SU351545A1

SU351545A1 - Jaashgno-TNHNk ^; G: 1: D | B * <B; 1IOT1-CL I

Info

Publication number: SU351545A1
Application number: SU1321751A
Authority: SU
Original assignee: В. Я. Никитин , Л. Ф. Панченко; Московский ордена Ленина медицинский институт имени Н. И. Пирогова

Description

Изобретение относитс к области медицины и касаетс методов получени очищенных ферментов, а именно цитохрома С, который может быть использован в качестве лечебного препарата.The invention relates to the field of medicine and concerns methods for the production of purified enzymes, namely cytochrome C, which can be used as a therapeutic drug.

Известен способ получени цитохрома С путем экстракции животного сырь в кислой среде с последующей адсорбцией и элюацией целевого продукта.A known method for producing cytochrome C by extracting animal raw materials in an acidic medium, followed by adsorption and elution of the target product.

Указанный способ не обеспечивает удовлетворительного выхода цитохрома С и приводит к получению препарата недостаточно высокого качества.This method does not provide a satisfactory yield of cytochrome C and results in a product of insufficient quality.

Целью изобретени вл етс увеличение выхода и улучшение качества цитохрома С. The aim of the invention is to increase the yield and improve the quality of cytochrome C.

Дл этого первую стадию экстракции сырь провод т при нейтральном значении рН, равном 7,0-7,5. Далее процесс ведут известными приемами.For this, the first stage of raw material extraction is carried out at a neutral pH of 7.0-7.5. Next, the process is conducted by well-known techniques.

Пример. 10 /сг свежих гов жьих сердец измельчают и заливают 10 л воды, содержащей 0,5 г этилендиаминтетрауксусной кислоты . Добавлением 0,1 н. раствора едкого натра довод т рН смеси до 7,5, перемешивают и через 15 мин отжимают на црессе. К остатку добавл ют 10 л воды с этилендиаминтетрауксусной кислотой, и концентрированным раствором лимонной кислоты довод т значение рН смеси до 5,0. После двухчасового неремещивани при комнатной темнературе смесь снова отжимают ч прессе и приливают к полученному экстракту 0,1 н. раствор едкого натра до значени рН 7,5. Выпавщий осадок отдел ют фильтрованием, а к фильтрату при перемешивании добавл ют амберлит в количестве 10 г сухого ионита на 1 л экстракта. Смесь перемешивают 10-15 лшн, отстаивают 1-2 час, раствор сливают, а осадок нромывают декантацией дистиллированной водой. Промытый ионит с адсорбированным цитохромом С обрабатывают .в течение 10 мин раствором поваренной соли, вз тым в количестве 2,5% от объема исходного экстракта. Элюат диализируют и затем фракционируют сульфатом аммони при рН 7,5 в пределах 80-100% насыщени . Фракцию, собранную после центрифугировани при 6000 об/мин, раствор ют в 50 мл воды и диализируют. После диализа раствор лиофилизируют. Выход- 2,5 г сухого цитохрома С.Example. 10 / cg of fresh beef hearts are crushed and 10 liters of water containing 0.5 g of ethylenediaminetetraacetic acid are poured. Adding 0.1 n. The caustic soda solution is adjusted to pH 7.5, stirred and squeezed out on a press after 15 minutes. To the residue was added 10 l of water with ethylenediaminetetraacetic acid, and the pH of the mixture was adjusted to 5.0 with a concentrated solution of citric acid. After two hours of non-stirring at room temperature, the mixture is pressed again to the press and poured onto the resulting extract with 0.1N. caustic soda solution to pH 7.5. The precipitated precipitate is separated by filtration, and amberlite is added to the filtrate with stirring in an amount of 10 g of dry resin to 1 l of extract. The mixture is stirred for 10-15 h, settled for 1-2 hours, the solution is drained, and the precipitate is washed by decantation with distilled water. The washed ion exchanger with adsorbed cytochrome C is treated for 10 minutes with a solution of sodium chloride, taken in an amount of 2.5% of the volume of the initial extract. The eluate is dialyzed and then fractionated with ammonium sulfate at pH 7.5 within 80-100% of saturation. The fraction collected after centrifugation at 6000 rpm is dissolved in 50 ml of water and dialyzed. After dialysis, the solution is lyophilized. The yield is 2.5 g of dry cytochrome C.

Предмет изобретени Subject invention

Способ получени цитохрома С путем экстракции водой л-сивотного сырь при кислом значении рН с последующей адсорбцией и элюацией целевого продукта, отличающийс тем, что, с целью увеличени выхода цитохрома С и улучшени его качества, сырье предпарительно экстрагируют при нейтральном значении рН н далее ироцесс ведут известными приемами.The method of obtaining cytochrome C by extracting the crude animal with water at an acidic pH value, followed by adsorption and elution of the target product, characterized in that, in order to increase the yield of cytochrome C and improve its quality, the raw material is pre-extracted at neutral pH and then the process is famous tricks.