SU283950A1

SU283950A1 -

Info

Publication number: SU283950A1
Application number: SU1115336A
Authority: SU
Inventors: Кнуд Аунструп Иностранец; фирма Иностранна; Терапеутиск Лабораториум Дани Ново

Description

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ КОАГУЛЯЦИИ БЕЛКОВ МОЛОКА ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ СЫРАMETHOD OF OBTAINING ENZYME PRODUCT FOR COAGULATION OF MILK PROTEINS IN CHEESE PRODUCTION

Дл коагул ции белков молока при производстве сыра обычно примен ют сычужные ферменты, добываемые из тел чьих желудков. Эти ферменты отвечают предъ вл емым к ним требовани м, обеспечивают достаточный выход сыра и хорошее качество его. Однако возрастающий спрос на них опережает возможности . Это заставл ет изыскивать микроорганизмы , продуцирующие ферментные препараты , коагулирующие белки молока.Rennet enzymes extracted from the calf stomachs are commonly used for the production of cheese to coagulate milk proteins. These enzymes meet the requirements imposed on them, provide sufficient cheese yield and its good quality. However, the increasing demand for them outpaces the possibilities. This forces microorganisms that produce enzyme preparations that coagulate milk proteins.

Такие микроорганизмы, например Bacillus subtilis и Aspergillus saitoi, известны.Such microorganisms, such as Bacillus subtilis and Aspergillus saitoi, are known.

Известен также способ получени ферментного .препарата, коагулирующего белки молока , путем выращивани указанных выще микроорганизмов глубинным или поверхностным способом на питательной среде, содержащей источники углерода с добавлением необход мых минеральных солей и стимул торов роста. : Дл получени ферментного препарата, обеспечивающего более качественное проведение процесса коагул ции и изготовление сыра с высокими органолептическими и биохимическими сворютвами в качестве продуцирующих ферментов используют щтаммы группы Mucor miehei Куне и Эмерсона, из которых предпочтительным вл етс щтамм Mucor miehei Куне и Эмерсона CBS 370.65. Этот щтаммThere is also known a method for producing an enzyme preparation coagulating milk proteins by growing the above microorganisms in a deep or superficial way on a nutrient medium containing carbon sources with the addition of the necessary mineral salts and growth stimulants. : To obtain an enzyme preparation that provides a better coagulation process and the manufacture of cheese with high organoleptic and biochemical batches, Mucor miehei Kuhne and Emerson groups are used as producing enzymes, of which Maceorne Kuhne and Emerson CBS 370.65 are preferred. This code

был выделен из компоста, собранного в Копенгагене в сент бре 1965 г., идентифицирован Центральным бюро в Баарне (Голланди ) как вход щий в группу Mucor miehei Куне н Эмерсона и зарегистрирован под номером 370.65.It was isolated from the compost collected in Copenhagen in September 1965, identified by the Central Bureau in Baarna (Holland) as part of the Mucor miehei Cooney n Emerson group and registered under number 370.65.

Штамм характеризуетс следующими морфологическими признаками. Turf короткий (высота 2-3 мм), вначале белый, а затем- от светлого мышино-серого до темного мыщино-серого цвета. Sporangiophores, диаметр 6-10 ммк. Sporangia сферичекие, диаметр 25-60 ммк. Columellae от полукруглых до овальных, диаметр 20-40 ммк. Sporangiospores бесцветные от полущаровидных до эллиптических (размеры 3-5X4-6 ммк). Zygospores многочисленные, полущаровидные, бородавчатые от желтоватого до красноватого цвета в молодом возрасте, черноватые в зрелом возрасте (диаметр 30-45 ммк). Azygospores имеютс . Gemmae не известны. Рост происходит при температуре 30-55°С н очень быстрый-при 40°С.The strain is characterized by the following morphological features. Turf is short (height 2-3 mm), initially white, and then from light mouse gray to dark mouse gray. Sporangiophores, diameter 6-10 microns. Sporangia spherical, diameter 25-60 MMK. Columellae from semicircular to oval, diameter 20-40 mcc. Sporangiospores are colorless from half-shaped to elliptical (sizes 3-5X4-6 mmk). Zygospores are numerous, half-shaped, warty, yellowish to reddish at a young age, blackish at a mature age (diameter 30-45 mmk). Azygospores are available. Gemmae are not known. Growth occurs at a temperature of 30-55 ° C n very fast at 40 ° C.

Пример 1. Примен ют питательную среду следующего состава (в г/л): крахмал картофельный 40, соева мука 30, чменна мука 100 -и углекислый кальций 5. Соевое масло добавл ют в количестве 0,5 мл/л, Example 1. A nutrient medium of the following composition is used (in g / l): potato starch 40, soybean flour 30, barley flour 100 - and calcium carbonate 5. Soybean oil is added in an amount of 0.5 ml / l,

в три колбы Эрленмейера, емкостью при 500 мл кажда , внос т ,по 100 мл этой питательной среды и инокулируют суспензией спор Mucor mehei. Колбы выдерживают на качающемс столе 7 дней при температуре 30°С. Мицелий отфильтровывают и определ ют активность методом Кунитца.in three Erlenmeyer flasks, each with a capacity of 500 ml, 100 ml each of this medium are inoculated and inoculated with a spore suspension of Mucor mehei. The flasks are kept on a swinging table for 7 days at 30 ° C. Mycelium is filtered and Kunitz activity is determined.

Активность фермента (в единицах Кунитца на 1 л среды) составл ет: в первой колбе 15800, во второй - 17700, третьей - 15700.The enzyme activity (in units of Kunitz per liter of medium) is: in the first flask 15800, in the second - 17700, and in the third - 15700.

Пример 2. В чане дл посева готов т питательную среду, состо щую ,из 2 кг картофельного крахмала, 1,5 кг соевой муки, 5 кг чменной муки, 5 г вактераильной ам-илазы «NOVO 5000 SKB, 500 г углекислого кальци и около 40 л воды.Example 2. A nutrient medium is prepared in a sowing tank, consisting of 2 kg of potato starch, 1.5 kg of soy flour, 5 kg of barley flour, 5 g of NOVO 5000 SKB vakteral amylase, 500 g of calcium carbonate and about 40 liters of water.

Смесь нагревают до 70°С и выдерживают при этой температуре 30 мин. Затем ее кип т т острым паром в течение 90 мин при 120°С. Охлаждают до 34°С, инокули,руют спорами .из коЛбы Фернбаха.The mixture is heated to 70 ° C and maintained at this temperature for 30 minutes. It is then boiled with live steam for 90 minutes at 120 ° C. Cooled to 34 ° C, inoculi, ruled with spores. Of the Fernbach cells.

Дл выращивани спор в колбу предварительно помещают среду, состо щую из 4 г дрожжевого экстракта, 1 г К2НР04, 0,5 г §504-71 20, 15 г растворимого крахмала, 20 г агара и 100 мл воды. Среду инокулируют лиофилизированной культурой Mucor miehei и выращивают при 40°С до образовани спор.To grow the spores, a medium consisting of 4 g of yeast extract, 1 g of K2HP04, 0.5 g of §504-71 20, 15 g of soluble starch, 20 g of agar and 100 ml of water are placed in a flask. The medium is inoculated with the freeze-dried Mucor miehei culture and grown at 40 ° C until spore formation.

После выращивани эту среду перемешивают со скоростью 240 об/мин и аэрируют со скоростью 60 л/мин. Длительность ферментации 48 час.After cultivation, this medium is stirred at a speed of 240 rpm and aerated at a rate of 60 l / min. The duration of fermentation 48 hours.

Содержимое чана перенос т в основной ферментационный чан, в котором находитс пи2839SOThe contents of the tank are transferred to the main fermentation tank, in which pi2839SO is located.

тательна среда, состо ща из 8 кг картофельного крахмала, 6 кг соевой муки, 20 кг чмеш-юй муки, 25 г бактериальной амилазы «NOVO 5000 SKB и 2 кг углекислого кальци . 5 Среду разливают в бутылки и стерилизуют так же, как среду в чане дл инокул ции. Конечный объем среды составл ет 200 л. После инокул ции среду перемещивают со скоростью 400 об/мин и аэрируют со ско0 ростью 0,2 . Дл предотвращени вспенивани внос т соевое масло. Во врем ферментации величина рН не мен етс и равна 6,5. Активность полученного фермента 2580 еди5 ниц Кунитца па 1 л среды.A rich medium consisting of 8 kg of potato starch, 6 kg of soy flour, 20 kg of mixed flour, 25 g of bacterial amylase NOVO 5000 SKB and 2 kg of calcium carbonate. 5 The medium is bottled and sterilized in the same way as the medium in the inoculum tank. The final medium volume is 200 liters. After inoculation, the medium is moved at a speed of 400 rpm and aerated at a speed of 0.2. Soybean oil is added to prevent foaming. During fermentation, the pH does not change and is 6.5. The activity of the obtained enzyme 2580 units of Kunitz pa 1 l medium.

Пример 3. В колбе Э рленмейера, емкостью по 500 мл кажда , внос т по 100 мл питательной среды (состав приведен в таблице ) и инокулируют ее суспензией спор, полученных при культивировании Mucor miehei на среде, состо щей из 4 г дрожжевого экстракта , 1 г К2НРО4, 0,5 г MgSO4-7n2O, 15 г растворимого крахмала, 20 г агара и 1000 мл воды , в течение 2-3 дней при температуреExample 3. In a Ehlenmeyer flask with a capacity of 500 ml each, 100 ml of the nutrient medium (the composition is given in the table) are added and spore suspension obtained by cultivating Mucor miehei on a medium consisting of 4 g of yeast extract, 1 is inoculated with it. g K2HPO4, 0.5 g MgSO4-7n2O, 15 g soluble starch, 20 g agar and 1000 ml of water, for 2-3 days at a temperature

5 40°С.5 to 40 ° C.

Инокулированную среду выращивают при 30°С на вращающемс со скоростью 240 об/мин столе (продолжительность выращивани 6,7 и 8 дней).The inoculated medium is grown at 30 ° C on a table rotating at a speed of 240 rpm (the growth time is 6.7 and 8 days).

0 Активность коагулирующих молоко ферментов определ ют по Кунитцу.0 The activity of milk coagulating enzymes is determined by Kunitz.

Из всех примененных сред только крахмал разложилс при воздействии -бактериальной амилазы до стерилизации (см. таблицу).Of all the media used, only starch decomposed upon exposure to α-bacterial amylase prior to sterilization (see table).

П рймёр 4. Коагулирующие молоко ферменты при применении Mucor pusillus получены в количестве около 300 единиц Кунитца на 1 л среды 95 см, а при применении Mucor miehei CBS 370.65 количество полученных энзимов составило примерно 10000 единиц Кунитца на 1 л среды или значительно больше.Size 4. Milk coagulating enzymes using Mucor pusillus were obtained in an amount of about 300 units of Kunitz per 1 liter of medium 95 cm, and with Mucor miehei CBS 370.65, the amount of enzymes obtained was about 10,000 units of Kunitz per 1 l of medium or significantly more.

При применении среды, состо щей из 10% сн того молока, 1% глюкозы, 0,1% дрожжевого экстракта и 0,005 М хлористого кальци , получены следующие результаты. Активность Mucor pusillus составл ет 900 единиц Ку нитца на 1 л среды, а активность Mucor miehei Using a medium consisting of 10% dried milk, 1% glucose, 0.1% yeast extract, and 0.005 M calcium chloride, the following results were obtained. Mucor pusillus activity is 900 quits units per liter of medium, and Mucor miehei activity

CBS 370.65-5500 единиц Кунитца на 1 Л среды .CBS 370.65-5500 units of Kunitz per 1 L of medium.

Пример 5. Поверхностное культивирование .Example 5. Surface cultivation.

В Колбах Эрленмейера емкостью 500 МЛ стерилизуют 25 г смеси пшеничных отрубей и воды (1:1) при нагревании до 120°С в течение 45 мин. После охлаждени содержимое инокулируют спорами Mucor miehei CBS 370.65. Выращивают 3 дн при температуре 40°С. После этого отруби экстрагируют 200 мл воды. Активность экстракта составл ет 4500 единиц Кунитца на 1 л среды. Предмет изобретени Способ -получени ферментного препарата коагул ции белков молока при производве сыра лутем выращивани продуц.нруюIX этот препарат, микроорганизмов глубинш или .поверхностным способом на питательй среде, содержащей источники углерода с давлением необходимых минеральных солей , ,. -.----.j,,«v.«ii«x4fc , стимул торов роста, отличающийс тем, что, целью получени ферментного препарата, обеспечивающего более качественное проведение процесса коагул -ции и изготовление сыра :с высокими органолептическими и биохими;Ческими свойствами, в .качестве продуцирующих ферменты микроорганизмов используют штаммы группы Mucor miehei Куне и Эмерсона . 2. Способ но п. 1, отличающийс тем, что, из группы Mucor miehei Куне и Эмерсона i,/jriiiiui ibii vji iiiiciici ххупсл n k7ivlcUCUHa iHCпользуют предпочтительно штамм Mucor miehei Куне и Эмерсона CBS 370.65.In 500 ML Erlenmeyer flasks sterilize 25 g of a mixture of wheat bran and water (1: 1) by heating to 120 ° C for 45 minutes. After cooling, the contents are inoculated with Mucor miehei CBS 370.65 spores. Grown 3 days at a temperature of 40 ° C. After that, the bran is extracted with 200 ml of water. The extract activity is 4500 Kunitz units per liter of medium. The subject of the invention is a method for obtaining an enzyme preparation for coagulating milk proteins during the production of cheese by growing this product, microorganisms deeply or in a superficial manner on a nutrient medium containing carbon sources with the pressure of the necessary mineral salts,. -.----. j ,, "v." ii "x4fc, growth stimulants, characterized in that, the purpose of obtaining an enzyme preparation that provides a better quality of the coagulation process and the manufacture of cheese: with high organoleptic and biochemistry; The chesky properties of the microorganism-producing microorganisms are used in the Mucor miehei Kuhne and Emerson strains. 2. Method of claim 1, characterized in that, from the group Mucor miehei Kune and Emerson i, jriiiiui ibii vji iiiiciici x hoops n k7ivlcUCUHa iHC preferably use the Mucor miehei strain Kune and Emerson CBS 370.65.