SU675070A1

SU675070A1 - Method of obtaining cormogrisin

Info

Publication number: SU675070A1
Application number: SU762423818A
Authority: SU
Inventors: Анна Михайловна Макухина; Елена Борисовна Кругляк; Павел Михайлович Самойлов; Раиса Дмитриевна Перепелкина; Ольга Алексеевна Гаврилова; Людмила Алексеевна Лямина; Юрий Дмитриевич Колыганов; Галина Стефановна Доронина
Priority date: 1976-11-19
Filing date: 1976-11-19
Publication date: 1979-07-25

Description

Изобретение относитс к микробиол гической промышленности, в частности к способу получени препарата кормогризинсь действующим началом которого вл етс антибиотик стрептотрициновой группы - гризин. в состав различных стрептотрицино вых антибиотиков вход т компоненты .F, Е, D, С, В, содержащие соответственно .1, 2, 3, 4, 5 остатков -лиЗина . Антибиотик гризин состоит, в основном, из компонентов F и D. Известен способ получени препара та кормогризина 1. Способ заключаетс в том, что культуру продуцента Act.(t is8US выращивают на качалке в колбах с питательной средой, содержа щей кукурузную муку,крахмал,сернокис лый , хлористый натрий, фосфорнокислый калий и мел. Выращенный посевной материал перенос т в фермен tepы со стерильной питательной средой того же состава. Ферментаци длитс 48-55 ч,после чего культураль ную жидкость, содержащую антибиотик гризин, подкисл ют до рН 5,0-5,5 и подвергают упариванию. Упаренна куль туральна жидкостьпоступает на распылительную суишлку и далее высушенный препарат стандартизуют до содержани 5, 10, 40 г чистого антибиотика в 1 кг препарата. Однако этот способ не обеспечивает получени препарата с посто нным составом антибиотика гризина. Кроме компонентов F, Е и D в антибиотике может содержатьс в виде примесей различное количество компонентов В и С, обладающих значительно большей токсичностью,, что снижает качество препарата. Количество указанных примесей в промышленных препаратах антибиотика может достигать 45-50% от общего содержани антибиотика в препарате. Кроме того, упаривание культуральной жидкости при указанных значени х рН приводит к значительньм потер м антибиотика. Цель изобретени - разработка способа , обеспечивающего возможность получени кормогризина с повышенным выходом Т ,Е и D - компонетов, т.е. содержащего минимсшьное количество примесей С и В. Эта цель достигаетс тем, что в способе, включакицем выращивание продуцента кормогризина Лс1. nseu. в глубинных услови х на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал и минеральные соли с послезКуйШм поДкислением, упегриванием и высуимван ем культуральной жидкости 8 питательную среду дл культивировани продуцента Лс. riseus внос т энантовую кислоту дл разобщени процесса окислительного фосфорилиро вани в концентрации 0,05-0,2%, при этом культурсьльнукз жидкрст перед уйарйванием подкисл ют до рН 3,03 ,5. ... . П р. и м е р. Дл выращивани про луцёйта гриэина используют среду сл дующего состава, %: Кук руэна мука Крахмал Сернокис.1тый ам0 ,5-0,6 моний Фосфорнокислый калий Поварена соль Кел Вода водопроводДо 100,0 на Дл приготовлени среды {1 л) дл вьгргидйванн посевного материала SCO мл водопроводной воды нагревают до , засыпают 20 г кукурузной муки и подогревают до ЭОс. Разваривают муку в течение 5 мин; в среду внос ту л Jr D i С T-ti fЛf. - ilrfi f ЛЛ л- . 5-6 г (NH)2.SO, 300 мг 5 CaCOj, 15 г крахмала, взмученногс холодной воде, который внос т в последнюю очередь. Полученную таким образом среду охлаждают и доливают водой до 1000 мл;рЙ 6,3-7,3 довод концентрированной кислотой (НС1). Приготовленную среду оазливают в колбы емкостью 750 мл по 100 мл и ....стерилизуют автоклазированием при 1,2 ати в течение 40 мин.Стерильнос -среды опередел ют путем выдерживан ее в течение 24 ч при 37°С и анали Вли ние знантрвой кислоты на образование основных компонентов гризина (F, Е и D) 04 за высевов на плотные питательные среды общеприн тым методом. Кусочек картофельного агара с культурой Act., шт 70 (из пробирки ) стерильно внос т в колбы со средой . Засе нные колбы став т на качалку (240 об/мин) и выращивают при температуре 27 i в течение 36 ч. Выращенный в колбах посевной материал передают на засев питательной среды (приведенного состава) в посевной аппарат , где культура выращиваетс при температуре 27 ± 1°С в течение 1820 ч. . Готовый посевной материал из посевных аппаратов направл ют в ферментеры с ферментоционной средой того же состава, что и среда в колбах. Кроме того, в ферментеры внос т стерильно энсхнтовую кислоту в концентраци х 0,05-0,1%. Процесс ферментации идет при температуре 27 ± в течение 48-55 ч. Полученную культуральную жидкость подкисл ют до рН 3,03 ,5, упаривают температура 45-50°С в течение 1 ч и затем высушивают на распылительной сушилке ( Т 140± , ,). Дл анализа кдмпонетного состава гриэана провод т выделение гризана из культуральной жидкости общеприн тым методом на смоле КБ-4Н-2, Компонентный состав гризина определ ют с поглощью аналитической хромотографии на КМ-сефадексе Q 25 в градиенте NaCI 0,6-1,2 М с последующим спектрофотометрированием элементов при d 216 мм. Результаты осуществлени способа представлены в таблице (содержание суммы компонентов F, Е и D в % ко Bceix y количеству антибиотиков) . The invention relates to the microbiological industry, in particular, to a method for producing a feed preparation, the active principle of which is the antibiotic of the streptothricin group, grisin. Components of various streptothricin antibiotics include the components .F, E, D, C, and B containing, respectively, .1, 2, 3, 4, 5 residues of -LiZin. The antibiotic grisin consists mainly of components F and D. A method for obtaining a preparation of feed horizin 1 is known. The method consists in the culture of the producer Act. (T is8US is grown on a rocking chair in flasks with a nutrient medium containing corn flour, starch, sulfuric acid, sodium chloride, potassium phosphate and chalk. Grown seed is transferred to a fermenter with a sterile nutrient medium of the same composition. Fermentation takes 48-55 hours, after which the culture liquid containing antibiotic grrizin is acidified to pH 5, 0-5.5 and subject evaporated. The stripped culture liquid goes to the spray sisilku and then the dried preparation is standardized to a content of 5, 10, 40 g of pure antibiotic per 1 kg of the preparation. However, this method does not ensure the preparation of a preparation with a constant composition of the antibiotic grizin. Except for components F, E and D in antibiotics, different amounts of components B and C, which are significantly more toxic, may be contained in the form of impurities, which reduces the quality of the preparation. The amount of these impurities in industrial preparations of the antibiotic can reach 45-50% of the total content of the antibiotic in the preparation. In addition, evaporation of the culture fluid at the indicated pH values leads to a significant loss of antibiotic. The purpose of the invention is to develop a method that makes it possible to obtain a feed hormone with an increased yield of T, E and D components, i.e. containing a minimal amount of impurities C and B. This goal is achieved by the fact that in the method, including the cultivation of the producer, kormogrizin Ls1. nseu. under deep conditions on a nutrient medium containing corn flour, starch and mineral salts with after-acidification, acidification, and drying of culture liquid 8 nutrient medium for cultivating the producer Ls. Riseus enanthic acid is introduced to dissociate the process of oxidative phosphorylation at a concentration of 0.05-0.2%, while the liquid culture liquid is acidified to pH 3.03, 5 before digestion. ... Etc. and me. For the cultivation of laney griene, the medium of the following composition is used,%: Kook ruin flour Starch Sulfuricum 1th am0, 5-0.6 monium Potassium phosphate Cooked salt Kel Water water supply up to 100.0 for the preparation of medium (1 l) for srgidy of seed SCO ml of tap water is heated to, poured 20 g of corn flour and heated to EOS. Cook the flour for 5 minutes; Wednesday wednesday Jr D i С T-ti fЛf. - ilrfi f LL l-. 5-6 g (NH) 2.SO, 300 mg 5 CaCOj, 15 g starch, stirred up in cold water, which is added last. The medium thus obtained is cooled and made up to 1000 ml with water; pJ 6.3-7.3 is added with concentrated acid (HC1). The prepared medium is oasalized into 750 ml flasks of 100 ml and .... sterilized by autoclaving at 1.2 atm for 40 min. The sterile media are determined by incubating it for 24 hours at 37 ° C and analyzing the effect of known acid for the formation of the main components of grisin (F, E and D) 04 for seeding on solid nutrient media by the conventional method. A piece of potato agar with culture Act., Pieces 70 (from a test tube) is sterilely introduced into flasks with medium. Sown flasks are placed on a rocking chair (240 rpm) and grown at a temperature of 27 i for 36 hours. Inoculum grown in flasks is transferred to sowing of a nutrient medium (of reduced composition) in a sowing apparatus, where the culture is grown at a temperature of 27 ± 1 ° C for 1820 h. The finished seed from the seed machines is sent to the fermenters with the enzymatic medium of the same composition as the medium in the flasks. In addition, sterile enzyme acid is added to the fermenters at concentrations of 0.05-0.1%. The fermentation process takes place at a temperature of 27 ± for 48–55 h. The obtained culture liquid is acidified to pH 3.03, 5, the temperature is evaporated at 45–50 ° C for 1 h and then dried in a spray dryer (T 140 ±, ). To analyze the griena composition, the grisan is separated from the culture fluid using the CB-4H-2 resin by the conventional method. subsequent spectrophotometry of elements at d 216 mm. The results of the implementation of the method are presented in the table (the sum of the components F, E and D in% of the Bceix y amount of antibiotics).

Использование предлагаер«эго спосо6а в промышленности позволит получить более высококачественный препарат кормогризина. Кроме того, изоЛретение дает возможность на одних и тех же мощност х получать препарата на 20-25% больше.The use of the proposal “ego method 6a in the industry will allow to obtain a higher-quality drug kormogrizina. In addition, the ISOLING makes it possible to obtain the drug by 20-25% more on the same powers.

Формула Изобретени Formula of Invention

Способ получени кормогризина, включающий выращивание продуцента его Act. ftfiua в глубинных услови х на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал и минеральные солиThe method of producing forage hormone, including the cultivation of its producer Act. deep-sea ftfiua on nutrient medium containing cornmeal, starch and mineral salts

- 5675070в .- 5675070в.

с последующим подкислением, упариванй-0,05-0,2%,при этом культуральнук.with subsequent acidification, evaporated-0.05-0.2%, while the culture.

ем и высушиьакием культуральной жид-жидкость перед упариванием подкисл костк , отличающийс тем,ют до рН 3,0-3,5. что, с целью повьЕиенн содержани вand evacuating the culture liquid-liquid before evaporation of the acidic acid, characterized in that it is pH 3.0-3.5. that in order to keep the content

кормогриэине F, Е и D - компонентов.Источники информации, прин тые воF, E, and D components of the feed hormine. Sources of information taken in

при выращивании продуцента в питатель-внимание при экспертизе ную среду внос т энантовута кислоту 51. Решетов П.Д. Получение и свойстдл разобщени процесса окислительно-ва стрептотрициновых антибиотиков,when growing the producer, enanthic acid is introduced into the feeder-attention during the examination of the environment 51. PD Reshetov. Preparation and property of dissociation of the oxidative process of streptothricin antibiotics,

го фосфорилировани в концентрацииМ., 1964, (автореферат диссертещии) .th phosphorylation in concentration M., 1964, (dissertation dissertation).