SU548623A1 - Способ определени вирусных и бактериальных препаратов на поверхности субстрата - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к способам определени  остаточных количеств действующего начала отечественных корпускул рных биологических препаратов, примен емых дл  защиты растений, типа «Вирин-ЭКС, «Вирпн-ЭНШ, «Вирин-ГКБ, энтеробактери , дендробациллин , инсектин и другие.

Практическое применение в защите растений от вредителей вирусные и бактериальные препараты получили в последние 5-10 лет. Однако способы контрол  за остатками этих препаратов в насто щее врем  не отвечают предъ вл емым требовани м.

Известны способы определени  остаточных количеств вирусных препаратов, основанные па постаповке биопроб на восприимчивых личинках со смывами с растительных образцов или органических остатков и почвы, обработанных биопрепаратами, пли же исследовании смывов с субстрата бактериологическим путем 1,2.

Однако известные способы не обеспечивают точности определени  остаточных количеств биопрепаратов, так как в обоих случа х не достигаетс  полного сн ти  с поверхности субстрата биопрепарата в силу  влени  адгезии и широко распространенных у насекомых латентных форм вирусных заболеваний, а в случае изучени  бактериальных препаратов при использовании известных ппгобов невозможно контролировать состо ние основного их компонента - кристаллического эндотоксина, так как на питательных средах прорастают лишь споры.

Известен также способ определени  остаточных количеств биопрепаратов, включающий сн тие отпечатков с исследуемой поверхности субстрата, обработанной биопрепаратом путем нанесени  на поверхность субстрата липкой

ленты, с последующим окрашиванием ее красител ми и микроскопированием 3.

Однако известный способ не обеспечивает полного сн ти  компонентов препарата с псследуемой поверхности. Кроме того, известиые липкие ленты обладают собственной пптенсивной люминесценцией в сине-ульт 1афиолетовой части спектра, что псключает применение специфичных методов вы влени  действующего начала биопрепаратов.

Цель изобретени  - повыщение точности определени  остаточных количеств бактериальных и вирусных препаратов на поверхности субстрата. Это достигаетс  тем, что сн тие отпечатков

с поверхности субстрата, обработанной биопрепаратом , провод т путем нанесени  на субстрат 2-3%-ного раствора органического стекла в ацетоие, сн тую пленку с отпечатком помещают повторно в указанный раствор дл 

последующего окрашпвани  и микроскоппровани . При этом сн тые отпечатки подвергают окрашивапию иммунофлуоресцентными красител ми дл  просмотра их в люминесцентном микроскопе.

При специфическом свечении четко очерчиваютс  контуры микроорганизма, а тело его остаетс  темным.

Способ осуществл ют следующим образом.

На листовую поверхность растительного или иного субстрата, ранее обработанную биопрепаратами , с помощью стекл нной палочки или пипетки нанос т 2%-ный раствор органического стекла в ацетоне, который при комнатной температуре и ниже быстро застывает, нревраща сь в эластичную пленку толщиной от 0,01 до 0,1 мм. Затем пленку с субстрата чистой стороной перенос т на предметное стекло , покрытое тонким слоем 2%-ного раствора органического стекла в ацетоне, который застывает и фиксирует пленку с отпечатками.

Полученный с субстрата препарат окрашивают непр мым иммунофлуоресцентным методом и просматривают в люминесцентном микроскопе с объективом масл ной иммерсии в падающем сине-фиолетовом свете.

Подсчет клеток на единицу сн того отпечатка с исследуемой поверхности субстрата проводитс  по формуле:

М- 5о

где М - количество включений в исследуемом образце,

Л - среднее число включений в одном поле зрени ,

S - площадь препарата.

So - .площадь пол  зрени  микроскопа.

В св зи с тем что пленка из органического стекла обеспечивает хорошее сн тие микроорганизмов с исследуемой поверхности субстрата , а метод иммунофлуоресценции четко и специфично вы вл ет действующие компоненты препаратов, предлагаемый способ более чем в 2 раза улучшает качество контрол  и в 4- 5 раз повышает производительность труда.

Claims (3)

1.Способ определени  вирусных и бактериальных препаратов на поверхности субстрата, включающий сн тие отпечатков с исследуемой поверхности субстрата, обработанной биопрепаратом , последующее окрашивание и микроскопирование , отличающийс  тем, что, с целью повышени  точности определени , на поверхность субстрата после обработки ее биопрепаратом нанос т 2-3% раствор органического стекла в ацетоне, сн тую пленку с отпечатком помешают повторно в указанный раствор дл  последующего окрашивани  и микроскопировани .

2.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что сн тые отпечатки подвергают окрашиванию иммунофлуоресцентными красител ми дл  просмотра их в люминесцентном микроскопе .

Источники информации прин тые во внимание при экспертизе:

1.Вирусы насекомых, М, 1974, с. 127.

2.Африк н Э. К,. Энтомопатогенные бактерии и их значение, Ереван, 1973, с. 15-28.

3.Paton А. М., Jones S. М. The observation of microorganism on surfaces by incedent fluorescence microscopy. - «J. Appl. BacterioL, 1973, т 3, № 3, с. 441-443.