SU469686A1 - Способ получени дез-аланин-в-30инсулинов - Google Patents
Способ получени дез-аланин-в-30инсулиновInfo
- Publication number
- SU469686A1 SU469686A1 SU1921891A SU1921891A SU469686A1 SU 469686 A1 SU469686 A1 SU 469686A1 SU 1921891 A SU1921891 A SU 1921891A SU 1921891 A SU1921891 A SU 1921891A SU 469686 A1 SU469686 A1 SU 469686A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- insulin
- alanine
- carboxypeptidase
- des
- catalyzed
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
1
Изобретение относитс к способу получени дез-аланин-В -инсулинов, обладающих полной биологической активностью соответствующих природных инсулинов, но отличающихс от них своими иммунохимическими свойствами.
Известен способ получени дез-аланин-б2°инсулинов путем катализируемого карбоксипептидазой А гидролитического отщеплени аланина-. от природных инсулинов.
Однако нар ду с целевыми продуктами образуетс дез-аланин-б °-дез-аспарагин-Л21-инсулин , который трудно отдел етс и загр зн ет целевые продукты.
С целью цовыщени степени чистоты целевого продукта предлагаетс гидролиз природного инсулина, катализируемый карбоксипептидазой А, проводить в водном растворе, содержащем 40-60 об. % органического растворител , например этанола, при нагревании, преимущественно при 30-50°С, с последующим выделением целевых продуктов известным способом.
Пример. 1,2 г кристаллического свиного инсулина при 40°С раствор ют в 55 мл 0,1 н. трис-буфера (рН 8,5), приливают 45 мл этанола , нагревают до 40°С, добавл ют 1,2 мл суспензии карбоксипептидазы А, содержащей 0,1 г фермента (фирма «Реанал, ВНР) в 4,4 мл, инкубируют 4 час при 40°С, добавл ют
еще 1 мл суспензии карбоксипептидазы А и кубируют 3 час при 40°С. К смеси прибавл ют 5,7 н. сол ную кислоту до рН 3, упаривают до объема 25-30 мл, оставл ют на 2-3 час
при О-4°С и отдел ют неактивную карбоксипептидазу Л центрифугированием. К фильтрату добавл ют сухой трис-(оксиметил)-аминометан до рН 8,0, нанос т раствор на колонку (40X3,5 см) с Сефадексом G-25, предварительно уравновещенную 0,05 М раствором бикарбоната аммони , и алюируют этим же буферным раствором, собира фракции по 5 мл. Содержание белка во фракци х определ ют спектрофотометрически при 278 нм. Фракции,
содержащие белок, объедин ют и лиофильно высущивают. Выход целевого продукта 1,15 г, При электрофорезе (750 в, 2 час) на бумаге в 0,1 М растворе лимонной кислоты, содержащем 4 моль мочевины, полученный дез-аланинВ °-инсулин движетс однородным п тном, подвижность которого аналогична подвижности исходного свиного инсулина. Дез-аланин5 °-инсулин выделен в аналитически чистом виде с выходом, близким к количественному.
Аминокислотный состав полученного дезаланин-б °-инсулина и исходного свиного инсулина определ ют на аминокислотном анализаторе тина «Унихром фирмы «Бекман (ФРГ).
Полученный дез-аланин-В °-инсулйн и исходный свиной инсулин содержат в остатках (теоретически) 1,00 (1) и 1,00 (1) лизина; 1,94 (2) и 1,93 (2) гистидина; 1,00 (1) и 1,00 (I) аргинина; 3,00 (3) и 2,93 (3) аспарагиновой кислоты; 1,68 (2) и 1,71 (2) треспина; 2,58 (3) и 2,83 (3) серина; 7,39 (7) и 7,27 (7) глютаминовой кислоты; 0,98 (1) и 1,07 (1) пролина; 4,00 (4) и 4,00 (4) глицина; 1,07 (1) и 2,03 (2) аланина; 5,22 (6) и 5,21 (6) Va цистина; 3,91 (4) и 3,89 (4) валина; 1,75 (2) и 1,71 (2) изолейцина; 6,09 (6) и 6,15 (6) лейцина; 3,80 (4) и 3,79 (4) тирозина и 2,88 (3) и 2,89 (3) фенилаланина соответственно.
При определении содержани аминокислот в остатках дл каждого инсулина за единицу црин та /4 содержани глицина. Гидролиз дез-аланин-б °-инсулина (4 мг), катализируемый карбоксипептидазой А и проводимый в 0,1 н. трис-буфере (рН 8,5) в течение 2 час при 37°С, приводит к отщеплению только аспарагииа (0,35 мкм), как С-концевой аминокислоты .
В аналогичных услови х гидролиз свиного
инсулина сопровождаетс отщеплением аспарагина (0,31 мкм) и аланина (0,47 мкм)-.
Таким образом, нод действием карбоксипептидазы Л в предлагаемых услови х от свиного инсулина отщепл етс единственный аминокислотный остаток - остаток аланина, занимающий положение 30 в цепи В.
Предмет изобретени
Claims (2)
1.Способ получени дез-аланин-5 °-инсулинов путем гидролитического отщеплени аланина-б ° от природных инсулинов, катализируемого карбоксипептидазой Л, отличающийс тем, что, с целью повыщени степени чистоты целевого продукта, гидролиз природного инсулина, катализируемый карбоксипептидазой А, провод т при нагревании в водном растворе, содержащем 40-60 об. % органического растворител , например этанола, с последующим выделением целевого продукта известным способом.
2.Способ по п. 1, отличающийс тем, что процесс ведут при 30-50°С.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU1921891A SU469686A1 (ru) | 1973-05-15 | 1973-05-15 | Способ получени дез-аланин-в-30инсулинов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU1921891A SU469686A1 (ru) | 1973-05-15 | 1973-05-15 | Способ получени дез-аланин-в-30инсулинов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU469686A1 true SU469686A1 (ru) | 1975-05-05 |
Family
ID=20553579
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU1921891A SU469686A1 (ru) | 1973-05-15 | 1973-05-15 | Способ получени дез-аланин-в-30инсулинов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU469686A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0354507A2 (de) * | 1988-08-10 | 1990-02-14 | Hoechst Aktiengesellschaft | Verfahren zur Herstellung von Des-B30-Insulinen und Des-B30-Insulinderivaten |
-
1973
- 1973-05-15 SU SU1921891A patent/SU469686A1/ru active
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0354507A2 (de) * | 1988-08-10 | 1990-02-14 | Hoechst Aktiengesellschaft | Verfahren zur Herstellung von Des-B30-Insulinen und Des-B30-Insulinderivaten |
| EP0354507A3 (de) * | 1988-08-10 | 1991-06-05 | Hoechst Aktiengesellschaft | Verfahren zur Herstellung von Des-B30-Insulinen und Des-B30-Insulinderivaten |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4284721A (en) | Method for manufacturing dipeptides | |
| RR | Partition chromatography of insulin and other proteins. | |
| Muramatsu et al. | The formylation of amino acids with acetic formic anhydride | |
| Narita | Isolation of acetylseryltyrosine from the chymotryptic digests of proteins of five strains of tobacco mosaic virus | |
| US3808190A (en) | Process for the preparation of aspartyl dipeptide esters involving little racemization | |
| Vaughan Jr et al. | The Preparation of Optically-active Peptides Using Mixed Carbonic—Carboxylic Acid Anhydrides | |
| Narita | Isolation of acetylpeptide from the protein of cucumber virus 4 | |
| AKABORI et al. | STUDIES ON TAKA-AMYLASE A II. AMINO ACID COMPOSION OF TAKA-AMYLASE A | |
| EP0149594A2 (en) | Enzymatic coupling of n-formyl amino acids and/or peptide residues | |
| US5113009A (en) | Preparation and isolation of mineral acid salt of an amino acid methyl ester | |
| SU469686A1 (ru) | Способ получени дез-аланин-в-30инсулинов | |
| Shaw | [58] Site-specific reagents for chymotrypsin, trypsin, and other serine proteases | |
| Kornguth et al. | The Stability and Rearrangement of iε-N-Glutamyl-Lysines | |
| Le Quesne et al. | 7. Amino-acids and peptides. Part VI. Synthesis of L-aspartyl peptides from carbobenzyloxy-L-aspartic anhydride | |
| Wong et al. | Enzymic synthesis of opioid peptides | |
| US4840897A (en) | Modified human insulin and its use as starting material for the preparation of human insulin | |
| JPH03503958A (ja) | カルシトニン遺伝子関連ペプチドの製造方法 | |
| DE68923625T2 (de) | Enzymatischer Prozess zur Herstellung immunomodulatorischer Pentapeptide und Intermediate zu deren Herstellung. | |
| US4426325A (en) | Process for the preparation of compounds containing carboxylic acid amide groups, in particular or peptides | |
| Abe et al. | Synthesis of cyclo-diglycyl-L-lysyl-diglycyl-L-lysyl and hydrolysis by trypsin | |
| Grim et al. | Synthesis of dehydrothyroliberin. DELTA. ZPhe-2-TRF | |
| Ohno et al. | Partial enzymic deprotection in the synthesis of a protected octapeptide bearing a free terminal carboxyl group | |
| Kaneko et al. | Selective Cleavage of Serine Peptides | |
| CA1337936C (en) | Vibriolysin coupling process | |
| AU618420B2 (en) | A method for the selective cleavage of fusion proteins |