SU377159A1 - METHOD OF OBTAINING PROTEAS INHIBITOR - Google Patents
METHOD OF OBTAINING PROTEAS INHIBITORInfo
- Publication number
- SU377159A1 SU377159A1 SU1612362A SU1612362A SU377159A1 SU 377159 A1 SU377159 A1 SU 377159A1 SU 1612362 A SU1612362 A SU 1612362A SU 1612362 A SU1612362 A SU 1612362A SU 377159 A1 SU377159 A1 SU 377159A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- solution
- precipitate
- inhibitor
- water
- separated
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
1one
Известен снособ получени ингибитора протеаз путем автолиза измельченного животного сырь , отделени жмыха, экстрагировани , подщелачивани , обработки экстракта сульфатом аммони , нагревани , подщелачивани раствора, фильтрации, высушиваии .A known method for producing a protease inhibitor by autolysis of crushed animal raw materials, separating the cake, extracting, basifying, treating the extract with ammonium sulfate, heating, basifying the solution, filtering, drying.
Однако известный способ не обеспечивает получени ингибитора протеаз в едином технологическом цикле с гепарином и пептоном и, кроме того, ингибитор протеаз недостаточно активен.However, the known method does not provide for obtaining a protease inhibitor in a single technological cycle with heparin and peptone and, in addition, the protease inhibitor is not sufficiently active.
Дл повышени активности ингибитора протеаз с одновременным получением гепарина и пептона из белковых отходов после извлечени ингибитора экстракт после автолиза обрабатывают водой и перед нагреванием осадок обрабатывают 0,65 н. раствором сол ной кислоты, жмых обрабатывают хлористым натрием с последующей обработкой осадка ацетатом кали , далее осадок после извлечени гепарина охлаждают, обрабатывают водой и известным способом выдел ют пептон.To increase the activity of the protease inhibitor while at the same time obtaining heparin and peptone from protein waste, after extracting the inhibitor, the extract after autolysis is treated with water and before heating the precipitate is treated with 0.65 n. The hydrochloric acid solution is treated with sodium chloride, followed by treatment of the precipitate with potassium acetate, then the precipitate after heparin extraction is cooled, treated with water and peptone is recovered in a known manner.
Пример. 10 кг замороженных легких крупного рогатого скота измельчают на куттере и выдерживают при комнатной температуре в течение 17 час. Затем добавл ют 3 объема воды, охлажденной до 8-12° и перемешивают в течение 2 час.Example. 10 kg of frozen lungs of cattle are ground on a cutter and kept at room temperature for 17 hours. Then add 3 volumes of water cooled to 8-12 ° and mix for 2 hours.
Легочную ткань (жмых) отдел ют центрифугированием , промывают небольшим количеством (около 0,5 объема) воды при рН 7,0 и используют дл выделени гепарина.The lung tissue (cake) is separated by centrifugation, washed with a small amount (about 0.5 volume) of water at pH 7.0, and used to isolate heparin.
Выделение ингибитора протеаз.Isolation of the protease inhibitor.
Экстракт и промывные воды объедин ют и добавлением 5 н. раствора едкого натра устанавливают рН 7,0 и высаливают балластные белки сульфатом аммони из расчета 113 г/л. Осадок отдел ют фильтрованием через сукноThe extract and the washings were combined by the addition of 5N. caustic soda solution to establish a pH of 7.0 and salted out ballast proteins with ammonium sulfate at the rate of 113 g / l. The precipitate is separated by sut filtering.
бета и выбрасывают, а из фильтрата высаливают ингибитор-сырец сульфатом аммони из расчета 510 г/л. После отстаивани в течение 10-12 час при температуре 5°С надосадочную жидкость сифонируют, а осадок отдел ютbeta and emit, and from the filtrate salted out the raw inhibitor ammonium sulfate at the rate of 510 g / l. After settling for 10-12 hours at 5 ° C, the supernatant is siphoned and the sediment is separated
фильтрованием на нутч-фильтре. Затем осадок , содержащий ингибитор протеаз, раствор ют в 3,5 объемах 0,65 н. раствора сол ной кислоты, прогревают при 80°С в течение 4 мин, после чего быстро охлаждают до комнатнойfiltering on suction filter. Then, the precipitate containing the protease inhibitor is dissolved in 3.5 volumes of 0.65 n. hydrochloric acid solution, heated at 80 ° C for 4 min, then rapidly cooled to room temperature
температуры и центрифугируют. Белковый осадок промывают 2 объемами воды. Промывные воды объедин ют с основным раствором и добавлением 5 н. раствора едкого натра устанавливают рН 7,5. Ингибитор протеаз высалнвают сульфатом аммони из расчета 600 г/л, отдел ют фильтрованием на воронке Бюхнера, раствор ют в 10 объемах воды, обессоливают методом диализа и лиофилизируют. Выход ингибитора протеаз активностью 650-temperature and centrifuged. The protein precipitate is washed with 2 volumes of water. The washings are combined with the basic solution and the addition of 5N. caustic soda solution to establish a pH of 7.5. The protease inhibitor is precipitated with ammonium sulfate at a rate of 600 g / l, separated by filtration on a Buchner funnel, dissolved in 10 volumes of water, desalted by dialysis and lyophilized. The output of the protease inhibitor activity 650-
700 ЕД. из 1 кг легких составл ет 320 мгЖмых после извлечени ингибитора трипсина и промывани экстрагируют 1,5 объемами 0,7 мол. раствора хлористого иатра при рН 9-9,5 и температуре 55-60° в течение 1,5 час. Затем температуру смеси поднимают до 100°С дл коагул ции балластных белков, охлаждают до 35-40°С и фильтруют. Осадок используют дл получени пептона. В полученном фильтрате добавлением 17%-ного раствора сол ной кислоты устанавливают рН 2,5. Выпавший сол нокислый осадок гепарина-сырца отдел ют центрифугированием и суспендируют в 4 объемах 15%-ного раствора хлористого натра. К суспенвии прибавл ют 20%-ный раствор хлористого кальци пр рН 9-9,5 и температуре 70-75°С, смесь нагревают до 95°С, скоагулированный балласт отдел ют фильтрованием , а раствор охлаждают до 30-35°С и подкисл ют сол ной кислотой до рН 2,5. Выпавший осадок отдел ют центрифугированием. В растворе устанавливают рН 8,2-8,3 добавлением 5 п. раствора едкого натра и осаждают гепарин 1,5 объемами этилового спирта.700 U out of 1 kg of the lungs, 320 mg of PM are obtained after removing the trypsin inhibitor and washing it is extracted with 1.5 volumes of 0.7 mol. a solution of iatra chloride at pH 9-9.5 and a temperature of 55-60 ° for 1.5 hours. Then the temperature of the mixture is raised to 100 ° C to coagulate the ballast proteins, cooled to 35-40 ° C and filtered. The precipitate is used to produce peptone. The resulting filtrate is adjusted to pH 2.5 by adding 17% hydrochloric acid. The precipitated heparin crude hydrochloride precipitate is separated by centrifugation and suspended in 4 volumes of a 15% sodium chloride solution. A 20% calcium chloride solution (pH 9–9.5) and a temperature of 70–75 ° C was added to the suspension, the mixture was heated to 95 ° C, coagulated ballast was separated by filtration, the solution was cooled to 30–35 ° C, and acidic hydrochloric acid to pH 2.5. The precipitate was separated by centrifugation. The solution is adjusted to pH 8.2-8.3 by adding 5 p. Of sodium hydroxide solution and heparin is precipitated with 1.5 volumes of ethanol.
Через 12-15 час надосадочиую жидкость удал ют сифонированием, а осадок отдел ют центрифугированием, раствор ют в 10 объемах воды при рН 9-9,5 и температуре 60- 70°С. После этого добавл ют к объему смеси 30%-ный раствор перекиси водорода дл обесцвечивани , охлаждают до комнатной температуры , фильтруют. К прозрачному фильтрату добавл ют до двух молей ацетата кали и уксусной кислоты до рН 5,5, нагревают до 55- 60°С и быстро охлаждают до 5-8°С, после чего выдерживают при этой температуре в течение 10-12 час. Выпавший осадок отдел ют центрифугированием, раствор ют в 10 объемах воды, обрабатывают ионообменной смолой КУ-2 в Н-форме в статических услови х и после отделени смолы из раствора осаждают гепарин при рН 6,0-6,5 (устанавливают добавлением едкого натра) равным объемом спирта . Выход: 1 кг легких - 11700 ед. с активностью 96 ед/мг.After 12-15 hours, the supernatant was removed by siphoning, and the precipitate was separated by centrifugation, dissolved in 10 volumes of water at pH 9-9.5 and a temperature of 60-70 ° C. A 30% solution of hydrogen peroxide for decolorization is then added to the volume of the mixture, cooled to room temperature, filtered. Up to two moles of potassium acetate and acetic acid to pH 5.5 are added to the transparent filtrate, heated to 55-60 ° C and rapidly cooled to 5-8 ° C, and then kept at this temperature for 10-12 hours. The precipitated precipitate is separated by centrifugation, dissolved in 10 volumes of water, treated with KU-2 ion-exchange resin in H-form under static conditions, and after separation of the resin from the solution, heparin is precipitated at pH 6.0-6.5 (set by adding sodium hydroxide) equal volume of alcohol. Yield: 1 kg of lungs - 11700 units. with an activity of 96 units / mg.
Получение пептона.Getting peptone.
Остатки легочной ткани после извлечени гепарина быстро охлаждают до 15-18°С водой , снижа рН до 6,0-6,5. Остаток суспендируют с двум объемами воды и нагревают до 40°С. В нагретую смесь добавл ют фосфорную кислоту с таким расчетом, чтобы начальное рН смеси было 1,7-1,8. В смесь добавл ют 8% слизистой оболочки свиных желудков и выдерживают при 45°С в течение 18-23 час до полного переваривани ткани. После окончани гидролиза прозрачную жидкость кип т т с добавлением гидроокиси кальци , устанавливают в растворе рН 8,2-8,5. Гор чий раствор отдел ют от осадка и при 50°С добавл ют 1 % поджелудочной железы убойных животных.After removal of heparin, lung tissue residues are rapidly cooled to 15–18 ° C with water, lowering the pH to 6.0–6.5. The residue is suspended with two volumes of water and heated to 40 ° C. Phosphoric acid is added to the heated mixture so that the initial pH of the mixture is 1.7-1.8. 8% of the pork stomach mucosa is added to the mixture and kept at 45 ° C for 18-23 hours until the tissue is completely digested. After the end of the hydrolysis, the clear liquid is boiled with the addition of calcium hydroxide, and the solution is adjusted to a pH of 8.2-8.5. The hot solution is separated from the precipitate and, at 50 ° C, 1% of the pancreas of slaughter animals is added.
Трипсиновый гидролиз провод т при 50°С, рН 8,2-8,5 до полного переваривани белка, что определ етс по качественной реакции на белок в присутствии 20%-пой трихлоруксусной кислоты.The trypsin hydrolysis is carried out at 50 ° C, pH 8.2-8.5, until complete digestion of the protein is determined by the qualitative reaction to the protein in the presence of 20% trichloroacetic acid.
По окончании протеолиза лизат довод т до кипени , затем добавлением фосфорной кислоты устанавливают рН 6,0-7,0 и фильтруют в гор чем состо нии через сукно бета.At the end of proteolysis, the lysate is brought to a boil, then the pH is adjusted to 6.0-7.0 by the addition of phosphoric acid and filtered while hot through the beta cloth.
Прозрачный раствор высушивают известными методами, например на распылительной сушилке.The clear solution is dried by known methods, for example on a spray dryer.
Выход пептона - 50 г из 1 кг легких.Peptone yield - 50 g from 1 kg of lungs.
Предмет изобретени Subject invention
Способ получени ингибитора протеаз путем автолиза измельченного животного сырь , отделени жмыха, экстрагировани , подшелачиваии , обработки экстракта сульфатом аммони , нагревани , подшелачивани раствора, фильтрации, высушивани , отличающийс тем, что, с целью повышени выхода целевого продукта с одновременным получением гепарина и пептона, после автолиза экстракт обрабатывают водой и перед нагреванием осадок обрабатывают 0,65 в. раствором сол ной кислоты, жмых обрабатывают хлористым натрием сThe method of producing a protease inhibitor by autolysis of crushed animal raw materials, separating the cake, extracting, alkalinizing, treating the extract with ammonium sulfate, heating, alkalinizing the solution, filtering, drying, characterized in that, in order to increase the yield of the target product while producing autolysis extract is treated with water and before heating the precipitate is treated with 0.65 in. solution of hydrochloric acid, cake is treated with sodium chloride
последующей обработкой осадка ацетатом кали , далее осадок после извлечени гепарина охлаждают, обрабатывают водой и известным способом выдел ют пептон.After the precipitate is treated with potassium acetate, the precipitate after heparin extraction is cooled, treated with water and peptone is separated in a known manner.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU1612362A SU377159A1 (en) | 1970-12-31 | 1970-12-31 | METHOD OF OBTAINING PROTEAS INHIBITOR |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU1612362A SU377159A1 (en) | 1970-12-31 | 1970-12-31 | METHOD OF OBTAINING PROTEAS INHIBITOR |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU377159A1 true SU377159A1 (en) | 1973-04-17 |
Family
ID=20463846
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU1612362A SU377159A1 (en) | 1970-12-31 | 1970-12-31 | METHOD OF OBTAINING PROTEAS INHIBITOR |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU377159A1 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4216293A (en) | 1973-10-05 | 1980-08-05 | Laboraton Derivati Organici, S.p.A. | Extracting protease-inhibitor from animal tissue containing same |
-
1970
- 1970-12-31 SU SU1612362A patent/SU377159A1/en active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4216293A (en) | 1973-10-05 | 1980-08-05 | Laboraton Derivati Organici, S.p.A. | Extracting protease-inhibitor from animal tissue containing same |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US3770720A (en) | Process for the extraction of alkali salts of deoxyribonucleic acid from animal organs | |
US2583096A (en) | Process for the production of high viscosity hyaluronic acid | |
US2331619A (en) | Process for extraction of vegetable proteins | |
US3936375A (en) | Process for dewatering a proteinaceous, aqueous sludge and for removing and recovering precipitating agents from a precipitate containing proteinaceous substances | |
SU377159A1 (en) | METHOD OF OBTAINING PROTEAS INHIBITOR | |
CN106866812B (en) | Method for extracting multiple urine proteins from urine of women | |
US3016331A (en) | Purification of heparin | |
US4315923A (en) | Process for the production of organ extracts with high herparin content | |
SU1138410A1 (en) | Method for isolating thermostable placentar alkaline phosphatase | |
US3262854A (en) | Method for the recovery of heparin | |
US2954321A (en) | Process for preparing heparin | |
US2779706A (en) | Insulin extraction | |
SU539507A3 (en) | Method for producing glycopeptide | |
KR100443785B1 (en) | Producting method of silk amino acid | |
SU1227199A1 (en) | Method of producing pustulan | |
US3201382A (en) | Process for preparing a biochemically active polypeptide from sheep pituitary growthhormone | |
US2872319A (en) | Preparation of mixtures of amino acids | |
FI65073B (en) | FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV HEPARIN | |
KR100789405B1 (en) | Method of producing silk tyrosine | |
RU2579313C1 (en) | Method for producing agent for prostate functional recovery | |
SU351545A1 (en) | Jaashgno-TNHNk ^; G: 1: D | B * <B; 1IOT1-CL I | |
KR860001423B1 (en) | Process for preparation of corn gluten | |
DE950594C (en) | Method for obtaining heparin | |
RU2115662C1 (en) | Method of preparing hyaluronic acid | |
DE719026C (en) | Process for the production of preparations containing the circulatory hormone kallikrein |