SU420660A1

SU420660A1 - METHOD FOR OBTAINING BENZILPENICILLINACYLASE

Info

Publication number: SU420660A1
Application number: SU1811160A
Authority: SU
Inventors: С. В. Лопатнев Е. С. Былинкина Г. И. Альбрехт изобретени Г. И. Клейнер
Original assignee: Рижский завод медицинских препаратов
Priority date: 1972-07-14
Filing date: 1972-07-14
Publication date: 1974-03-25

Description

1one

Изобретение относитс к области медицины и касаетс способов получени бензилпенициллинацилазы .This invention relates to the field of medicine and relates to methods for producing benzylpenicillin acylase.

Известен снособ получени бензилпенициллинацилазы нутем глубинного культивировани Е. соИ в среде содержащей источники углерода , азота и минеральные соли с последующим выделением целевого продукта.A known method for the production of benzylpenicillin acylase is based on the submerged cultivation of E. coli in a medium containing carbon, nitrogen and mineral salts, followed by isolation of the target product.

Ферментацию в данном случае прекращают .при достижении определенного уровн биомассы , что не всегда совпадает с достижением культурой максимальной ацнлазной активности и не всегда обеспечивает оптимальную продолжительность ферментации.In this case, the fermentation is stopped when a certain level of biomass is reached, which does not always coincide with the achievement of maximum activity by the culture and does not always ensure the optimal duration of fermentation.

Целью изобретени вл етс интенсификаци процесса ферментации. Предложенный способ позвол ет прекратить ферментацию при достижении культурой наибольшей ацилаз ой активности, обеспечить оптимальную продолжительность ферментации и тем самым более рационально использовать технологическое оборудование и повысить съем продукта.The aim of the invention is to intensify the fermentation process. The proposed method makes it possible to stop fermentation when the culture reaches the highest acylase activity, to ensure an optimal fermentation time and, thus, to use technological equipment more rationally and to increase the removal of the product.

Дл достижени поставленной цели ферментацию прекращают при достижении относительно посто нного уровн интенсивности дыхани культуры, который наблюдаетс вслед за снижением максимальной интенсивности дыхани .To achieve this goal, fermentation is stopped when a relatively constant level of respiration intensity of the culture is reached, which is observed following a decrease in the maximum respiration rate.

В таблице приведено врем достижени максимальной активности культуральной жидкости при определении разными методами.The table shows the time to reach the maximum activity of the culture fluid when determined by different methods.

Из таблицы видно, что вне зависимости от фактического времени достижени максимальной активности концентраци СО2 и 02 в отход щем газе наиболее четко показывает момент окончани накоплени ацилазной активности в культуре.It can be seen from the table that, regardless of the actual time that the maximum activity is reached, the concentration of CO2 and 02 in the exhaust gas most clearly shows the time when the accumulation of acylase activity in culture ends.

Пример 1. В ферментер загружают 100 л питательной среды, содержащей 2% кукурузного экстракта (в пересчете на сухое вещество ) и 0,1% фенилуксусной кислоты, довод т рН раствором NaOH до 6,9 и стерилизуют в ферментере в течение 40 мин при 124°С.Example 1. 100 l of nutrient medium containing 2% corn extract (calculated on dry substance) and 0.1% phenylacetic acid are loaded into the fermenter, the pH is adjusted to 6.9 with NaOH solution and sterilized in a fermenter for 40 minutes at 124 ° s

После посева часть выход щего из ферментера газа направл ют в оптико-акустический газоанализатор типа ОА 2209. По мере роста микроорганизма прибор фиксирует увеличение концентрации двуокиси углерода в выход щем из ферментера газе. Концентраци двуокиси углерода в выход щем из ферментера газе резко падает (с 1,96 до 1,23%) между 10 и 10,5 час роста и продолжает держатьс на том же уровне до 11,5 час роста.After sowing, a part of the gas leaving the fermenter is sent to an optoacoustic gas analyzer of the type OA 2209. As the microorganism grows, the device records an increase in the concentration of carbon dioxide in the gas leaving the fermenter. The concentration of carbon dioxide in the gas leaving the fermenter drops sharply (from 1.96 to 1.23%) between 10 and 10.5 hours of growth and continues to stay at the same level to 11.5 hours of growth.

На 11,5 час роста культивирование прекращают , и культуральную жидкость передают «а дальнейшую обработку.At 11.5 hours of growth, the cultivation is stopped, and the culture fluid is transferred “and further processing.

В момент слива рН культуральной жидкости 8,1, концентраци биомассы 4,2 г/л иAt the time of draining, the pH of the culture fluid is 8.1, the biomass concentration is 4.2 g / l and

Способ определени максимальнойThe method for determining the maximum

ферментной активности культуральнойenzyme culture activity

жидкостиliquids

Врем окончани ферментации, часFermentation time, hour

бензилпенициллинацилаэна активность культуральной жидкости 14,5 ф. ед.benzylpenicillinacylaena culture fluid activity 14.5 f. units

ripHiMep 2. 100 л среды готов т, засевают и культивируют как в примере 1.ripHiMep 2. 100 l of medium are prepared, seeded and cultivated as in example 1.

После посева часть выход щего из ферментера газа иалравл ют в парамагнитный газоанализатор типа МГК.After sowing, a part of the gas leaving the fermenter is fed to the paramagnetic gas analyzer of the MHK type.

По мере роста микроорганизма нрибор фиксирует уменьшение концентрации кислорода в выход щем из ферментера газе.As the microorganism grows, the device records a decrease in the oxygen concentration in the gas leaving the fermenter.

Между 12 и 12,5 час роста концентраци Oj в выход щем из ферментера газе резко повышаетс (с 18,8 до 19,8%) и продолжает держатс примерно на том же уровне до 13,5 час роста.Between 12 and 12.5 hours of growth, the concentration of Oj in the gas leaving the fermenter rises sharply (from 18.8% to 19.8%) and continues to stay at about the same level until 13.5 hours of growth.

На 13,5 час роста культивирование прекращают , и культуральную жидкость передают на дальнейшую обработку.At 13.5 hours of growth, the cultivation is stopped, and the culture fluid is transferred for further processing.

В момент слива рН культуральной жидкости 8,0, концентраци биомассы 3,9 г/л и бензилнбнициллинацилазна активность культуральной жидкости 14,8 ф. ед.At the moment of draining, the pH of the culture fluid is 8.0, the concentration of biomass is 3.9 g / l, and the benzylnbnicillin acylase activity of the culture fluid is 14.8 f. units

Предмет изобретени Subject invention

Способ нолучени бензилпенициллинацилазы путем глубинного культивировани Е. соИ в среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли с последующим выделением целевого продукта, отличающийс тем, что, с целью интенсификации процесса , ферментацию прекращают при достижейЕИ относительно посто нного уровн интенсивности дыхани культуры, который наблюдаетс вслед за снижением максимальной интенсивности дыхани .The method of obtaining benzylpenicillin acylase by submerged cultivation of E. coli in a medium containing sources of carbon, nitrogen and mineral salts, followed by isolation of the target product, characterized in that, in order to intensify the process, the fermentation is stopped when the HE intensity of the culture is observed, which is observed following a decrease in maximum respiration rate.