Дл получени больших количеств ДНК обьйчно изготавливают молоки высокополовозрелых рыб, добываемых на рыборазводных заводах, на местах нерестилищ,- или сзлециапьно снар женной научной заготовительной экспедицией . Собранные молоки или немедленно используют дл выделени из ни препа:ратов ДН1 или подвергают глубокому замораживанию в специальных холодильниках до -20, . с после дующим хранением в диапазоне температур от О до . Недостаточно глубокое охлаждение может привести к повреждению ДНК имеющимис в молоках ферменТс1МИ-нуклеазами. Согласно известному способу дезоксирйбонуклеийовую кислоту получаю из сперш рыб путем ее гомогенизаци солевой экстракции дезоксирибонукле протеиДй, диссоциации его на ДНК и белок и последующей детергентной депротенизации. Например, берут свежие зрелые молоки сельди 170 см извлекают дра сперматозоидов путем плазмолиза спермы лед ной дистиллиро ванной водой в течение 20 мин. Затем суспензию дер центрифугируют в течение 15 мин при ЗООО -об/МйН на холоду. Образовавмийс рызошй белый осадок суспензируют в 500 м воды и центрифугируют при 3000 об/мин. Осадок дер суспензируют в 0,005%ном растворе лимонной кислоты, снова центрифугируют. Осадок, промытый два разаводой, высушивают смесью спирта и эфира. Получ ейный осадйк дер суспензируют в 150 ct воды к го могенизируют в250 мл 10%-ного раствора хлористого натри , после чего в зку массу разбавл ют в 1100 мл .раствора NaCi . После 12-час6Вого охлаждени вйзкую ДНК смешивают с 9 объемами воды. Образовавшийс бсадок ДНК в виде длинных ните несколько раз промыВс№)Т водой, спир том и высушивают спирт эфиром. После этого из ДНП выдел ют ДНК. этого берут 40 мл дезоксирибонуклеопротами на в 10%-ном растворе NaOf, перенасыщают .хлористым натрием и оставл ю на 10 дней в холодильнике дЛ отдеЛ ни белка от ДНК. Затем смесь центри фугируют,осадок,белковотдел ют, а полученный супернатант (дл дальней шей Ьчи:б ки от белков) пропускают через слой по||бшкёоёра:зной целлйлозы (или через бум ажнай фильтр). Нуклеиновые кислоты осаждают несколь кими o TseMaMH 9б1-ного спирта. ДНК высуишвают в спирт-эфире и над Pj О при 10о С в вакууме 1. Целью изобретени вл етс упрощение способа получени целевого продукта и расширение сырьевой базы Поставленна цель достигаетс тем,чт в качестве сырь используют гонады 111-У стсщий половой зрелости рыб. консервированные в концентрированном этиловом спирте без использовани минусовых температур. Описываетс способ получени дезоксирибонуклеиновой кислоты, заключающийс в том, что гонады 111-У стадий половой зрелости рыб, консервированные в концентрированном этйлоJBOM спирте, гомогенизируют, гомогенизированную ткань обрабатывают протеолитическим ферментом, обычно трипсином или проназой, осуществл ют солевую экстракцию дезоксирибонуклеопротеида , диссоциацию его на ДНК и белок и последующую детергентную депротенизацию . Целевой продукт вьедел ют известными приемами. При м е р . Берут 200 г консервированных в этаноле гонадрыб(Ш-У стадий половой зрелости), измельчают на гомогенизаторе в 1 л 0,15 М раствора хлористого натри , содержшцего 0,05 М раствора цитрата натри и центрифугируют . Этот процесс промывки ведут до Тех пор, пока надосадочный раствор не дает осадок при добавлении к нему 5% триклоруксусной кислоты (3-4 раза). После этого осадок суспензируют в 400 мл раствора про еолитическога фермента, например трипсина или проназы (50 микрограмм В мй, 20 мг в 400 мл), инкубируют в течение 18 ч при . Лизированные клетки обрабатывают 0,5% додецилсульфата {который инактивирует прот д тнтический фермент и денатури ует белки ДНП, частично его дёпротейнизиру ). в зкую массу , содержащую ДНЛ, суспензируют в )2 л раствора) содержащего 16,16 г хлористого натри .(0,15 М) и 71,4 г цитрата натри (0,05 м), далее добавл ют 1 л раствора, содержащего 8,8 г хлористого натри , 35,5 г Натрий и 180 г парааминосалициловой кислоты (ПАСКа), перемешивают и к полученной смеси приливают 3 л водонасыщенного фенола, рН 8,3 (1,98 л свежеперегнанного фенола 0,79 л дистиллированной воды, 198 МП 1 н КОН). После встр хивани в течение 1 ч смесь центрифугируют при 2500 об/мин в течение 30 миН. К надосадочной жидкости добавл 1рт сухой хло /истый натрий до конечной концентраций 3 М (173 г на 1 л раствора),перемешивают до растворени соли и приливают равный объем смеси хлороформизоамиловый спирт (24:1) , встр хивают в течение 4 5 мин и центрифугируют в течение 20 мин при 2500 об/мин. Надосадочную жидкость (раствор ДНК) вливают в равный объем концентрированного этанола . Нити ДНК выпадают в осадок,,их собирают., центрифугированием, промы-. вают последовательно следуйщими.растворами: 3 М раствор хлористого натри + этанол (2г1), этанол + эфир (3:1). и эфир, нити ДНК подсушивают в течение 3-4 ч в термостате при ,а затем в вакууме-эксикаторе, с CaCEj. Дл nojjyHeHHH целевого продукта (ДНК) повышенной частоты ДНК, полученную из гонад, обрабатьшают ферментом РНК-азой (15 мкг/мп), предварительно прокип ченным дл разрушени примесей ДНК-азы, а затем протеолитическим ферментом трипсином (100 мкг на 1 л раствора). РНКаза удал ет примесь РНК в препаратах ДНК, а трипсин переваривает РНК-азу и оставшиес в ДНК примеси белков. От продуктов /ферментативного гид ролиза РНК освобождают двухкратным переосаждением в изопропиловом спир те . После такой обработки ДНК неско ко раз перераствор ют в стандартном солевом растворе (0,15 М ЫаСЕ+ +0,015 М цитрат натри , рН 7,0), провод т еще одну-две депротеинизации с хлороформом, после чего осаждают добавлением двух объемов конце трированного этанола, промывают нес колько раз 70%-HbW этанолом, эфиром и сохран ют в 70%-нрм этаноле при О или в BWcymeiHHpM виде в вакуумн эксикатор..ё над CaCiEg, или в стайдар ном солевом растворе в зависимости от Дальвейшегр;использовани . Ниже йриведены данные о свойства и характеристиках лрепаратрв. ДНК, полученных описзннь 1 методом из кон сервиройанных в этаноле гонад рыб, например горбуши, хран щихс в 96%ном этаноле в течение 1 ч. Молекул рный вес, млн.далЫоиов8-10 Гиперхромный эффект,%37-40 Содержание белка,% Около 1 Примеси полисахаридов Нет Примеси РНКНет Примеси денатурированной Нет Пример деградированных продуктов ДНК, РНК . Нет 60 ESo 2,8 Es«,Eae.,If 92 А /E|2J 1,3 Е/р/ . 6600 Фосфор Температура плавлени ,С 86,8 Содержание фенола Йет Аналогична характеристика препаратов ДНК, полученных из карпа, камбалы и некоторых других рыб, з-аконсервированных в этаноле. формула изобретени 1.Способ получени дезоксирибонуклеиновой кислоты из спермы рыб путем ее гомогениза.ции, солевой экстракции дезоксирибрнуклеопротеида, диссоциаций его на ДНК и белок и последующей дётергбитной депрот«н«зации1 , о т л и ч |i ю ад и и с там, что, с целью Упрсаденй процесса и расширени сырьевой базы, в качеС-ммб сырь используют гЪнадыШ-У стадий половой зрелости рыб, консервед с ааные в концентрированном этилс«ет 1 cn ipте , а гомогенизированную ткань Обрабатывают , прЬтеолитйчёским ферми«тс «. 2.Способ Г1О п. 1, о т л и ч а ю,щ и и с тем, что в качестве про-теолитических ферментов используют трипсин или проназу. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1.FeEix K.J isher H.,Kr-ekeBs А, Mohp К. Nцceeвpгotamin ,Hoppe Seiter ztachr. phisloL Ohemi., 1951, В 289, 224-234.For the production of large quantities of DNA, milks of highly mature fish harvested from fish hatcheries, at the spawning grounds, or produced with scientific harvesting expedition, are routinely manufactured. The collected milt is either used immediately for separation from either of the preparations of DN1 or is subjected to deep freezing in special refrigerators up to -20,. with after blowing storage in the temperature range from O to. Insufficiently deep cooling can lead to DNA damage by enzyme Tc1MI-nucleases in milk. According to a known method of deoxyribonucleic acid, I get from the fish flippers by homogenizing the salt extraction of deoxyribonucleus protei, dissociating it into DNA and protein, and subsequent detergent deprotenization. For example, fresh, mature herring milks of 170 cm are taken and the sperm nuclei are extracted by plasmolysis of sperm with ice distilled water for 20 minutes. Then the suspension is centrifuged for 15 min at ZOOO-ob / MN in the cold. Formation of white trot sediment suspended in 500 m of water and centrifuged at 3000 rpm. The pellet is suspended in a 0.005% citric acid solution, centrifuged again. The precipitate, washed with water, is dried with a mixture of alcohol and ether. The resulting precipitate is suspended in 150 ct of water and homogenized in 250 ml of 10% sodium chloride solution, after which the viscous mass is diluted in 1100 ml of NaCi solution. After 12 hours of cooling, the high DNA is mixed with 9 volumes of water. The resulting DNA in the form of long threads was washed several times with water, alcohol, and dried in alcohol with ether. Thereafter, DNA is isolated from the DNP. This is taken with 40 ml of deoxyribonucleoprotein in 10% NaOf solution, supersaturated with sodium chloride and left for 10 days in the refrigerator for removing any protein from the DNA. Then, the mixture is centrifuged, the precipitate is protein-separated, and the resulting supernatant (for further neck: blood from proteins) is passed through a layer through a hot slug (or through a filter). Nucleic acids are precipitated with several o TseMaMH 9b1 alcohols. DNA is dried in alcohol-ether and above Pj O at 10 ° C in vacuum 1. The aim of the invention is to simplify the method of obtaining the target product and expand the raw material base. The goal is achieved by using gonads 111-U and fish sexual maturity as raw materials. canned in concentrated ethyl alcohol without using freezing temperatures. Disclosed is a process for preparing deoxyribonucleic acid comprising that gonads 111-Y stages of puberty fish, preserved in concentrated etyloJBOM alcohol, homogenized, homogenized tissue was treated with proteolytic enzyme, usually trypsin or pronase, is carried out salt extraction deoxyribonucleoproteins, dissociation of its DNA and protein and subsequent detergent deprotenization. The target product is carried out by known methods. An example. Take 200 g of gonadryb preserved in ethanol (W-U stages of puberty), crushed on a homogenizer in 1 liter of a 0.15 M solution of sodium chloride, containing 0.05 M solution of sodium citrate and centrifuged. This washing process is carried out until the supernatant solution precipitates by adding 5% tricloracetic acid (3-4 times) to it. After that, the precipitate is suspended in 400 ml of a solution of an eolitic enzyme, for example, trypsin or pronase (50 mcg V mi, 20 mg in 400 ml), and incubated for 18 h at. Lysed cells are treated with 0.5% dodecyl sulfate {which inactivates the protease enzyme and denaturized DNP proteins, partly of its deproteinizing). the viscous mass containing DNL is suspended in) 2 liters of a solution containing 16.16 g of sodium chloride (0.15 M) and 71.4 g of sodium citrate (0.05 m), then 1 l of a solution containing 8.8 g of sodium chloride, 35.5 g of sodium and 180 g of para-aminosalicylic acid (PASK) are mixed and 3 liters of water-saturated phenol, pH 8.3 (1.98 liters of freshly distilled phenol, 0.79 liters of distilled water, are added to the mixture, 198 MP 1 n KOH). After shaking for 1 h, the mixture was centrifuged at 2500 rpm for 30 min. To the supernatant, add 1 pp of dry chlorate / sodium to a final concentration of 3 M (173 g per 1 l of solution), mix until the salt is dissolved, and an equal volume of chloroformisoamyl alcohol (24: 1) is poured, shaken for 4 5 min and centrifuged for 20 min at 2500 rpm The supernatant (DNA solution) is poured into an equal volume of concentrated ethanol. DNA strands precipitate, they are collected., Centrifuged, washed. consistently follow the following solutions: 3 M solution of sodium chloride + ethanol (2g1), ethanol + ether (3: 1). and ether, DNA strands are dried for 3-4 hours in a thermostat at, and then in a vacuum-desiccator, with CaCEj. For the nojjyHeHHH target product (DNA), the increased frequency of DNA obtained from the gonads is treated with the enzyme RNAase (15 µg / mp), pre-boiled to destroy DNA-impurity impurities, and then with the proteolytic enzyme trypsin (100 µg per 1 liter of solution) . RNase removes the RNA impurity in DNA preparations, and trypsin digests RNA-ase and protein impurities remaining in the DNA. RNA is freed from products / enzymatic hydrolysis by double reprecipitation in isopropyl alcohol. After this treatment, the DNA is repeatedly redissolved in standard saline (0.15 M NaA + 2 + 0.015 M sodium citrate, pH 7.0), one or two more deproteinization is performed with chloroform, and then precipitated by adding two volumes of the ethanol, washed several times with 70% -HbW ethanol, ether, and stored in 70% ethanol at 0 or in BWcymeiHHPM form in a vacuum desiccator. Below are data on the properties and characteristics of drugs. Descriptive DNA obtained using the method of gonadal fish preserved in ethanol, for example, pink salmon, stored in 96% ethanol for 1 h. Molecular weight, ppm 1 Polysaccharide impurities No Impurities RNNA No Denatured impurities No Example of degraded DNA, RNA products. No 60 ESo 2.8 Es “, Eae., If 92 A / E | 2J 1.3 U / p /. 6600 Phosphorus. Melting point, C 86.8. Phenol content. Yet Similar characteristics of DNA preparations obtained from carp, flounder and some other fish, 3-canned in ethanol. claims 1. A method for obtaining deoxyribonucleic acid from fish sperm by homogenizing it, saline extraction of deoxyribrunucleoprotein, dissociating it into DNA and protein and subsequent destergbit deprot "n" ionization, about tl and h | i hell and with, that, with the purpose of the Upsaden process and the expansion of the raw material base, we use fish at the puberty stages of fish, preserved with aanes in concentrated ethyl matter 1 cn ipt, and homogenized fabric is processed with our own Fermi "ts". 2. Method G1O p. 1, about tl and h and h, y and with the fact that trypsin or pronase are used as pro-theolytic enzymes. Sources of information taken into account in the examination 1.FeEix K.J. isher H., Kr-ekeBs A, Mohp K. Ncecevrgrammin, Hoppe Seiter ztachr. phisloL Ohemi., 1951, B 289, 224-234.