SU407904A1

SU407904A1 - Method for isolating guanosine-5'-diphosphate

Info

Publication number: SU407904A1
Application number: SU1751200A
Authority: SU
Original assignee: Институт высокомолекул рных соединений СССР
Priority date: 1972-02-21
Filing date: 1972-02-21
Publication date: 1973-12-10

Description

1one

Изобретение относитс к усовершенствованному способу выделени соединени , которое примен етс в биохимических исследовани х.This invention relates to an improved method for isolating a compound that is used in biochemical research.

Известен способ выделени гуанозин-5-дифосфата из продажного препарата, содержащего гуанозин-5-монофосфат и отщепившийс неорганический фосфат. Очистку гуанозин-5дифосфата осуществл ют методом хроматографии на ионообменных смолах. Выход гуанозин-5-дифосфата составл ет 70-75%.A known method for isolating guanosine-5-diphosphate from a commercial preparation containing guanosine-5-monophosphate and chipped off inorganic phosphate. Purification of guanosine-5 diphosphate is carried out by chromatography on ion exchange resins. The yield of guanosine 5-diphosphate is 70-75%.

Однако известный способ обладает р дом сундественных недостатков, важнейшим из -которых вл етс трудоемкость процесса очистки . Кроме того, в очищенных препаратах содержитс аналитически трудоопредел емые примеси, которые мешают применению гуанозин-5-дифосфата в биохимических и.сследовани х .However, the known method has a number of weaknesses, the most important of which is the complexity of the cleaning process. In addition, the purified preparations contain analytically difficult impurities that interfere with the use of guanosine-5-diphosphate in biochemical and research.

При осуществлении предлагаемого способа выделени гуанозин-5-дифосфата все это устран етс за счет различной растворимости кальциевых солей гуанозин-5-дифосфата, гуанозин-5-монофосфата и неорганического фосфата в спирто-сол нокислом растворе.In the implementation of the proposed method for the isolation of guanosine-5-diphosphate, all this is eliminated due to the different solubility of the calcium salts of guanosine-5-diphosphate, guanosine-5-monophosphate and inorganic phosphate in alcohol-hydrochloric acid solution.

Дл упрощени технологии процесса смесь гуанозин-5-дифосфата, гуанозин - 5 - монофоссфата и неорганического фосфата подвергаютTo simplify the process, a mixture of guanosine-5-diphosphate, guanosine-5-monophosphate and inorganic phosphate is subjected to

обработке сол ми кальци , нанример хлористым кальцием, и полученную смесь кальциевых солей подвергают дробному осаждению из сол нокислого раствора спиртом. Выход достигает 84%.the treatment with calcium salts, such as calcium chloride, and the resulting mixture of calcium salts is subjected to fractional precipitation from hydrochloric acid solution with alcohol. The yield reaches 84%.

Пример. Используют динатриевую соль гуанозин - 5 - дифосфата фирмы «Реанал (Венгри ). При предварительных опытах устанавливают , что в 1 г препарата содержитс Example. The disodium salt guanosine - 5 - diphosphate of the company Reanal (Hungary) is used. In preliminary experiments, it is established that 1 g of the preparation contains

417 мг (0,88 ммоль) динатриевой соли гуанозин-5-дифосфата , 223 мг (0,55 ммоль) динатриевой соли гуанозин-5-монофосфата, 40 мг (0,23 ммоль) тринатриевой соли ортофосфорной кислоты, а также «ристаллогидратна вода , влага и другие примеси. Таким образом, примесь неорганических ортофосфатов и гуанозин-5-монофосфатов , отнесенна к гуанознн-5-дифосфату , составл ет 28 и 67 мол% соответственно.417 mg (0.88 mmol) of guanosine-5-diphosphate disodium salt, 223 mg (0.55 mmol) of guanosine-5-monophosphate disodium salt, 40 mg (0.23 mmol) of trisodium orthophosphoric acid salt, and also rustyl hydrate water , moisture and other impurities. Thus, the admixture of inorganic orthophosphates and guanosine-5-monophosphates, attributed to guanazn-5-diphosphate, is 28 and 67 mol%, respectively.

1 г препарата раствор ют в 30 мл 0,1 н. сол ной кислоты и к раствору прибавл ют 45 дмл 0,2 М хлористого кальци в этиловом спирте. Выпавший осадок центрифугируют, промывают спиртом, раствор ют в 30мл 0,1 М сол ной1 g of the drug is dissolved in 30 ml of 0.1N. hydrochloric acid and 45 dml of 0.2 M calcium chloride in ethyl alcohol are added to the solution. The precipitation is centrifuged, washed with alcohol, dissolved in 30 ml of 0.1 M hydrochloric

кислоты и переосаждают добавлением 80 мл этилового спирта. Переосаждение повтор ют несколько раз. После трех пе1реосажден11й в препарате остаетс менее 3% гуанозин-5-монофосфата и отсутствует неорганический ортофосфат . Последующее переосаждение приводит к полному удалению монофосфатов.acids and re-precipitate by adding 80 ml of ethanol. The reprecipitation is repeated several times. After three transposition, less than 3% guanosine-5-monophosphate remains in the preparation and there is no inorganic orthophosphate. Subsequent reprecipitation leads to complete removal of monophosphates.

Дл дальнейших анализов кальциевую соль гуаНозин-5-дифосфата перевод т в литиевую на катионите Дауэкс-50 (Ь1+-форма) и лиофилизуют . Собирают 330 мг (0,74 ммоль) литиевой соли гуанозин-5-дифосфата, выход составл ет 84%, счита на вз тый гуанозин-5дифосфат .For further analyzes, the calcium salt of guaNosin-5-diphosphate is converted to lithium on a Dowex-50 cation exchanger (H1 + form) and lyophilized. 330 mg (0.74 mmol) of guanosine-5-diphosphate lithium salt are collected, the yield is 84%, calculated on taken guanosine-5 diphosphate.

Предмет изобретени Subject invention

Способ выделени гуанозин-5-дифосфата из его €меси с гуанозин-З-.монофосфатом и отщепившимс неорганическим фосфатом, о тличающийс тем, что, с целью упрощени технологии процесса, указанную смесь подвергают обработке сол ми кальци , например хлористым кальцием, и полученную смесь кальциевых солей подвергают дробному осаждению из сол иокислого раствора спиртом.A method for isolating guanosine-5-diphosphate from its mixture with guanosine-3-monophosphate and chipped off inorganic phosphate, which, in order to simplify the process, the mixture is treated with calcium salts, such as calcium chloride, and the resulting mixture calcium salts are subjected to fractional precipitation from hydrochloric acid solution with alcohol.