Claims (2)
(54) РЕАКТИВ ДЛЯ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ БЕРЕМЕННОСТИ И СПОСОБ-ПРИГОТОВЛЕНИЯ РЕАКТИВА эритроциты:антисыворотка 2,5х10 причем это отнесение соответствует , например, количеству антисыво ротки, выраженному в сухом экстракте, от 6600до 7500 мкг. Титрование антисыворотки осуществл ют из эритроцитов, сенсибилизированных к ХГГ. Титр вл етс переменнь в каждом случае, именно и служит основанием дл осуществлени разбавлени . На пробирку испольэуют 0,2-0,4 мл суспензии и 3-6% эритроцитов, сенсибилиэированных к ХГГ, 0,3-0,6 мл раст вора антисыворотки. Буфер регулирует значение рН, моча имеет рН 5,8 с физиологическими изменени ми 5,2-6,4. Реакци ингибировани агглютинации происходит в наилучших услови х, если рН близок к нейтральному. Поэтому необходимо использовать буфер, чтобы рН было в пределах 6,5-7. Дл этого реактив должен содержать буфер с фосфатами натри и-кали в количествах, Первичный фосфат кали 0,072 Первичный фосфат натри 0,495 в моче кальций св зан с белками и не имеет никакого вли ни на реакцию, но небольшое количество свободных ионов кальци всегда присутствует, это количество быстро возрастает со старе нием мочи. Ионы кальци вызывают аггл тинацию эритроцитов.. Ес.ли моча имеет отрицательную реакцию (моча неберемен ной женщины не содержит ХГГ), результат останетс отрицательным, так как агглютинаци вл етс как результатом отсутстви ХГГ,- так и наличи ион кальци . Если моча имеет положительную реакцию, то не должно происходить агглютинации, так как имеетс наличие ХГГ, но будет иметь место агглютинаци вызванна ионами кальци , а реакци вместо отрицательной станет положительной , поэтому необходимо, удалить ионы KGLЛьци . Различные количественны анализы показали, что содержание ионо кальци может возрастать на необходи мое дл проверки количество мочи до 30 мкг и выше, в то врем как количе во 10 мкг способно помешать реакции. Дл реактив.а ионы кальци удал ют путем перевода их в комплексное соед нение с натриевой солью зтилендиамин тетраацетата (ЭДТА) (на 2 молекулы воды). Дл обеспечени надежности реакции, даже если моча не используе с в течение малого времени, натриевую соль этилендиаминитетраацетата подают в избытке. Реактив содержит натриевой соли этилендиаминтетраацетата 0,4 мг. Динатрийфосфат, монокалийфосфат и натриевую соль этилендиаминтетраацетата ввод т в виде раствора, количес во которого составл ет 0,1-0,2 мл. Реактив готов т путем помещени суспензии эритроцитов в изотонический солевой раствор в пробирке, в которой суспензи заморожена, затем в это количество эритроцитов ввод т замороженный буфер, который содержит замороженный этилендиаминтетраацетат, и поверх которого прибавл ют раствор антисыворотки , который также заморожен, после чего все лиофилизируют. Соединение буфер-этилендиаминтетраацетат раздел ет расположенные рдин над другим слои эритроцитов и сыворотки в цел х предотвращени преждевре-. манной реакции между эритроцитами и антисывороткой. Состав буфер- -ЭДТА вл етс изол тором обоих расположенных один над другим слоев эритроцитов и антисыворотки и три замороженных, расположенных таким образом один над другим сло не могут реагировать между собой из-за их замороженного состо ни , а лиофилиэаци осуществл ет переход твердых вещест в газообразное состо ние, при этом различные имеющиес реактивы не могут взаимодействовать между собой. Предел чувствительности предлагаемого реактива должен превышать 1500 межд. ед. УСН на 1 л исследуемой мочи. Предлагаемый реактив обладает высокой чувствительностью и предотвращает преждевраменную реакцию меж,цу эритроцитами и сывороткой. Формула изобретени 1. Реактив дл ранней диагностики беременности по наличию хорионгонадотропина в моче, содержащий лиофилизированные сенсибилизированные к хорионгонадотропину эритроциты, динатрий - фосфат, монокалийфосфат и антисыворотку к хорионгонадотропину, от л ичающийс тем, что, с целью повышени точности диагностики, он содержит дополнительно этилендиаминтет-. раацетат натри , причем компоненты пи«...„«„х держатс в следующих соотношени х. вес.ч. Лиофилизированные сенсибилизированные к хорионгонадотропину зритроциты 0,49-0,5 Динатрийфосфат Монокалийфосфат 0,07-0,075 Антисыворотка к хорионгонадотропину 6-8 Этилендиаминтет- раацетатнатри 0,3-0,5 (54) REACTIVE FOR EARLY DIAGNOSTIC PREGNANCY AND METHOD-PREPARATION REACTIVE erythrocytes: antisera 2.5x10 and this assignment corresponds, for example, to the amount of antisera, expressed in dry extract, from 6600 to 7500 μg. Titration of antisera is performed from erythrocytes sensitized to CHG. The titer is variable in each case, and it is the basis for the dilution. 0.2-0.4 ml of suspension and 3-6% of erythrocytes sensitized to CGG, 0.3-0.6 ml of antiserum solution are used per tube. The buffer regulates the pH value, urine has a pH of 5.8 with physiological changes of 5.2-6.4. The agglutination inhibition reaction occurs under the best conditions if the pH is close to neutral. Therefore, it is necessary to use a buffer so that the pH is between 6.5 and 7. For this, the reagent must contain a buffer with sodium and potassium phosphate in quantities, Primary potassium phosphate 0.072 Primary sodium phosphate 0.495 in urine calcium is bound to proteins and has no effect on the reaction, but a small amount of free calcium ions is always present, this amount increases rapidly with urine aging. Calcium ions cause erythrocyte agglutination. If the urine has a negative reaction (the urine of a non-pregnant woman does not contain CHG), the result will remain negative, since the agglutination results from the absence of CHG, as well as the presence of calcium ion. If the urine has a positive reaction, there should be no agglutination, since there is HGH, but there will be agglutination caused by calcium ions, and the reaction instead of the negative will become positive, therefore it is necessary to remove the KGLLT ions. Various quantitative analyzes have shown that the content of ionic calcium can increase by the amount of urine necessary for testing up to 30 µg and higher, while the amount of 10 µg can interfere with the reaction. For reactivity, calcium ions are removed by converting them to the complex with the sodium salt of methylenediamine tetraacetate (EDTA) (2 water molecules). To ensure a reliable reaction, even if the urine is not used for a short time, the sodium salt of ethylenediamine tetraacetate is supplied in excess. The reagent contains 0.4 mg sodium ethylenediaminetetraacetate. Disodium phosphate, monopotassium phosphate and sodium ethylene diamine tetraacetate are administered in the form of a solution, the amount of which is 0.1-0.2 ml. The reagent is prepared by placing a suspension of erythrocytes in an isotonic saline solution in a test tube in which the suspension is frozen, then frozen buffer, which contains frozen ethylene diamine tetraacetate, is added to this number of erythrocytes, and on top of which is added an antiserum solution, which is also frozen, after which all lyophilized . The compound buffer-ethylene diamine tetraacetate separates located rynds above other layers of erythrocytes and serum in order to prevent premature. manna reaction between red blood cells and antiserum. The composition of the buffer-EDTA is an insulator of both layers of erythrocytes and antisera arranged one above the other and three frozen layers so arranged one above the other cannot react with each other due to their frozen state, and lyophilization gaseous state, while the various reagents available cannot interact with each other. The limit of sensitivity of the proposed reagent should exceed 1500 int. units USN on 1 l of the studied urine The proposed reagent has a high sensitivity and prevents premature reaction between, red blood cells and serum. Claim 1. Reagent for early diagnosis of pregnancy by the presence of urinary choriogonadotropin, containing lyophilized red blood cells sensitized to choriogonadotropin, disodium phosphate, monopotassium phosphate and antiserum to choriogonadotropin, from a group of a target to get a target with a target to get a target for a target with a target for a target with a target for a target with a target for a target. . sodium raacetate, the components of pi "..." "" x being held in the following ratios. weight.h. Lyophilized chorionogonadotropin-sensitized spectrocytes 0.49-0.5 Disodium phosphate Monopotassium phosphate 0.07-0.075 Antiserum to chorionogonadotropin 6-8 Ethylene Diamine tetraacetate sodium 0.3-0.5
2. Способ приготовлени реактива по П.1 путем лиофилизации, о т л ичающийс тем, что, с целью2. The method of preparation of the reagent according to claim 1 by lyophilization, which is based on the fact that
предотвращени преждевременной реак-та и этилендиаминтетраацетат натри ,prevention of premature reaction and sodium ethylenediaminetetraacetate,
ции между эритроцитами и сывороткой,затем антисыворотка.between erythrocytes and serum, then antiserum.
лиофилизацию компонентов производ тИсточники информации, прин тые воlyophilization of components produced information sources taken during
послойно, 9 следующей последователь-.внимание при экспертизе:In layers, the following 9 follower. Attention in the examination:
ности: взвесь эритроцитов, затем раст-5 i. Acta endctfrino . 35, 261,e: suspension of erythrocytes, then growth-5 i. Acta endctfrino. 35, 261,
вор динатрийфосфата, монокалийфосфа-(1960 г).thief disodium phosphate, monokaliyfosfa- (1960).