SU378411A1 - СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ /-ЛИЗИНАSUdi^ih;Б>&1&.' - Google Patents

Description

Изобретение Относитс  к способам получени  аминокислот.

Известен способ получени  /-лизина путем получени  посевного материала продуцирующих его микроорганизмов Brevibacterium на питательной среде, содержащей салар, азотные , фосфорные соли и стимул торы роста с последующим культивированием их дл  биосинтеза /-лизина на питательной среде того же состава и выделени  /-лизина в кристаллическом виде.

Цель изобретени  - повысить выход /-лизина , а также обеспечить стерильность при биосинтезе /-лизина.

Это достигаетс  тем, что в течение всего процесса получени  /-лизина лри получении посевного .материала и при биосинтезе /-лизина , преимущественно через 18-24 час от начала .Процесса, в питательную среду ввод т нитрофурановые соединени .

В качестве нитрофура.новых соединений, вводимЫХ в 1посевной материал, используют соединени  из р да фуразом.идон, фурадонин, фурацилин.

В качестве нитрофурановых соединений, вводимых при биосинтезе /-лизина, используют смесь, состо щую из фурагина и одного из соединений р да фуразолидон, ацилнидразон, фурадонин, фурадилин, .фуразолин.

Количество нитрофурановых соединений, вводимых в посевной материал, составл ет 0,003-0,005 мг/мл, а количество нитрофурановых соединений, вводи.мых при биосинтезе

/-лизина,-0,05-0,1 мг/мл.

Пример. Дл  получени  /-лизина используют культуру Brevibacterium Specia 22, котора  размножаетс  вначале в лабораторных услови х на качалке, а затем в посевных

фер.ментаторах на стерильной питательной среде, содержащей углеводы, минеральный азот, фосфор и другие компоненты, необходимые дл  роста и размножени  клеток, при рН 7,2-7,5 и температуре 30-31° С.

После стерилизации питательной среды к ней добавл ют нитрофурановый .препарат - фурацилин с концентрацией 0,005 мг/мл в качестве стимул тора роста. Вместо фурацилина может быть до,бавлен фуразолил,он в количестве 0,006 мг/мл или фурадонин в количестве 0,005 мг/мл.

Культивирование Brevibacterium Sp. 22 в посевных ферментаторах продолжаетс  18- 22 час, после чего культура передавливаетс 

в производственные ферментаторы, в которых осуществл етс  процесс биосинтеза. Ферментаторы снабжены мешалка.ми и аэраторами. Основна  ферментаци  ведетс  при 29- 31°С и при рН 6,8-7,0 в течение 66 час. При этом в качестве питательной среды используют стерилизованный водный раствор, содержащий сахар (мелассу или гидролтаат полисахаридов ), азотные и фосфорные соли, источники стимул торов роста (кукурузный экстракт , картофельный сок, микробную биомассу , кормовые дрожжи, барду спиртового производства, ишеничные отруби).

После 24-36 час культивирова.ни  к «ультуральной жидкости добавл ют смесь, состо щую из фурагина в количестве 0,03 мг1мл и фураголизона в количестве 0,03 мг1мл, затем фермента.ци  нродолжаетс  обычным способом . Наибольщее увеличение выхода /-лизина достигнуто при добавлении в культуральной жидкости 0,03 мг/мл фурагина и 0,03 мг/мл ацилнидразона.

,В конце ферментац.ии культуральна  лсидкость содержит 24,6 г/л /-лизина 14,1 г/л биомассы и 0,4 - остаточных Сахаров. Выход /-лизина от caxaipa составл ет 33,7%, что превышает контроль на 139,8%.

L-лизин в кулЬтуральной жидкости стабилизируют добавлением 0,15 вес. % бисульфита натри  и рН культуральной жидкости довод т сол ной кислотой до 5-6,0. Затем культуральную ж дкость упаривают до сметанообразной консистенции (содержание сухих веществ 30-40 вес. %).

Упаренную культуральную жидкость подкисл ют сол ной кислотой до рН 3,8±0,3 и высушивают на распылительной сушилке до содержани  остаточной влаги 4 вес. %, после чего провод т стандартизацию концентрата до 15 или 20 вес. % лизина.

Таблица 1

Вли ние нитрофурановых препаратов на биосинтез лизина культурой

Таблица 2

Вли ние нитрофураиовых препаратов на биосинтез лизина культурой

Дл  получени  кристаллического /-лизина, пригодного дл  пищевых .и лечебных целей, культуральную жидкость центрифугируют и фильтруют. После этого ее обрабатывают на колонке ионообменными смолами, например сульфокатионитом СДВ-3 или КУ-2 .в аммонийной форме при рН культуральной жидкости равном 7.

Дл  удалбни  неадсорбированных аминокислот и примесей среды колонку после адсорбции лромывают водой. L-лиаин элюируют 2н. раствором аммиака. Затем элюат упаривают s ва-кууМе до сиропообразного состо ни  и нейтрализуют сол ной кислотой до рН 4,9. Полученный /-лизин-НС1 кристаллизуют из раствора при добавлении трех объемов спирта. После этого /-лизин-НС1 отдел ют от маточника, перераствор ют в малом объеме воды, обрабатывают небольшим количеством угл  и перекристаллизовывают.

Осуществление лредлагаемого способа увеличивает выход /-лизина в 1,3-2 раза по сравнению с известным способом.

Предмет И з о б р е т е н и  

Способ получени  /-лизина путем получени  пос-евното материала продуцирующих его микроорганизмов Brevibacterium на питательной среде, содержащей сахар, азотные, фосфорные соли и стимул торы роста с последующим культивированием их дл  биосинтеза

./-лизина на питательной среде того же состава и выделени  /-лизина в кристаллическом виде, отличающийс  тем, что, с целью повышени  выхода /-лизина, а также обеспечени  стерильности при биосинтезе /-лизина, в течение всего процесса получени  /-лизина - при получение посевного материала и при биосинтезе /-лизина, преимущественно через 18- 24 час dT начала процесса, в питательную среду ввод т нитрофурановые соединени .

2. Способ по л. 1, отличающийс  тем, что в качестве нитрофурановых соединений, вводимых в посевной материал, используют соединени  из р да фуразомидон, фурадонин, фурацилин .

3.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что в качестве нитрофурановых соединений, вводимых при биосинтезе /-лизина, используют смесь, состо щую из фурагина и одного из

соединений р да фуразолидон, ацилнидразон, фурадонин, фурадилин, фуразолин.

4.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что количество нитрофурановых соединений, вводимых В посевной материал, составл ет 0,003-0,005 мг/мл.

5.Способ по 1П1П. 1, 3, отличающийс  тем, что количество нитрофурановых соединений, вводимых при блосинтезе /-лизина, составл ет

0,05-0,1 мг/мл.