости спермиев . Введение названных компонентов в состав среды дает возможность сохран ть сперму в течение нескольких лет оThe invention relates to the field of breeding and can be used for long-term storage of sperm for the rational and long-term use of poultry producing rams. The use of artificial insemination in sheep breeding contributes to a more intensive use of better-performing rams that are proven in the quality of the offspring quality improvement livestock. Prolonged preservation of sperm das is an opportunity to make fuller use of improver manufacturers, especially in the conditions of state stations. The known method of deep freezing of semen of sheep 1, To dilute the semen, use the medium of the following composition: distilled water - 50 ml; glucose, 4 g; dynamite glycerin - 2 ml; tocopherylacetate 10% in the form of an oil solution of vitamin E) 1 g-w chicken egg yolk - 10 ml. The composition of this medium is the entry of a nutritional substance (glucose), substances that have a protective effect with a sharp decrease in temperature (yolk, glycerin) | and antioxidant (tocopherylacetate). Such a formulation makes it possible to preserve semen for several months. However, the known I environment is insufficient, effective. Also known medium of the following composition: sucrose - 8 g; glucose 0, 6 g; Ztilen yamintetracetate - 0.8 g; Tris-hydroxymethylaminomethane - 0.28 g; dynamite glycerin - 4 ml; streptotsid be.py soluble - 0.2 g; monomitsin - 30 thousand units; butoxytoluene BOT) - 20 ml; the water is distilled to 100 ml 2. In addition, bacteriological agents (streptocid and monomitsin) are introduced into this medium, butoxytoluene (BOT) is used as an oxidant, Ethylenediaminetetraacetate is introduced into the medium to reduce calcium and magnesium in semen, to which excess agglutination is enhanced sperm Ethylene diamine tetraacetate also inhibits enzyme activity and lowers semen metabolism, contributing to better sperm survival. The introduction of these components into the medium makes it possible to preserve semen for several years.

Широкое использование этого состава ограничено труднодоступностью и дороговизной отдельных компонентов этого состава (трис-оксиметиламинометан ,бутокситалуол),а используемый при этом активный антибиотик {мономигщн ЗО тый. ед) угнетает активность спермы и ухудшает переживаемость.The widespread use of this composition is limited by the inaccessibility and high cost of individual components of this composition (tris-oxymethylaminomethane, butoxytalool), and the active antibiotic used during this process is monotonous. unit) inhibits sperm activity and worsens survival.

Цель изобретени - .сохранение высокой биологической активности спермиев . :.. The purpose of the invention is the preservation of high biological activity of sperm. : ..

Дл достижени этого в среду, содержащую сахарозу, глицерин, этилендиаминтетрацетат , желток куриного йца, антиоксидант и бактериостатическое средство, ввод т калий фосфорнокислый однозамещенный, а в качестве бактериостатического средства используют более м гкие антибиотики левомицетин и полимиксин. Калий фосфорнокислый ввод т в среду дл стабилизации содержани АТФ (аденозинтрифосфорной кислоты) в сперми х и увеличени активности, переживаемости и оплодотвор емости. Глюкозу в предлагаемой среде полностью замен ют сахарозой и количество ее (дла снижени гипотонического действи глицерина) увеличивают до 10%.To achieve this, a medium containing sucrose, glycerin, ethylenediaminetetraacetate, chicken egg yolk, an antioxidant and a bacteriostatic agent is added, monosubstituted potassium phosphate is added, and milder antibiotics levomycetin and polymyxin are used as bacteriostatic agents. Potassium phosphate is introduced into the medium to stabilize the content of ATP (adenosine triphosphate) in the sperm cells and to increase activity, survival rate and fertility. The glucose in the proposed medium is completely replaced by sucrose and its amount (to reduce the hypotonic effect of glycerol) is increased to 10%.

Состав предлагаемой синтетической антиоксидантной среды следуквдий: вода дистиллированна - 45-55 мл; сахароза 4-6 г; натриева соль этилендиаминтетраацетата - 0,04-0,4 г; ка™ ЛИЙ фосфорнокислый однозамеиенный 0 ,04-0,20 rj глицерин - 2-3 мл; желток куриного йца - 10-15 мл; токоферилацетат 10%-ный (масл ный раствор витамина Б) - 1-2 мл; левомицетин - 13-25 тыс. ед; полимиксин 13-25 тыс.ед.The composition of the proposed synthetic antioxidant environment is the following: distilled water - 45-55 ml; sucrose 4-6 g; ethylene diamine tetraacetate sodium salt - 0.04-0.4 g; ka ™ LIU single-purpose phosphoric acid 0, 04-0,20 rj glycerin - 2-3 ml; chicken egg yolk - 10-15 ml; tocopheryl acetate 10% (oil solution of vitamin B) - 1-2 ml; Levomycetin - 13-25 thousand units; polymyxin 13-25 thousand units

Пример. Компоненты синтетических сред отвешивают на аналитических весах Чашку весов перед взвешиванием реактивов протирают спиртовым тактовом. Воду, используемую дл приготовлени среды, предварительно кип т т дл удалени растворенного кислорода, а затем остужают до 4045°С . В 100 мл подготовленной таким образом воды раствор ют 25С-500 тыс, ед. леэомицетина и такое же количество прлимиксина. После полного растворени антибиотиков берут 50 мл этого раствора и в него поочередно всыпают 5 г сахарозы, 40 мг натриевой соли этилендиаминтетрацетата и 50 мг кали фосфорнокислого однозгилещенного . Каждый раз после добавлени компонента колбу с раствором покачивают до полного растворени всех компонентов . Затем в среду добавл ют 10 мл , елтка куриного йца рко-оранжевой скраски, предварительно размешав его в 1 м, раствора токоферилацетата, ЯЯца перед использованием тщательноExample. Components of synthetic media are weighed on an analytical balance. Weighing the scale before weighing the reagents is wiped with an alcohol clock. The water used to prepare the medium is pre-boiled to remove dissolved oxygen, and then cooled to 4045 ° C. In 100 ml of water prepared in this way, 25C-500 thousand units are dissolved. leomycetin and the same amount of prlimixin. After the antibiotics are completely dissolved, 50 ml of this solution is taken and 5 g of sucrose, 40 mg of ethylenediaminetetraacetate sodium salt and 50 mg of potassium phosphate monohydrated are alternately poured into it. Each time after adding the component, the flask with the solution is rotated until all the components are completely dissolved. Then, 10 ml of a bright-orange chicken egg fir-tree are added to the medium, pre-mixed in 1 m of tocopheryl acetate and Egg solution before use.

моют, протирают спиртовым тампоном, после чего раскалывают пополам, сливают белок в стаканчик, а желток осторожно перекладывают на стерильный листок фильтровальной бумаги. Лучше использовать стерильные фильтры диаметром 9 см. Желток внос т в среду, тщательно перемешивают, добавл ют глицерин, после чего среда готова дл разбавлени спермы. Среду обычно готов т до получени семени и, до употреблени хран т в специальных вод ных ваннах или термостате при 3540°С . Среда должна быть использована в течэние 1-2 ч с момента ее приготовлени .wash, wipe with an alcohol swab, then split in half, pour the protein into a cup, and carefully transfer the yolk to a sterile piece of filter paper. It is better to use sterile filters with a diameter of 9 cm. The yolk is introduced into the medium, mixed thoroughly, glycerol is added, after which the medium is ready for dilution of the sperm. The medium is usually prepared prior to seed production and, before use, stored in special water baths or a thermostat at 3540 ° C. The medium should be used within 1-2 hours from the moment of its preparation.

Министерство сельского хоз йства. СССР провело государственные испытани пригодности замороженной спермы, приготовленной на предлагаемой среде дл искусственного осеменени овец. Проведенные испытани показали,что предложенна среда обеспечивает высокую активность спермнев после первичного осеменени (58%, колебание 32-63%) . Оплодотвор емость овец по гнению составила в среднем 48,8% (колебание 42,6-54,8%). На 100 окотившихс маток получено по 137 гн т.Ministry of Agriculture. The USSR conducted state tests on the suitability of frozen semen prepared on the proposed environment for artificial insemination of sheep. Conducted tests showed that the proposed medium provides high activity of the sperm after primary insemination (58%, a fluctuation of 32-63%). The fertility of sheep by rotting averaged 48.8% (fluctuation 42.6-54.8%). Per 100 harvested queens, 137 were harvested.

Синтетическа среда по результатам .проведенных испытаний оказалась пригодной дл замораживани спермы баранов всех пород, разводимых в Казахстане .According to the results of the tests, the synthetic medium proved to be suitable for freezing the semen of rams of all breeds bred in Kazakhstan.

Научно-технический совет Министерства сельского хоз йства СССР рекомендовал способ низкотемпературного замораживани и длительного хранени спермы баранов с использованием синт етической антиоксида тной бактериологической среды дл широких производственных испытаний в 1978-1980 гг на госплемстанци х, племпредпри ти х и на основных пунктах искусственного осеменени овцеводческих хоз йств РСФСР, Украинской ССР, Узбекской ССР, Казахской ССР и Киргизской ССР.The Scientific and Technical Council of the USSR Ministry of Agriculture recommended a method of low-temperature freezing and long-term storage of sheep sperm using synthetic antioxidant bacteriological environment for extensive production tests in 1978-1980 at state plants, breeding enterprises and at main points of artificial insemination of sheep-breeding farms The RSFSR, the Ukrainian SSR, the Uzbek SSR, the Kazakh SSR and the Kirghiz SSR.

Claims

Invention Formula

Synthetic medium for freezing and storing barium semen, including water, sucrose, sodium ethylenediaminetetraadetate, glycerin, egg yolk and tocopherferic acetate, is different in that, in order to preserve high biological activity of sperm, the medium additionally contains one substitute. and polymyxin in the following ratio of components: sbisaroza 4-6 g; ethylene diamine tetraacetate sodium salt - 0.04-0.4 g; glycerin 2.0-3.0 4d; a yolkkurinsky egg of 10-15 ml; 10% solution of tocopheryl acetate - 1-2 ml; potassium phosphate monosubstituted - 0.04-0.20 g; Levomycetin - 13-25 thousand units polymyxin - 13-25 thousand units; water - 45-55 ml. Sources of information taken into account in the examination5 1. Kasimov K.T., Ashimov g. Oy, evodstvo, 1975, 8, p. 9.

2. Ostashko F.I. Deep freezing and long-term storage criepf. "J manufacturers. - Kiev. Harvest, J978, p. 183.