SU371704A1 - A METHOD OF OBTAINING L-GLUTAMINASE - Google Patents
A METHOD OF OBTAINING L-GLUTAMINASEInfo
- Publication number
- SU371704A1 SU371704A1 SU1620861A SU1620861A SU371704A1 SU 371704 A1 SU371704 A1 SU 371704A1 SU 1620861 A SU1620861 A SU 1620861A SU 1620861 A SU1620861 A SU 1620861A SU 371704 A1 SU371704 A1 SU 371704A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- acetone
- glutaminase
- enzyme
- culture
- obtaining
- Prior art date
Links
- 102100011353 GLS2 Human genes 0.000 title description 2
- 101700039345 GLS2 Proteins 0.000 title description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000009127 Glutaminase Human genes 0.000 description 2
- 108010073324 Glutaminase Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229960002743 Glutamine Drugs 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L Manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M Monopotassium phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241001645955 Pseudomonas chlororaphis subsp. aureofaciens Species 0.000 description 1
- 241000209149 Zea Species 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000005824 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L magnesium sulphate Substances [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising Effects 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Description
1one
Изо15ретение ютно ситс к области медицины .Identification of a untreated medicine to the field of medicine.
Известен способ получени L-тлютаминазы путем обработки клеток продуцента ацетоном с последующей экстракцией БОДОЙ и выделением фермента из экстракта фракциовированием органическими растворител ми.A known method for producing L-tlutaminase is by treating the producer cells with acetone, followed by BODA extraction and isolation of the enzyme from the extract by fractionation with organic solvents.
Целью изобретени вл етс расширение источниК01В получени фермента.The aim of the invention is to expand the source of the production of the enzyme.
Достигаетс это тем, что в качестве лродуцанта используют штамм АТСС 13985 Pseudomonas aureo.fac.iens.This is achieved by using the ATCC strain 13985 Pseudomonas aureo.fac.iens as a producer.
Пример 1. Выращенную при температуре 30°С скощенную а:гар1овую культуру из Pseudotnonas aureofaciens АТСС 13985 смывают 4,0 см 0,9%-ного |Стерильного раствора NaCl. 100 см стерильного 2%-ного (по весу) фильтрованного до (прозрачности раствор кукурузы в замочной воде (рН 7,0) заражают 2,0 см полученной суспензии, содержащей бактерии, и выдерживают в колбе Эрленмейера объемом 1 л в течение 8 час при температуре 30°С на мащине дл встр хивани . Полученна таким образом культура, выращенна на качалке, служит в качест1ве за равочиого материала дл ферментных культур.Example 1. Fast-grown a: a garment culture from Pseudotnonas aureofaciens ATCC 13985 grown at a temperature of 30 ° C was washed with 4.0 cm of 0.9% NaCl sterile solution. 100 cm sterile 2% (by weight) filtered until (transparency of the corn solution in the castle water (pH 7.0) is contaminated with 2.0 cm of the resulting suspension containing bacteria, and kept in an Erlenmeyer flask with a volume of 1 l for 8 hours at a shaking temperature of 30 ° C. The thus-obtained culture grown on a rocking chair serves as a good material for enzyme cultures.
Затем берут 8 л питательного растовора (на водоправюдной воде) следующего состава (г):Then take 8 liters of nutrient dilution (in water and water) of the following composition (g):
L-глютаминава кислота 64, глицерин 48, молочиа кислота 24, К2НР04 9,2, КН2РО4 5,05, MgSO4 1,12, FeS04 0,048, MnSO4 0,048, NaCl 0,048. С ломощью 1 н. натрового щелока довод т значение рН до 7,0, стерилизуют ь стекл нном ферментере емкостью IQ л в течение 30 мин П1ри 115°С, и 1после охлаждени заражают 25 см 1выращенной на качалке культуры Pseudomonas aureofaciens АТСС 13985.L-glutamine acid 64, glycerin 48, molochic acid 24, K2HP04 9.2, KH2PO4 5.05, MgSO4 1.12, FeS04 0.048, MnSO4 0.048, NaCl 0.048. With a ram 1 n. The pH of the sodium hydroxide solution was adjusted to 7.0, sterilized with a glass fermentor with a capacity of IQ L for 30 minutes at a temperature of 1 ° C at 115 ° C, and after cooling down, it was infested with 25 cm 1 of a rosetted Pseudomonas aureofaciens ATCC 13985 culture.
Ферментационную исходную смесь подвергают аэрации при температуре 30°С четырьм литрами воздуха в минуту при скорости вращени мещалки 200 об/мин. Через 5-6 час значение рН ферментной культуры мен етс сThe fermentation mixture is aerated at 30 ° C with four liters of air per minute at a rotation speed of 200 r / min. After 5-6 hours, the pH of the enzyme culture changes with
7,0 на 7,5. В течение дальнейщих 14 час в растущую культуру (ВВОДЯТ 1,5 л/мин углекислого газа (С02), в результате чего значение рН повыщаетс до 8,0. Активность L-глютаминазы культурного раствора составл ет 8,3 ед/см.7.0 to 7.5. For a further 14 hours in a growing culture (INPUT 1.5 l / min carbon dioxide (C02), resulting in a pH value rising to 8.0. The activity of L-glutaminase culture solution is 8.3 U / cm.
Клетки бактерий центрифугируют, затем из ку ьтурального бульона в дистиллированной воде вторично суспендируют до объема 0,32 л. Дл ко-агул ции бактерий суспензию вливают в 8 л ацетона, добавл ют затем еще 4 л ацетона , и коагулированному клеточному материалу дают осадитьс . Затем оставшийс наверху раствор декантируют, осадок П1ромывают свежим ацетоном и сущат в шакуумеBacteria cells are centrifuged, then from cultural broth in distilled water is again suspended to a volume of 0.32 l. To coagulate the bacteria, the suspension is poured into 8 liters of acetone, then another 4 liters of acetone is added, and the coagulated cellular material is allowed to settle. Then the remaining solution at the top is decanted, the precipitate is rinsed with fresh acetone and existed in shakuma
при темперагуре 30°С. При этом получают 36,6 г сухого клеточного материала с активностью 1,-глютаМ иназы 1,63 ед1мг.at a temperature of 30 ° C. You get 36.6 g of dry cellular material with an activity of 1, GlutaM inazy 1.63 edmg.
Пример 2. К 8 л культурального бульона, полученного как ъ примере1, при энергичБом размешИваиии добавл ют 8 л ацетома. Коагулированному клеточному материалу дают осадитьс , затем ирозрачный оставшийс наверху раствор декаит ируют, осадок дважды промывают 4 л овежего ацетона и еще раз незначительным количеством ацетона, и затем сушат его в вакууме три температуре 30°С. Получают 39 г сухого клеточного материала с активностью /.-1глютаминазы 1,2 ед/мг.Example 2. To 8 l of culture broth obtained as in Example 1, 8 l of acetome are added with vigorous stirring. The coagulated cell material is allowed to precipitate, then the clear solution remaining at the top is decanted, the precipitate is washed twice with 4 liters of fresh acetone and once again with a small amount of acetone, and then dried in vacuum at a temperature of 30 ° C. Get 39 g of dry cellular material with an activity of / .-1 glutaminase 1.2 u / mg.
Пример 3. Получение сырой глютаминазы посредством осаждени ацетоно1М. 1200 г клеточного Материала с 1,6 ед/мг вещества суспендируют в 21 л цитратного буфера со Значением рН 5,0, размешивают в течение 2 час при комнатной температуре и затем, Охлажда , дентрнфугируют (при 20 000 g. Остающийс H-aiEepxy раствор смешивают с тем же количеством ацетона и вьгпадающий при этом Осадок, после отстаивани в течение 1 час, центрифугируют лри 3000 об/мин, промывают ацетоном и сушат.Example 3. Preparation of crude glutaminase by precipitation of acetone-1M. 1200 g of cell material with 1.6 units / mg of substance are suspended in 21 l of citrate buffer with a pH value of 5.0, stirred for 2 hours at room temperature, and then cooled, detrained (at 20,000 g. The remaining H-aiEepxy solution mixed with the same amount of acetone and the precipitate falling out at the same time, after settling for 1 hour, centrifuged at 3000 rpm, washed with acetone and dried.
Экстракцию клеток повтор ют. Выход: 321,2 г или 4,2 ед/мг или 75,2%.Extraction of cells is repeated. Yield: 321.2 g or 4.2 U / mg or 75.2%.
П р е д м е т изобретени PREDMET of the invention
Способ получени L-lглютaминaзы путем обрабопки клеток продуцента а1цет01нам с последующей зкстракцией водой и выделением фермента из эмстракта фракционированием органическими растворител ми, отличающийс тем, что, с целью расширени источвиков получени (фермента-, IB Качестве продуцента используют щтамм АТСС 13985 Pseudomonas aureofaciens.The method of producing L-lglutaminase by treating producer cells with acetum with subsequent extraction with water and isolating the enzyme from the extract with fractionation with organic solvents, characterized in that, in order to expand the sources of production (enzyme-, IB Producer uses ATTS 13985 Pseudomontom for the quality of the producer, enzyme-ATCC 138985
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19702007792 DE2007792A1 (en) | 1970-02-20 | 1970-02-20 | Process for the production of an L-glutaminase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU371704A1 true SU371704A1 (en) | |
| SU371704A3 SU371704A3 (en) | 1973-02-22 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4933281A (en) | Method for producing rhamnose | |
| JPS60251898A (en) | Preparation of hyaluronic acid by fermentation method | |
| CN102206616A (en) | Bacillus cereus fermentation method for producing phosphatidase C | |
| JPH0670754A (en) | Biotechnological preparation of pseudomonas aeruginosa and l-rhamnose and use thereof | |
| CN108203729B (en) | Preparation method of kelp antioxidant peptide | |
| JPH02234689A (en) | Production of hyaluronic acid | |
| RU2069229C1 (en) | Method of $$$-iron preparing | |
| SU371704A1 (en) | A METHOD OF OBTAINING L-GLUTAMINASE | |
| RU2397247C1 (en) | Lipase biosynthesis method | |
| RU2518282C1 (en) | Nutrient medium for submerged cultivation of tularemia microbe | |
| US3663373A (en) | Process for the preparation of iodinin | |
| CN110819575A (en) | Culture method of bacillus for producing nattokinase | |
| RU2748947C1 (en) | Method for obtaining polysaccharide additive based on food xanthan gum | |
| RU2101354C1 (en) | Method of bacillus anthracis nucleic acid preparing | |
| JPH0549491A (en) | Method for producing polysaccharides from fine algae | |
| SU1661214A1 (en) | Strain of bacteria serratia marcescens- a producer of endonuclease | |
| CN109312298B (en) | Thiamine miehei bacillus strain and application thereof | |
| RU1549227C (en) | Method for producing a complex of lytic enzymes | |
| RU1566532C (en) | Method for producing animal anthrax vaccine | |
| RU2224018C2 (en) | Method for preparing biological stimulating agent | |
| SU1125250A1 (en) | Strain sterptomyces lavendulae inmi a-82 producer of cholesteroloxydase | |
| JPH04316495A (en) | Increasing process for riboflavin content in spray drying product through riboflavin fermentation | |
| JPH06165670A (en) | Method for multiplying natural enemy microorganism of nematode | |
| RU2104014C1 (en) | Composition of nutrient medium for bifidobacterium culturing | |
| KR880002315B1 (en) | Culture method of streptococcus sp. |