SU242777A1 - METHOD OF OBTAINING OPTICALLY ACTIVE - Google Patents
METHOD OF OBTAINING OPTICALLY ACTIVEInfo
- Publication number
- SU242777A1 SU242777A1 SU1101381A SU1101381A SU242777A1 SU 242777 A1 SU242777 A1 SU 242777A1 SU 1101381 A SU1101381 A SU 1101381A SU 1101381 A SU1101381 A SU 1101381A SU 242777 A1 SU242777 A1 SU 242777A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- methyl
- methoxy
- fermentation
- hours
- solution
- Prior art date
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 56
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 56
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 41
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N methylene dichloride Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 13
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 9
- 229940043265 methyl isobutyl ketone Drugs 0.000 description 9
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 8
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 8
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 8
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OSVMTWJCGUFAOD-KZQROQTASA-N Formestane Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1O OSVMTWJCGUFAOD-KZQROQTASA-N 0.000 description 6
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 6
- 241000582914 Saccharomyces uvarum Species 0.000 description 6
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 6
- 125000004432 carbon atoms Chemical group C* 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 241000586779 Protaminobacter Species 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940072033 potash Drugs 0.000 description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Substances [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 235000015320 potassium carbonate Nutrition 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 4
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 4
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- FHDRSWJKWSQLTI-BBCBXFPWSA-N COC1CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H]1C3=C(CC[C@@H]21)C=C(O)C=C3 Chemical compound COC1CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H]1C3=C(CC[C@@H]21)C=C(O)C=C3 FHDRSWJKWSQLTI-BBCBXFPWSA-N 0.000 description 3
- 241001123227 Saccharomyces pastorianus Species 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 3
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 3
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 241000186426 Acidipropionibacterium acidipropionici Species 0.000 description 2
- 241000122824 Aspergillus ochraceus Species 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 2
- 229940097012 Bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 2
- 241000193417 Brevibacillus laterosporus Species 0.000 description 2
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 2
- 229960003563 Calcium Carbonate Drugs 0.000 description 2
- 229940041514 Candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L Chromic acid Chemical compound O[Cr](O)(=O)=O KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 241000228150 Penicillium chrysogenum Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241000203720 Pimelobacter simplex Species 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000002538 fungal Effects 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 hydroxyl amino Chemical group 0.000 description 2
- 235000013310 margarine Nutrition 0.000 description 2
- 239000003264 margarine Substances 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 2
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 2-methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPVPOXJGMZMBNO-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-7-methyl-1,2,3,4-tetrahydronaphthalene Chemical compound C1CCCC2=C1C=C(OC)C(C)=C2 NPVPOXJGMZMBNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- RNKGEVWLVUMKGE-UHFFFAOYSA-N C(Cl)(Cl)(Cl)Cl.CCl Chemical compound C(Cl)(Cl)(Cl)Cl.CCl RNKGEVWLVUMKGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223211 Curvularia lunata Species 0.000 description 1
- 241000125240 Dimorpha Species 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L Dipotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- OTCKOJUMXQWKQG-UHFFFAOYSA-L Magnesium bromide Chemical compound [Mg+2].[Br-].[Br-] OTCKOJUMXQWKQG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M Monopotassium phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000721603 Mycoplana Species 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- 235000003534 Saccharomyces carlsbergensis Nutrition 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000256856 Vespidae Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- JEHJZEUPJDGOQW-UHFFFAOYSA-N [Mg].C(=C)Cl Chemical compound [Mg].C(=C)Cl JEHJZEUPJDGOQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- SLUNEGLMXGHOLY-UHFFFAOYSA-N benzene;hexane Chemical compound CCCCCC.C1=CC=CC=C1 SLUNEGLMXGHOLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- OAIVIYSBZFEOIU-UHFFFAOYSA-N chloroform;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.ClC(Cl)Cl OAIVIYSBZFEOIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N ethenol Chemical compound OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000001640 fractional crystallisation Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 229910001623 magnesium bromide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L magnesium sulphate Substances [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N monochloramine Chemical compound ClN QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 150000003338 secosteroids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 1
- 125000004417 unsaturated alkyl group Chemical group 0.000 description 1
Description
Изобретение относитс к области получени The invention relates to the field of
оптически активных антиподов р да стероидов.optically active antipodes of r yes steroids.
Предлагаемый способ состоит в том, чтоThe proposed method is that
стероидное оптическое неактивное соединениеsteroidal optical inactive compound
общей формулы:general formulas:
хоho
Y-СY-С
-Q-Q
// О// ABOUT
где С обозначает оптически неактивный углеродный атом, Q-группу СНаСНа- или -СНа-, X - водород, галоид, карбоксильную группу в свободной или этерифицированной форме или насыщенный или ненасыщенный алкильный радикал с 1-4 атомами углерода, который дополнительно может быть замещен галоидом или гидроксильной амино- или карбоксильной группой в свободной или функционально измененной форме, Y-остальную часть секостероида, включа кольца А и В, а также его функциональные производные по кетогрунпам , подвергают ферментативному превращению , например, с микрооргализмами или выделенными из них ферментами.where C denotes an optically inactive carbon atom, a Q-group of CHaCH- or -CHA-, X is hydrogen, a halogen, a carboxyl group in the free or esterified form, or a saturated or unsaturated alkyl radical with 1-4 carbon atoms, which can additionally be substituted by halogen or a hydroxyl amino or carboxyl group in free or functionally modified form, the Y-remaining part of the secosteroid, including rings A and B, as well as its functional derivatives on ketogranes, is subjected to enzymatic conversion, for example er, with micro-organisms or enzymes isolated from them.
Пример 1. Получение 3-метокси-8(14)секо-1 , 3, 5 (10), 9 (11)-экстратетраен-14а-ол17-она (13р-метил-14а-ОН-5М1 или 13а-метил17p-OH-SMi ) ферментацией грибками. а) Восстановление З-метокси-8 (14)-секо1 ,3,5(10), 9 (11)-эстратетраен-14, 17-диона (SM) посредством Aspergillus ochraceus (CBS- Даме).Example 1. Preparation of 3-methoxy-8 (14) seco-1, 3, 5 (10), 9 (11) -extra tetraen-14a-ol17-one (13p-methyl-14a-OH-5M1 or 13a-methyl17p- OH-SMi) by fungal fermentation. a) Reduction of 3-methoxy-8 (14) -seko1, 3.5 (10), 9 (11) -estratetraen-14, 17-dione (SM) by Aspergillus ochraceus (CBS-Dame).
Ферментаци идет с помощью грибковыхFermentation is carried out using fungal
щтаммов в колбах дл встр хивани .shtammov flasks for shaking.
Колбу Эрленмейера емкостью 2 л, наполненную 500 см питательного раствора из следующих веществ, %: 3 глюкозы; 1 жидкости дл замочки кукурузы; 0,2 NaiNOs; 0,1 КН2РО4;Erlenmeyer flask with a capacity of 2 liters, filled with 500 cm of nutrient solution of the following substances,%: 3 glucose; 1 liquid for corn corn; 0.2 NaiNOs; 0.1 KH2PO4;
0,05 MgSO4; 0,05 KCl; 0,002 FeSOi; 0,2 K2HPO4 стерелизуют нагреваниемВ течение 30 мин до 120°С и после охлаждени раствор засевают суспензией Aspergillus ochraceus (CBS), котора получаетс промыванием0.05 MgSO4; 0.05 KCl; 0.002 FeSOi; 0.2 K2HPO4 is sterilized by heating. Within 30 minutes to 120 ° C and after cooling, the solution is seeded with Aspergillus ochraceus (CBS) suspension, which is obtained by washing
культуры косого агара физиологическим раствором поваренной соли.culture of oblique agar physiological saline solution.
Взбалтывают предварительно культуру в течение 2 дней при 30°С (число колебаний 145 об/мин), перезасевают затем цо 50 сжз культуры в 10 колб дл ферментации емкостью по 2 л с 450 сжз такого же питательного раствора, взбалтывают их в течение 16 час при 30 °С, добавл ют в каждую колбу в стерильных услови х по 5 смз 2%-ного этанолового раствораShake the pre-culture for 2 days at 30 ° C (the number of vibrations 145 rev / min), then overwhelm with 50 liters of culture in 10 flasks for fermentation of 2 liters each and 450 liters of the same nutrient solution, shaken them for 16 hours at 30 ° C, added to each flask under sterile conditions, 5 cm 3 of a 2% ethanol solution
Ход ферментации контролируют с помощью хроматографии в тонком слое. Дл этого на пластинки из кизельгел по Шталю нанос т метилизобутилкетоновые экстракты проб из бродильного чана; пластины с рабочей поверхностью свыше 15 см про вл ют в системе хлороформа- ацетона 9:1, опрыскивают реактивом из 1 см концентрироваиной H2SO4 и 20 см 95%-ного этанола, сушат в течение 10 мин при 140°С и рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом свете. SMThe course of fermentation is controlled using chromatography in a thin layer. To do this, methylisobutyl ketone extracts of samples from a fermentation tank are applied to Kieselgel plates according to Stahl; Plates with a working surface of more than 15 cm are developed in a 9: 1 chloroform-acetone system, sprayed with a 1 cm reagent with concentrated H2SO4 and 20 cm of 95% ethanol, dried for 10 minutes at 140 ° C and examined in long-wave ultraviolet light . SM
13р-метил-14а-ОН-5М1 н 17a-OH-SMi 13р-метил-14р-ОН-8М1 и 17p-OH-SMi RF 0,92, окраска: красновато-желта 13p-methyl-14a-OH-5M1 n 17a-OH-SMi 13p-methyl-14p-OH-8M1 and 17p-OH-SMi RF 0.92, color: reddish yellow
RF 0,72, окраска: красновато-желта RF 0.72, color: reddish yellow
RF 0,63, окраска: темноватожелта RF 0,63, coloring: dark yellow
Соединенные исходные смеси ферментации экстрагируют дважды 2500 сжз метилизобутилкетона и экстракт при температуре ванны 45 °С сгуш,ают в вакууме приблизительно до 5 сжз. Концентрат очищают хроматографией препарата в тонком слое с применением кизельгел GF254 в качестве абсорбента и бензол-эфира уксусной кислоты 9:1 в качестве рабочей среды.The combined initial fermentation mixtures are extracted twice with 2500 srz methyl isobutyl ketone and the extract at a bath temperature of 45 ° C sgush, ay in vacuum to approximately 5 srz. The concentrate is purified by chromatography of the preparation in a thin layer using silica gel GF254 as an absorbent and benzene-ester of acetic acid 9: 1 as a working medium.
Видимую в коротковолновом ультрафиолетовом свете (основную) зону с величиной RF около 0,4 отдел ют, извлекают с помощью 100 см хлористого метилена при комнатной температуре, элюат сгущают при температуре ванны 25 °С и остаток перекристаллизовывают из 10 ч. диизопропилового эфира.A (main) zone visible in short-wave ultraviolet light with an RF value of about 0.4 is separated, extracted with 100 cm of methylene chloride at room temperature, the eluate is concentrated at a bath temperature of 25 ° C and the residue is recrystallized from 10 parts of diisopropyl ether.
Получают 13р-метил-14а-ОН-8М1; т. пл. 101/102°-103,5 °С, -f 47,8° (диоксан, с 1); 13:р-метил-14а-ОН-8М1 может получатьс при таких же экспериментальных услови х ферментацией с помощью Aspergillus niger (АТСС 9142).13p-methyl-14a-OH-8M1 is obtained; m.p. 101/102 ° -103.5 ° C, -f 47.8 ° (dioxane, s 1); 13: p-methyl-14a-OH-8M1 can be obtained under the same experimental conditions by fermentation with Aspergillus niger (ATCC 9142).
б)Восстановление SM посредством Rhizopus nigricaus (АТСС 9142).b) SM recovery using Rhizopus nigricaus (ATCC 9142).
. 13р-метил-14а-ОН-8М1 можно получить при экспериментальных услови х, описанных в примере 1 (а), ферментацией с помощью Rhisopus nigricaus (АТСС 6227b).. 13p-methyl-14a-OH-8M1 can be obtained under the experimental conditions described in Example 1 (a) by fermentation with Rhisopus nigricaus (ATCC 6227b).
в)Восстановление 8М посредством Penicillium notatum (NRRL 2284).c) Recovery of 8M by Penicillium notatum (NRRL 2284).
При экспериментальных услови х, описанных в примере 1 (а) из SM ферментацией посредством Penicillium notatum (NRRL 1982) можно получить 13р-метил-14а-ОН-8М1.Under the experimental conditions described in Example 1 (a) from SM, fermentation with Penicillium notatum (NRRL 1982) can produce 13p-methyl-14a-OH-8M1.
Пример 2. Получение 13(3-метил-14а-ОР18Mi ферментацией посредством дрожжей.Example 2. Getting 13 (3-methyl-14a-OP18Mi by fermentation by yeast.
а) Восстановление 8М посредством 8ассНагошусез cerevisiac (NRRL-Y-2250).a) Restoration of 8M through 8assNagosusez cerevisiac (NRRL-Y-2250).
Ферментаци идет с помощью дрожжей в колбах дл встр хивани .Fermentation is carried out with the aid of yeast in shake flasks.
стерилизуют и затем засевают суспензией 8аcharomices cerevisiac (NRRL-Y-2250), котора получаетс промыванием культуры косого агара физиологическим раствором поваренной соли . Взбалтывают предварительную культуру в течение суток при 30 °С (число колебаний 145 об1мин), перезасевают по 50 смз культуры в 4 колбы дл ферментации емкостью 2 л, наполненные кажда 450 сжз такого же питательного раствора, взбалтывают их в течение 6 час при 30°С, добавл ют в каждую колбу 5 см 2%-ного этанолового раствора 8М и провод т ферментацию в течение 20 час.sterilized and then seeded with a suspension of 8 Charomices cerevisiac (NRRL-Y-2250), which is obtained by washing the culture of oblique agar with physiological saline solution. Shake the pre-culture for a day at 30 ° C (the number of vibrations is 145 rpm), replicate 50 cm3 of culture into 4 flasks for fermentation with a capacity of 2 liters, filled with each 450 squeezers of the same nutrient solution, and shake them for 6 hours at 30 ° C A 5 cm 2% ethanol solution of 8 M is added to each flask and fermented for 20 hours.
Суспензии дл ферментации приготовл ют, как описано в примере 1 (а).Suspensions for fermentation are prepared as described in Example 1 (a).
Получают 13р-метил-14а-ОН-8М1; т. пл. 101/102-104 °С; «2° + 46,2° (диоксан, с 1)13p-methyl-14a-OH-8M1 is obtained; m.p. 101 / 102-104 ° C; "2 ° + 46.2 ° (dioxane, s 1)
264 21000.264 21,000.
б)Восстановление 8М посредством 8accharomyces cerevisiac (NCyC 1021).b) Recovery of 8M by 8accharomyces cerevisiac (NCyC 1021).
При описанных в примере 2 (а) услови х из SM ферментацией посредством 8accharomyces cerevisiac (NCYC 1021) получают 13р-метил14a-On-8Mi .Under the conditions described in Example 2 (a), SM from fermentation by 8accharomyces cerevisiac (NCYC 1021) yields 13 p-methyl 14a-On-8Mi.
в)Восстановление 8М посредством 8accharomyces carisbergensis (СВ8 1505).c) Recovery of 8M with 8accharomyces carisbergensis (CB8 1505).
При описанных в примере 2 (а) услови х из SM ферментацией посредством Saccharomyces carisbergensis (СВ8 1505) получают 13р-метил14a-On-SMi .Under the conditions described in Example 2 (a), SM from fermentation by Saccharomyces carisbergensis (CB8 1505) gives 13p-methyl14a-On-SMi.
г)Восстановление 8М посредством Saccharomyces pastorianus (Институт ферментной промышленности, Берлин).d) Recovery of 8M by Saccharomyces pastorianus (Institute for the Ferment Industry, Berlin).
При услови х, описанных в примере 2(а), но со временем ферментации 40 час, из 8М ферментацией посредством 8accharomyces pastorianus может быть получен 13р-метил-14аOH-SMi .Under the conditions described in Example 2 (a), but with a fermentation time of 40 hours, 13p-methyl-14aOH-SMi can be obtained from 8M fermentation by means of 8accharomyces pastorianus.
Пример 3. Получение 13р-метил-14а-ОН8Mi ферментацией посредством бактерий.Example 3. Getting 13R-methyl-14a-OH8Mi by fermentation by bacteria.
а) Восстановление 8М. посредством Bacillus esterificans (ВВА-Берлин).a) Recovery 8M. by Bacillus esterificans (BBA-Berlin).
Ферментаци идет посредством бактерий в колбах дл встр хивани . Колбу Эрленмейера емкостью 2 .д с 500 см питательного раствора из следующих веществ, %: 0,5 глюкозы, 0,2 жидкости дл замочки кукурузы; 0,1 экстракта дрожжей; 0,1 пептона (Мерк) стерилизуют и затем засевают суспензией Bacillus esterificans , которую получают промыванием культуры косого агара физиологическим раствором поваренной соли. Взбалтывают предварительную культуру в течение суток при 30 °С (число колебаний 145 o6JMUH.), перенос т по 50 CMS культуры в 4 колбы дл ферментации емкостью 2 л, кажда из которых наполнена 450 сжз такого же питательного раствора, взбалтывают эти колбы 4 час при 30 °С, добавл ют в каждую колбу 5 смз 2%-ного этанолового раствора 8М и провод т ферментацию еще 20 час.Fermentation is carried out by bacteria in shake flasks. An Erlenmeyer flask with a capacity of 2. d with a 500 cm nutrient solution of the following substances,%: 0.5 glucose, 0.2 liquid for maize locking; 0.1 yeast extract; 0.1 peptone (Merck) is sterilized and then seeded with a suspension of Bacillus esterificans, which is obtained by washing the culture of oblique agar with physiological saline solution. The pre-culture is shaken for 24 hours at 30 ° C (the number of oscillations is 145 o6JMUH.), 50 CMS cultures are transferred into 4 flasks for fermentation with a capacity of 2 liters, each of which is filled with 450 sec of the same nutrient solution, and these flasks are stirred for 4 hours at 30 ° C, 5 cm3 of a 2% 8M ethanol solution of 8 M are added to each flask and fermented for another 20 hours.
Получают 13р-метил-14а-ОН-5М1, т. пл. 101/102-104 °С.Get 13R-methyl-14a-OH-5M1, so pl. 101 / 102-104 ° C.
б)Восстановление SM посредством Bacillus laterosporus (АТСС4517).b) SM recovery using Bacillus laterosporus (ATCC4517).
При описанных в нримере 3(а) эксперимен-, тальпых услови х, но со временем ферментации 44 час, из SM ферментацией носредством Bacillus laterosporus получают 13|3-метил-14аOH-SMi .Under the experimental (talp) conditions described in nimer 3 (a), but with a fermentation time of 44 hours, 13 | 3-methyl-14aOH-SMi is obtained from SM by means of the Bacillus laterosporus remedy.
в)Восстановление SM посредством Brevibacterium vitarumeu (АТСС 10234).c) Recovery of SM by Brevibacterium vitarumeu (ATCC 10234).
При описанных в примере 3(а) услови х SM ферментацией посредством Brevibacterium vitarumeu восстанавливаетс в 13|3-метил-14аOH-SMi .Under the conditions described in Example 3 (a), SM is fermented by Brevibacterium vitarumeu to 13 | 3-methyl-14aOH-SMi.
г)Восстановление SM посредством Propionibacterium arabinosum (АТСС 4965).d) Recovery of SM by Propionibacterium arabinosum (ATCC 4965).
Из SM при описанных в примере 3(а) услови х ферментацией посредством Propionibacterium arabinosum получают 13р-метил-14а-ОНSMi .From SM, under conditions described in Example 3 (a), fermentation by means of Propionibacterium arabinosum gives 13 p-methyl-14a-OHSMi.
д)Восстановление SM посредством Protaminobacter atboflavus (АТСС 8458).e) Recovery of SM by Protaminobacter atboflavus (ATCC 8458).
При указанных в примере 3(6) услови х из SM ферментацией посредством Protaminobacter alboflavus получают 13р-метил-14а-ОН-5М1.Under the conditions indicated in Example 3 (6), 13 p-methyl-14a-OH-5M1 is obtained from SM by fermentation with Protaminobacter alboflavus.
е)Восстановление SM посредством Mesentericus spec (Институт Роберта Коха, Берлин).f) SM recovery via Mesentericus spec (Robert Koch Institute, Berlin).
Из SM при. указанных в примере 3(а) услови х ферментацией посредством Mesentericus spec, получают 13р-метил-14а-ОН-8М1.From SM at. The conditions indicated in Example 3 (a) by fermentation with Mesentericus spec give 13p-methyl-14a-OH-8M1.
ж)Восстановление SM посредством Мусорlana dimorpha (АТСС 4279).g) SM recovery using Garbage Dimorpha (ATCC 4279).
При указанных в примере 3(6) услови х из SM ферментацией посредством Mycoplana dirnorpha получают 13р-метил-14а-О Н-5М1.Under the conditions indicated in Example 3 (6), 13p-methyl-14a-OH-5M1 is obtained from SM by fermentation with Mycoplana dirnorpha.
з)Восстановление SM посредством Bacillus thuringiensis (ВВА-Дармштадт).h) SM recovery using Bacillus thuringiensis (BBA-Darmstadt).
Ферментаци идет посредством бактерий в бродильном чане.Fermentation takes place by means of bacteria in the fermentation tank.
Бродильный чан из нержавеющей стали емкостью 50 л наполн ют 30 л питательной среДы из следующих веществ, %: 0,5 глюкозы; 0,2 ЖИДКОСТИ дл замочки кукурузы; 0,5 эксТрйкта дрожжей; 0,1 пептона (Мерк), стериу йзуют нагреванием в течение 1,5 час до 120°С и засевают 1 л выдержанной в течение суток взболтанной культуры Bacillus thuringiensis (ВЙА-Дармщтадт).A stainless steel fermentation tank with a capacity of 50 liters is filled with 30 liters of the nutrient medium of the following substances,%: 0.5 glucose; 0.2 LIQUID for corn corn; 0.5 yeast extract; 0.1 peptone, sterilized by heating for 1.5 hours to 120 ° C and seeded with 1 liter of shaken culture of Bacillus thuringiensis (VYA-Darmschtadt) aged for 24 hours.
Посевной материал получают при услови х, описаных дл выращивани посевов в колбах по примеру 3(а).Seed is prepared under the conditions described for growing crops in flasks of Example 3 (a).
После однодневного размножени при температуре 29°С, -перемещива.нии (220 об/мин и аэрации (1,65 лгз/чдс) 1,8 л культуры при стерильных услови х перенос т в бродильный чан такого же размера с 28 л того же питательного раствора. После выращивани в течение 6 час при перемещивании и аэрации, как указано выще, добавл ют силиконовое масло SH + 5% олеомаргарина из свиного сала в качестве предотвращающего вспенивание средства и раствор 15,0 г SM в 800 слз этанола и провод т ферментацию еще в течение 16 час.After a one-day reproduction at a temperature of 29 ° C, displacement (220 rpm and aeration (1.65 lgs / hd)), 1.8 l of the culture is transferred under sterile conditions to a fermentation tank of the same size with 28 l of the same nutrient solution. After growing for 6 hours while moving and aerating, as indicated above, SH + 5% margarine from porcine fat is added as an anti-foaming agent and a solution of 15.0 g SM in 800 cl of ethanol and fermented for another 16 hours.
Затем суснензию бродильного чана экстрагируют дважды 15 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт при температуре ванны 45 °С в вакууме до сиропа и раствор ют последний в 150 сжз изопропилового эфира. После выдерживани в течение 20 час при 0°С осажденные кристаллы отсасывают, промывают небольшим количеством холодного изопропилового эфира и высущивают при 60 °С в вакууме.Then the suspension of the fermentation tank is extracted twice with 15 liters of methyl isobutyl ketone, the extract is concentrated at a bath temperature of 45 ° C under vacuum to a syrup and the latter is dissolved in 150 cc of isopropyl ether. After 20 hours at 0 ° C, the precipitated crystals are sucked off, washed with a small amount of cold isopropyl ether, and dried at 60 ° C in vacuo.
Выход:-13,1 г 13р-метил-14а-ОН-5М1, т. е. 87% теоретического количества, т. пл. 98/99 100 С.Yield: -13.1 g of 13p-methyl-14a-OH-5M1, i.e., 87% of the theoretical amount, so pl. 98/99 100 C.
Вещество может быть очищено перекристаллизацией из 4 ч. спирта.The substance can be purified by recrystallization from 4 parts of alcohol.
и) Восстановление SM посредством Protaminobacter alboflavus (АТСС 8458).i) SM recovery by Protaminobacter alboflavus (ATCC 8458).
При описанных в примере 3(з) услови х SM может быть в значительной степени восстановлен посредством Protaminobacter alboflavusWith the conditions described in Example 3 (h), SM can be largely restored by Protaminobacter alboflavus
только в том случае, если через 20 час после добавки субстрата подача воздуха полностью прекратитс , и затем проводитс ферментаци еще в течение 20 час. Чтобы изолировать полvчeнный 13р-метил-14а-ОН-8М1. требуетс only if 20 hours after the addition of the substrate the air supply is completely stopped, and then fermentation is carried out for another 20 hours. To isolate the segmented 13p-methyl-14a-OH-8M1. is required
растворить концентрат сырого экстракта в хлористом метилене и отфильтровать через колонну с кизельгелем, дезактивированную 10% воды , и кристаллизовать элюат, как описано, из диизопоопилового простого эфира.dissolve the crude extract concentrate in methylene chloride and filter through silica gel column, deactivated with 10% water, and crystallize the eluate, as described, from diisoopyl ether.
Пои м е п 4. Пoлvчeниe 3-метокси-8(14) -секо-1 ,3,5 (10), 9 (11)-эстратетраен-17р-ол-14она (13р-метил-17р-ОН-5М|) ферментацией посредством дрожжей.See 4. Formulation of 3-methoxy-8 (14) -seko-1, 3.5 (10), 9 (11) -estrate-17-ol-14on (13p-methyl-17r-OH-5M | a) fermentation by yeast.
а)Восстановление SM посредством Saccharomyces ellipsoides (щтамм Токауера, 22, Берлин ).a) Recovery of SM by Saccharomyces ellipsoides (Tokaura, 22, Berlin).
При описанных в примере 2 (а) услови х SM восстанавливают посредством Saccharomyces ellipsoides (щтамм Токауера). Полученный хроматографией препарата в тонком слое сырой продукт перекристаллизовывают дважды из 10 ч. днизопропилового простого эфира.Under the conditions described in Example 2 (a), SM is reduced by means of Saccharomyces ellipsoides (Tochauer). The crude product obtained by chromatography of the preparation in a thin layer is recrystallized twice from 10 parts of dizopropyl ether.
Получают 13р-метил-176-ОП-5М1; т. пл. 110/112-114°С; «20 - Я9.2° (диоксан, с П; В264 - 20,800.13p-methyl-176-OP-5M1 is obtained; m.p. 110 / 112-114 ° C; “20 - Я9.2 ° (dioxane, s P; B264 - 20,800.
б)Восстановление SM посредством Saccharomyces pastorianus (Институт ферментативной промыщленности, Берлин).b) SM recovery using Saccharomyces pastorianus (Institute for Enzymatic Industry, Berlin).
При описанных в примере 2 (а) услови х из SM ферментацией посредством Saccharomvces pastorianus получают 13|3-мeтил-17p-OП-SMi.Under the conditions described in Example 2 (a), 13 | 3-methyl-17p-OP-SMi is obtained from SM by fermentation with Saccharomvces pastorianus.
в)Восстановление SM посредством Saccharomyces carlsbergensis (CBS 2354).c) Recovery of SM by Saccharomyces carlsbergensis (CBS 2354).
При описанных в примере 2 (а) услови х из SM ферментапией посредством Saccharomyces carlsberpensis (CBS) получают 13р-метил-17рOH-SM ,.Under the conditions described in Example 2 (a), SM from enzyme fermentation through Saccharomyces carlsberpensis (CBS) gives 13p-methyl-17pOH-SM,.
г)Восстановление SM посредством Saccharomyces uvariim (CBS 1508).d) Recovery of SM by Saccharomyces uvariim (CBS 1508).
Ферментаци идет посредством дрожжей в бродильном чане. Бродильный чан из нержавеющей стали емкостью 50 л наполн ют 30 л питательного раствора из 5% виноградного сахара и 2% жидкости дл замочки кукуцузЫ,Fermentation is carried out by means of yeast in a fermentation tank. A stainless steel fermentation tank with a capacity of 50 liters fills with 30 liters of nutrient solution from 5% grape sugar and 2% locking liquid,
стерилизуют нагреваиием в течение 30 мин до 120°С и засевают 1 л выдержанной в течение суток взболтанной культурой Saccharomyces uvarum (CBS 1508). Посевной материал иолучают при услови х, описанных дл выращивани посевов в колбах по примеру 2(а).sterilized by heating for 30 minutes to 120 ° C and seeded with 1 liter of shaken culture of Saccharomyces uvarum (CBS 1508) aged for 24 hours. The seed is obtained under the conditions described for growing the seedlings in flasks of Example 2 (a).
После однодневного размножени нри температуре 29 °С, перемешивании (220 об/жан) и аэрации (1,65 мз/час) 1,8 л культуры при стерильных услови х перенос т в бродильный чан такого же размера с 28 л того же питательного раствора. После выращивани в течение 6 час при иеремещивании и аэрации, как описано выше, добавл ют силиконовое масло SH -}- 5% олеомаргарина из свиного сала в качестве средства, предотвращающего вспенивание , и раствор 45,0 г SM в 800 см этанола и провод т ферментацию еще в течение 19 час.After one-day reproduction at a temperature of 29 ° C, stirring (220 v / jean) and aeration (1.65 m3 / h), 1.8 l of the culture is transferred under sterile conditions to a fermentation tank of the same size with 28 l of the same nutrient solution. . After being grown for 6 hours while shifting and aerating, as described above, silicone oil SH -} - 5% margarine from lard is added as a means of preventing foaming, and a solution of 45.0 g SM in 800 cm of ethanol and carried out fermentation for another 19 hours.
Затем экстрагируют суспензию дл ферментации дважды 15 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт нри температуре ванны 45 °С в вакууме до сиропа, разбавл ют последний 400 см диизопропилового эфира и оставл ют полученный раствор на 16 час при 0°С.The suspension is then extracted for fermentation twice with 15 liters of methyl isobutyl ketone, the extract is concentrated at a bath temperature of 45 ° C under vacuum to a syrup, the last 400 cm of diisopropyl ether is diluted and the resulting solution is left for 16 hours at 0 ° C.
Образовавщиес кристаллы отсасывают, промывают 25 сжз лед ного диизопроиилового эфира и сушат в вакууме при 60 °С.The crystals formed are filtered off with suction, washed with 25 ml of ice-cold diisopropyl ether, and dried in vacuum at 60 ° C.
Выход: 31,8 г 13р-метил-17р-ОН-ЗМ1, т. е. 71% теоретического количества; т. пл. 106/108-109°С; «2° 34,5° (диоксан, с 1);Yield: 31.8 g of 13p-methyl-17r-OH-3M1, i.e. 71% of the theoretical amount; m.p. 106 / 108-109 ° С; “2 ° 34.5 ° (dioxane, s 1);
6264 20,100.6264 20,100.
Соединение может быть очищено нерекристаллизацией из 4 ч.этанола.The compound can be purified by non-recrystallization from 4 parts of ethanol.
Пример 5. Получение 13р-метил-17р-ОНSMj восстановлением SM посредством Сигуиlaria lunata (NRRL 2434).Example 5. Preparation of 13p-methyl-17p-ONSMj by reduction of SM by means of Siguyliaia lunata (NRRL 2434).
Ферментаци идет посредством грибков в бродильном чане. Бродильный чан из нержавеющей стали емкостью 50 л наполн ют 30 л питательного раствора из следующих веществ, %: 3 глюкозы; 1 жидкости дл замочки кукурузы; 0,2 NaNO.; 0,2 K HPOi; 0,1 КН,РО.; 0,005 MgSOj; 0,05 KCl; 0,002 FeSOi, стерилизуют нагреванием в течение 30 мин до 120°С и засевают 1 л выдержанной в течение 2 дней взболтанной культуры Curvularia lunata (NRRL 2434). Посевной материал получают при услови х , описан-ных в примере 1 (а) дл выращивани посевов в колбах.Fermentation is carried out by means of fungi in the fermentation tank. A stainless steel fermentation tank with a capacity of 50 liters is filled with 30 liters of a nutrient solution of the following substances,%: 3 glucose; 1 liquid for corn corn; 0.2 NaNO .; 0.2 K HPOi; 0.1 KN, PO .; 0.005 MgSOj; 0.05 KCl; 0,002 FeSOi, sterilized by heating for 30 minutes to 120 ° C and seeded with 1 liter of the shaken-up culture of Curvularia lunata (NRRL 2434) aged for 2 days. Seeds are prepared under the conditions described in Example 1 (a) for growing crops in flasks.
После двухдневного размножени при температуре 29 °С, перемешивании (220 об1мин} и аэрации (1,65 3 л культуры при стерильных услови х перенос т в бродильный чан такого же размера с 27 л того же питательного раствора.After two days of multiplication at a temperature of 29 ° C, stirring (220 rpm) and aeration (1.65 3 l of culture under sterile conditions are transferred to a fermentation tank of the same size with 27 l of the same nutrient solution.
После выращивани В течение 16 час при перемешивании и аэрации, как описано выше, добавл ют Pluronic L 81 в качестве средства, предотвращающего вспенивание, и раствор 6.0 г SM в 450 см этанола и провод т сЬепментацию еще в течение 20 час. Затем экстрагируют суспензию ферментации дважды 15 л метилизобутилкетона, сгущают экстпакт ппи температуре ванны в вакууме до сиропа.After growing For 16 hours, with stirring and aeration, as described above, Pluronic L 81 is added as an anti-foaming agent and a solution of 6.0 g of SM in 450 cm of ethanol and carried out for an additional 20 hours. Then the fermentation suspension is extracted twice with 15 l of methyl isobutyl ketone, and the extrude is reduced and the temperature of the bath in vacuum is reduced to syrup.
отдел ют последний хроматографией в колонне на 200 г дезактивированного 10% воды кизельгел в качестве абсорбента и смес х четыреххлористого углерода - хлористого метиле5 па в качестве растворител дл элюировани . Содержащие 13р-метил-17р-ОН-5М1 фракции соедин ют и после сгущени перекристаллизовывают из изопропилового эфира.the latter is separated by chromatography in a column on 200 g of silica gel deactivated with 10% water as an absorbent and mixtures of carbon tetrachloride – methyl chloride 5 as a solvent for elution. Fractions containing 13p-methyl-17p-OH-5M1 are combined and, after concentration, recrystallized from isopropyl ether.
Пример 6. Получение 3-метокси-8( 14)-се0 ко-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраена-17а-ол14-она (13р-метил-17а-ОН-5М1) восстановлением SM посредством Arthrobacter simplex (АТСС 6946).Example 6. Preparation of 3-methoxy-8 (14) -se0 co-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estratetraene-17a-ol14-one (13p-methyl-17a-OH-5M1) by reduction of SM by Arthrobacter simplex (ATCC 6946).
При описанных в примере 3(и) услови х SM 5 подвергаетс ферментации посредством Arthrobacter simplex.Under the conditions described in Example 3 (i), SM 5 is fermented by Arthrobacter simplex.
Получают кристаллизат с т. пл. 91/92-95 °С. «2° -16° (диоксан, с 1). Последний многократной фракционированной кристаллизацией 0 очищают из диизопропилового эфира и из этанола .Get crystallized with so pl. 91 / 92-95 ° C. “2 ° -16 ° (dioxane, s 1). The last repeated fractional crystallization 0 is purified from diisopropyl ether and from ethanol.
Получают 13р-метил-17а.-ОП-5М; т. пл. 100/101 -102°С; - 44,3° (диоксан, с 1);13p-methyl-17a.-OP-5M is obtained; m.p. 100/101-102 ° C; - 44.3 ° (dioxane, s 1);
82С4 20,600.82C4 20,600.
Пример 7. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10)-8,14-эстрапентаен-17р-ола Ci9H22O2 (282, 37).Example 7. Preparation of 3-methoxy-1, 3, 5 (10) -8,14-estrapentaen-17p-ol Ci9H22O2 (282, 37).
30,04 г (0,100 моль) 13р-метил-17р-ОН-5М1 кип т т с флегмой 2,5 час в 42 мл метанола и 83 мл хлористого метилена с 0,81 мл концентрированной сол ной кислоты. Затем раствор выливают в 85 мл воды, отдел ют органическую фазу и водную фазу дважды экстрагируют хлористым метиленом. Соединенные органические фазы промывают до нейтрального состо ни раствором бикарбоната и водой и сущат . После отгонки растворител в вакууме и перекристаллизации из этанола получают 21,00 г (74,4%) З-метокси-1, 3, 5(10), 8, 14 эстрапентаен-17|3-ола, т. пл. 107-109°С; ос - 141° (с 1, СПСП.30.04 g (0.100 mol) of 13p-methyl-17r-OH-5M1 are boiled under reflux for 2.5 hours in 42 ml of methanol and 83 ml of methylene chloride with 0.81 ml of concentrated hydrochloric acid. The solution is then poured into 85 ml of water, the organic phase is separated and the aqueous phase is extracted twice with methylene chloride. The combined organic phases are washed to neutrality with a solution of bicarbonate and water and they are present. After distilling off the solvent in vacuo and recrystallization from ethanol, 21.00 g (74.4%) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14 estrapentaen-17 | 3-ol, m.p. 107-109 ° C; wasps - 141 ° (c 1, SPSP.
Вещество идентично З-метокси-1, 3, 5(10), 8, 14-эстрапентаен-17р-олу, который получают отщеплением рацемата из рацемического материала , по точке плавлени , вращению, всем спектрам, а также по газовой хроматографии и хроматографии в тонком слое.The substance is identical to Z-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapentaen-17p-ol, which is obtained by cleaving the racemate from the racemic material, by melting point, rotation, all spectra, as well as by gas chromatography and chromatography in thin layer.
Пример 8. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8-эстратетраен-17р-ола, С19П2402 (284, 38).Example 8. Preparation of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8-estratetraen-17p-ol, S19P2402 (284, 38).
58,00 г (0,205 моль) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапеитаен-17|3-ола гидрируют при помощи 8,2 г предварительно гидрированного 5%,-ного паллади /карбонат кальци в 200 мл тетрагидрофурана. Поглощаетс в течение 50 мин 4820 мл водорода (95% теоретического количества). Раствор отфильтровывают от катализатора .58.00 g (0.205 mol) 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapitenen-17 | 3-ol is hydrogenated with 8.2 g of pre-hydrogenated 5% palladium / calcium carbonate in 200 ml of tetrahydrofuran. 4820 ml of hydrogen (95% of the theoretical amount) is absorbed within 50 minutes. The solution is filtered from the catalyst.
После выпч-ривани растворител в вакууме и перекристаллизации из этанола получают 39,80 г (68,2%) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8-эстратетраен-17р-ола; т. пл. 123-126°С; ag -71After evaporation of the solvent in vacuo and recrystallization from ethanol, 39.80 g (68.2%) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8-estrate tetraen-17p-ol are obtained; m.p. 123-126 ° C; ag -71
Пример 9. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10)-эстратриен-17р-ола (эстрадиолметиловый эфир).С19Н2б02 (286,39).Example 9. Preparation of 3-methoxy-1, 3, 5 (10) -estratriene-17p-ol (estradiol methyl ether). C19H2b02 (286.39).
11,35 3 (0,040 моль) З-метокси-1, 3, 5 (10) - 8-эстратетраен-17|3-ола раствор ют в 120 мл абсолютного тетрагидрофурана и при -50 °С, добавл ют к раствору 100 мг лити в 120 мл жидкого аммиака и 9,9 мл анилина. При такой же температуре порци ми добавл ют 340 мг лити и перемешивают еще в течение 10 мин. Затем добавл ют 0,72 мл воды в 2 мл тетрагидрофурана , причем раствор становитс прозрачным .11.35 3 (0.040 mol) 3-methoxy-1, 3, 5 (10) -8-estratetraen-17 | 3-ol is dissolved in 120 ml of absolute tetrahydrofuran and at -50 ° C, 100 mg of solution are added to the solution. Lithium in 120 ml of liquid ammonia and 9.9 ml of aniline. 340 mg of lithium is added in portions at the same temperature and stirred for another 10 minutes. Then 0.72 ml of water in 2 ml of tetrahydrofuran is added, and the solution becomes clear.
После добавлени остальных 0.59 г лити раствор перемешивают еш,е 20 мин и обесцвечивают хлористым аммонием. После выпаривани аммиака до-бавл ют воду, органические растворители отгон ют в вакууме и остаюш,уюс смесь экстрагируют хлористым метиленом. Соединенные растворы хлористого метилена освобождают с помощью 1 н. сол ной кислоты от анилина и промывают раствором бикарбоната и водсЛ до нейтрального состо ни .After adding the remaining 0.59 g of lithium, the solution is stirred esh for 20 min and discolored with ammonium chloride. After evaporation of the ammonia, water is added, the organic solvents are distilled off in vacuo and left, the mixture is extracted with methylene chloride. The combined methylene chloride solutions are released using 1N. hydrochloric acid from aniline and washed with bicarbonate solution and water to neutral.
После сущки раствора, отгонки растворител в вакууме и перекристаллизации из этанола получают 8,5 г (74,0%) З-метокси-1, 3, 5 (10) -эстратриен-17р-ола (эстрадиолметиловый эфир); т. пл. 114-116°С; а + 72°. Вещество идентично полученному из натурального материала эстрадиолметиловому эфиру по точке плавлени , вращению и всем спектрам, а также по газовой хроматографии и по хроматограмме в тонком слое.After the solution has been distilled, the solvent is distilled off in vacuum and recrystallized from ethanol, 8.5 g (74.0%) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10) -estratriene-17p-ol (estradiol methyl ether) are obtained; m.p. 114-116 ° C; a + 72 °. The substance is identical to estradiol methyl ether derived from a natural material by its melting point, rotation and all spectra, as well as by gas chromatography and chromatogram in a thin layer.
Пример 10. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ола-ацетата С21Н240з (324, 40).Example 10. Preparation of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapentaen-17p-ol-acetate C21H240z (324, 40).
5,00 г (0,0167 моль) 133.-метил-17|3-ОП-5М1 обрабатывают в течение 15 час в пиридине при комнатной температуре 30 мл уксусного ангидрида . Затем раствор выливают в сол ную кислоту , экстрагируют раствором хлористого метилена , промывают до нейтрального состо ни 1 н. сол ной кислотой, раствором бикарбоната и водой. Масло, остающеес после сущки и отгонки растворител в вакууме, поглощаетс в 800 мл бензола и кип титс в течение 15 мин в водоотделителе с 2,8 г /г-толуолсульфокислоты . После охлаждени раствор промывают до нейтрального состо ни раствором бикарбоната и водой.5.00 g (0.0167 mol) of 133.-methyl-17 | 3-OP-5M1 are treated for 15 hours in pyridine at room temperature with 30 ml of acetic anhydride. The solution is then poured into hydrochloric acid, extracted with a solution of methylene chloride, and washed to neutrality with 1N. hydrochloric acid, bicarbonate solution and water. The oil remaining after the substance and distillation of the solvent in vacuo is absorbed in 800 ml of benzene and boiled for 15 minutes in a water separator with 2.8 g / g-toluenesulfonic acid. After cooling, the solution is washed to neutral with bicarbonate solution and water.
Сущка и отгонка растворител дает 4,89 г (90,5%) З-метокси-1, 3, 5(10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ол-ацетата; т. пл. 79-82°С; « - 180Drying and distilling off the solvent gives 4.89 g (90.5%) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-estrapentaen-17p-ol-acetate; m.p. 79-82 ° C; "- 180
На газовой хроматограммевещество98%-ное и может примен тьс дл гидрировани в 3метокси-1 , 3, 5 (10), 8-эстратетраен-17р-ол-ацетат .It is 98% gas chromatographic and can be used to hydrogenate 3methoxy-1, 3, 5 (10), 8-estrate tetraene-17p-ol-acetate.
Дл сравнени с ацетатом З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ола из отщеплени рацемата в рацемическом материале оно перекристаллизовываетс из этанола. Получают 3,60 е (66,6%) З-метокси-1, 3, 5.(10), 8, 14эстрапентаен-17р-ол-ацетата; т. пл. 86-87°С; ,. 188 оFor comparison with 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapentena-17p-ol acetate, from the cleavage of the racemate in the racemic material, it is recrystallized from ethanol. 3.60 e (66.6%) 3-methoxy-1, 3, 5. (10), 8, 14 estrapentaen-17p-ol-acetate are obtained; m.p. 86-87 ° C; , 188 o
Эти данные, а также спектры и хроматограммы идентичны данным ацетата, полученного из отщеплени рацемата.These data, as well as the spectra and chromatograms, are identical to those of the acetate obtained from the racemate cleavage.
Пример И. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8-эстратетраен-17р-ол-ацетата С21Н2бОз (326,41).Example I. Preparation of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8-estratetraen-17p-ol-acetate C21H2bO3 (326.41).
2,40 г (0,0074 моль) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17|3-ол-ацетатата сырого гидрируют с помощью 664 мг предварительно гидрированного 5%-ного паллади на карбонате кальци в 8 мл бензола и 8 м.л тетрагидрофурана . За 2 час поглощаютс 180 мл водорода (97% теоретического количества).2.40 g (0.0074 mol) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapentaen-17 | 3-ol-acetate acetate, was hydrogenated with 664 mg of pre-hydrogenated 5% palladium on calcium carbonate in 8 ml of benzene and 8 ml of tetrahydrofuran. In 2 hours, 180 ml of hydrogen are absorbed (97% of the theoretical amount).
После отфильтровани катализатора, отгонки растворител в вакууме и перекристаллиза-ции из этанола получают 1,61 г (66,6%) З-метокси-1 , 3, 5 (10), 8-эстратетраен-17р-ол-ацетата; т. пл. ПО-113°С; «§ -49°. (с I,After filtering off the catalyst, distilling off the solvent in vacuo and recrystallizing from ethanol, 1.61 g (66.6%) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8-estrate tetraene-17p-ol-acetate are obtained; m.p. PO-113 ° C; “§ -49 °. (from I,
СПС1з).SPS1z).
П р и .м е р 12. Получение З-метп.кси-1, 3, 5(10), 8-эстратетраен-17р-ола Ci9H24O. (284,38).Example 7: Preparation of 3-met.xy-1, 3, 5 (10), 8-estratetraen-17p-ol Ci9H24O. (284.38).
2,70 г (0,0083 моль 3-метокси-1,3,5(10), 8эстратетраен-17р-ол-ацетата перемешивают при комнатной температуре в течение 3 час в 50 мл 1«. метанолового калийного щелока. При этом вещество полностью раствор етс . При охлаждении раствора осаждаетс продукт . Осаждение дополн етс 100 мл лед ной воды.2.70 g (0.0083 mol of 3-methoxy-1,3,5 (10), 8 estrate tetraen-17p-ol-acetate is stirred at room temperature for 3 hours in 50 ml of 1 ". Methanol potash liquor. In this case completely dissolves. When the solution is cooled, the product precipitates. The precipitation is supplemented with 100 ml of ice water.
Получают 2,14г (95,1%) З-метокси-1,3,5(10), 8-эстратетраен-17р-ола, т. пл. 125--127°С; -7,9° (.с 1,СПС1з).2.14 g (95.1%) of 3-methoxy-1,3,5 (10), 8-estratetraen-17p-ol, etc. are obtained. 125--127 ° C; -7.9 ° (. С 1, СПС1з).
Вещество идентично веществу, полученному гидрированием З-метокси-1, 3, 5 , 8, 14-эстрапентаен-17р-ола .The substance is identical to the substance obtained by hydrogenation of Z-methoxy-1, 3, 5, 8, 14-ostrapentaen-17p-ol.
Пример 13. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ола (282,37).Example 13. Preparation of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapentaen-17p-ol (282.37).
150 мг (0,00046 моль) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ол-ацетата перемешивают в течение 3 час в потоке азота в 3 жл метанолового 1 н. калийного щелока. При этом вещество раствор етс постепенно. При охлаждении льдом оно подкисл етс 0,6 мл концентрированной кислоты и осаждаетс 2,4 мл воды .150 mg (0.00046 mol) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapentaen-17p-ol-acetate are stirred for 3 hours in a stream of nitrogen in 3 ml of methanol 1N. potash liquor. In this case, the substance dissolves gradually. When cooled by ice, it is acidified with 0.6 ml of concentrated acid and precipitated with 2.4 ml of water.
После перекристаллизаиии из этанола/ воды получают 107,5 мг (82,5%) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8,14-эстрапентаен-17р-ола; т. пл. 101- 102°С; а - 135°С (с 1, СНС1з).After recrystallization from ethanol / water, 107.5 mg (82.5%) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8,14-estrapentaen-17p-ol are obtained; m.p. 101- 102 ° C; a - 135 ° С (с 1, СНС1з).
Пример 14. Получение 3-мето-кси-13а-1, 3,5(10) .8Л4-эстрапентаен-17р-ол-ацетата. С21П2,Оз (324,40).Example 14. Preparation of 3-methoxy-13a-1, 3.5 (10) .8L4-estrapentaeno-17p-ol-acetate. S21P2, Oz (324.40).
2,00 г (0,067 моль) 13б-метил-14а-ОН-5М1 (равноценно 13а-метил-17р-ОН-5М1) обрабатывают в течение 16 час при комнатной температуре 20 мл пиридина с 12 мл уксусного ангидрида . Затем раствор выливают в воду, экстрагируют хлористым метиленом и соединенные фазы хлористого метилена промывают до нейтрального состо ни сол ной кислотой, бикарбонатом и водой,2.00 g (0.067 mol) of 13b-methyl-14a-OH-5M1 (13a-methyl-17r-OH-5M1 is equivalent) are treated for 16 hours at room temperature with 20 ml of pyridine with 12 ml of acetic anhydride. The solution is then poured into water, extracted with methylene chloride and the combined phases of methylene chloride are washed to neutrality with hydrochloric acid, bicarbonate and water,
11eleven
После сушки и отгонки растворител в вакууме масл нистый иекристаллизующийс остаток поглощаетс в 50 мл бензола и кип титс в течение 10 мин на водоотделителе с 120 мг /г-толуолсульфокислоты. После разбавлени иростым эфиром раствор промывают до нейтрального состо ни водой и бикарбонатом , сушат и растворитель отгон ют в вакууме .After drying and distilling off the solvent in vacuo, the oily crystallizing residue is taken up in 50 ml of benzene and boiled for 10 minutes on a water separator with 120 mg / g-toluenesulfonic acid. After dilution with ether, the solution is washed to neutral with water and bicarbonate, dried and the solvent is distilled off in vacuo.
Перекристаллизаци из этанола дает 1,83 г (84,7%) 3-метокси-13а-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен- 7р-ол-ацетата; т. ил. 127-129°С; .7.20 + 183° (с 1,СНС1з).Recrystallization from ethanol gives 1.83 g (84.7%) of 3-methoxy-13a-1, 3, 5 (10), 8, 14-estrapentaene-7p-ol-acetate; T. Il. 127-129 ° C; .7.20 + 183 ° (с 1, СНС1з).
Пример 15. Получение 3-метокси-13а-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17|3-ола Ci9H22O2 (282, 37).Example 15. Preparation of 3-methoxy-13a-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapentaen-17 | 3-ol Ci9H22O2 (282, 37).
800 мг (0,00246 моль) 3-метокси-13а; 1, 3, 5 (10), 8, 14-эстраиентаен-17|3-ол-ацетата перемешивают в течение 3 час в потоке азота с 16 мл 1 н. метанолового калийного ш,елока. При этом веш,ество раствор етс . При охлаждении льдом с помош,ью воды провод т осаждение и основательную промывку.800 mg (0.00246 mol) of 3-methoxy-13a; 1, 3, 5 (10), 8, 14-estraentene-17 | 3-ol-acetate is stirred for 3 hours in a stream of nitrogen with 16 ml of 1N. methanol potash, tree. In this case, the substance dissolves. When cooled by ice with the aid of water, precipitation and thorough washing are carried out with water.
Получают 681 мг (97,6%) 3-метокси-13а-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ола.681 mg (97.6%) of 3-methoxy-13a-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapentaen-17p-ol are obtained.
Разложение при температуре выше 32 °СDecomposition at temperatures above 32 ° C
,20,20
+ 199° (с 1,СНС1з).+ 199 ° (c 1, СНС1з).
Вещество по всем спектрам и хроматограммам унифицированное, но очень легко разлагаетс .The substance in all spectra and chromatograms is unified, but very easily decomposed.
Пример 16. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17а-ол-ацетата С21Н24Оз (324,40).Example 16. Preparation of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapentaen-17a-ol-acetate C21H24O3 (324.40).
300 мл (0,001 моль) 133-метил-17а-ОН-ЗМ1 обрабатывают в течение 16 час при комнатной температуре 3 мл пиридина и 2 мл уксусного ангидрида. Затем раствор выливают в воду, экстрагируют хлористым метиленом и соединенные растворы хлористого метилена промывают до нейтрального состо ни сол ной кислотой , бикарбонатом и водой. После сущки и отгонки растворител остаетс масло, которое поглощаетс в 8 мл бензола и кип титс в течение 10 мин с 18 мг -толуолсульфокислоты. После разбавлени простым эфиром раствор промывают до нейтрального состо ни водой и бикарбонатом, сущат и растворитель отгон ют.300 ml (0.001 mol) of 133-methyl-17a-OH-3M1 are treated for 16 hours at room temperature with 3 ml of pyridine and 2 ml of acetic anhydride. The solution is then poured into water, extracted with methylene chloride, and the combined methylene chloride solutions are washed to neutrality with hydrochloric acid, bicarbonate and water. After the essence and distillation of the solvent, an oil remains, which is absorbed in 8 ml of benzene and boiled for 10 minutes with 18 mg of toluenesulfonic acid. After diluting with ether, the solution is washed to neutral with water and bicarbonate, and the solvent is distilled off.
Перекристаллизаци из этанола дает 244 мг (70,5%) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17а-ол-ацетата; т. пл. 126-127,5 °С;Recrystallization from ethanol yields 244 mg (70.5%) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-estrapentaen-17a-ol-acetate; m.p. 126-127.5 ° C;
,20,20
+ 197 (с 2, СНС1з).+ 197 (c 2, СНС1з).
Пример 17. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17(х-ола С9Н22О2 (282,37).Example 17. Preparation of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrapentaen-17 (x-ol C9H22O2 (282.37).
200 мг (0,000618 моль) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстраиентаен-17а-ол-аиетата перемешивают в течение 3 час в потоке азота с 4 жл 1 н. метанолового калийного щелока. При этом вещество полностью раство.р етс . При охлаждении льдом происходит осаждение водой, осадок отсасываетс и основательно промываетс .200 mg (0.000618 mol) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-estraientien-17a-ol-aietate are stirred for 3 hours in a stream of nitrogen with 4 ml of 1N. methanol potash liquor. In this case, the substance is completely dissolved. When cooled by ice, precipitation occurs with water, the precipitate is sucked off and thoroughly washed.
Получают 128 мг (73,5%) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17а-ола.128 mg (73.5%) of 3-methoxy-1, 3, 5 (10), 8, 14-ostrappentaen-17a-ol are obtained.
1212
Разложение при температуре выще «20 197° (,СНС1з).Decomposition at a temperature higher than “20 197 ° (, СНС1з).
Вещество должно хранитьс в холоде, так как оно быстро разлагаетс .The substance must be stored in the cold as it decomposes quickly.
Пример 18. Получение 3-метокси 8(14)секо-9 , 14а-оксидо-1, 3, 5(10)-эстратриен-17она С19Н24Оз (300,38).Example 18. Preparation of 3-methoxy 8 (14) seco-9, 14a-oxide-1, 3, 5 (10) -estratrien-17on C19H24O3 (300.38).
400 мг (0,00133 моль) 13а-метил-17р-ОНSMi кип т т в течение 30 мин, с флегмой в 20 мл метанола и 40 мл хлористого метилена с 0,4 мл концентрированной сол ной кислоты. После добавлени воды отдел етс органическа фаза и водна фаза экстрагируетс хлористым метиленом. Соединенные органические фазы промывают до нейтрального состо ни бикарбонатом и водой, и растворитель отгон ют в вакууме.400 mg (0.00133 mol) of 13a-methyl-17r-OHSMi are boiled for 30 minutes, with reflux in 20 ml of methanol and 40 ml of methylene chloride with 0.4 ml of concentrated hydrochloric acid. After the addition of water, the organic phase is separated and the aqueous phase is extracted with methylene chloride. The combined organic phases are washed to neutral with bicarbonate and water, and the solvent is distilled off in vacuo.
Получают 400 мг (100%) З-метокси-8, 14-секо-9| , 14а-оксидо-1, 3, 5 (10)-эстратриен-17она , который вл етс унифицированным по хроматограмме в тонком слое.400 mg (100%) of 3-methoxy-8, 14-seco-9 are obtained | , 14a-oxide-1, 3, 5 (10) -estratriene-17on, which is chromatographic in a thin layer.
Л1ногократна перекристаллизаци из этанола дает 45 мг вещества; т. пл. f 9-90°С; а 41,7° (с I, CHCla).Recrystallization from ethanol several times gives 45 mg of the substance; m.p. f 9-90 ° C; a 41.7 ° (with I, CHCla).
Структура была подтверждена инфракрасной частью спектра, ультрафиолетовой частью спектра, NMR масс-спектром.The structure was confirmed by the infrared part of the spectrum, ultraviolet part of the spectrum, NMR mass spectrum.
Пример 19. Получение 13р-метил-14а-ОНSMi ферментаниией посредством Saccharomyces uvarum (CBS 1508) по методу остаточной клетки.Example 19. Obtaining 13p-methyl-14a-OHSMi by fermentation with Saccharomyces uvarum (CBS 1508) using the residual cell method.
30 л культуры Saccharomyces uvarum (CBS 1508) из предварительного бродильного чана,30 l of Saccharomyces uvarum culture (CBS 1508) from a preliminary fermentation tank,
полученной, как описано в примере 4(г), подвергают центрифугированию. Промывают полученные дрожжи дистиллированной водой, центрифугируют еще раз и взвешивают в 30 .л дистиллированной воды. По 500 см суспензииobtained as described in example 4 (g), subjected to centrifugation. The resulting yeast is washed with distilled water, centrifuged once more and weighed into 30 liters of distilled water. 500 cm suspension
наливают в 8 колб Эрленмейера емкостью 2л, закрывают их ватной пробкой и взбалтывают (число колебаний 145 об/мин) при 30 °С. Через 4 час добавл ют в каждую колбу по 250 мг SM, растворенных в 2,5 см метилцеллозольЬа,poured into 8 Erlenmeyer flasks with a capacity of 2 liters, closed with a cotton plug and shaken (the number of vibrations 145 rev / min) at 30 ° C. After 4 hours, 250 mg of SM dissolved in 2.5 cm of methyl cellosolla are added to each flask.
и провод т ферментацию в течение 20 час.and fermentation for 20 hours.
Затем соедин ют исходные смеси ферментации , экстрагируют их дважлы с помощью 1 л метилизобутилкетона, сгущьют экстракт в вакууме при температуре ванны 45 °С до сухого состо ни и перекристаллизовывают остаток 1 раз из смеси бензола - гексана и 1 раз из этанола.Then the initial fermentation mixtures are combined, they are extracted two-times with 1 L methylisobutyl ketone, the extract is concentrated in vacuum at a bath temperature of 45 ° C until dry, and the residue is recrystallized 1 time from benzene-hexane mixture and 1 time from ethanol.
Получают 13|; -мeтил-14a-OH-SMl; т. пл.Get 13 |; -methyl-14a-OH-SMl; m.p.
101/102-103°С; «2 + 45,4° (с 1, диоксан).101 / 102-103 ° C; “2 + 45.4 ° (s 1, dioxane).
Пример 20. Получение 13В-метил-14а-ОНSMi ферментацией посредством SaccharomycesExample 20. Obtaining 13B-methyl-14a-OHSMi by fermentation by Saccharomyces
uvarum (CBS 1508) - сухого порощка.uvarum (CBS 1508) - dry powder.
Из 30 л культуры CBS 1508 предварительного бродильного чана получают, как описано в примере 19, центрифугированием доожжи. Последние взвещивают ъ 3 л ацетона, перемешивают суспензию в течение 15 мин, отсасывают дрожжи, взвешивают снова в 3 л ацетона, перемещивают , отсасывают дрожжи и сущат 5From 30 L of the CBS 1508 culture of the preliminary fermentation tank, it was prepared by centrifuging the burns as described in Example 19. The latter are boosted with 3 liters of acetone, the suspension is stirred for 15 minutes, the yeast is sucked off, weighed again into 3 liters of acetone, transferred, the yeast is sucked off and there is 5
течение 3 час в вакууме при комнатной температуре .for 3 hours in vacuum at room temperature.
Полученный сухой порошок взвешивают в 30 л дистиллированной воды и примен ют эту суспензию дл ферментации.The obtained dry powder is weighed into 30 liters of distilled water and this suspension is used for fermentation.
Ферментаци SM и переработка исходных смесей происходит, как описано в примере 19.Fermentation of SM and processing of the initial mixtures occurs as described in Example 19.
Получают 13.|3-метил-14а-ОН-5М1; т. пл. 100/102-103°С; ag +43° (с 1, диоксан).Get 13. 3-methyl-14a-OH-5M1; m.p. 100 / 102-103 ° C; ag + 43 ° (s 1, dioxane).
Пример 21. Получение 13(3-метил-14аOH-SMi посредством раствора 20|3-гидроксистероиддегидрогеназы .Example 21. Preparation of 13 (3-methyl-14aOH-SMi by means of a solution of 20 | 3-hydroxysteroid dehydrogenase.
К смеси 4,4 мл 0,022 М фосфатного буферного раствора (рН 5,5), 0,7 мл 0,4%-ного DPN в. раствора и 0,03 мл разбавленной в отношении 1 : 5 суспензии 20р-гидроксистероиддегидрогеназы (фирма «Ц. Ф. Берингер унд Зеке, Общество с ограничениой ответственностью Мангейм) добавл ют 1 мг SM в 0,05 мл этанола и взбалтывают в течение 15 мин при комнатной температуре В результате анализа хроматографией в тонком слое (см. пример 1,а) обнаруживают в качестве единственного продукта превраш,ени 13р-метил-14а-ОН-8М1.To a mixture of 4.4 ml of 0.022 M phosphate buffer solution (pH 5.5), 0.7 ml of 0.4% DPN. of a solution and 0.03 ml of a 20p-hydroxysteroid dehydrogenase suspension diluted in a ratio of 1: 5 (C. F. Beringer und Zeke, Mannheim limited liability company) are added with 1 mg of SM in 0.05 ml of ethanol and shaken for 15 minutes at room temperature As a result of analysis by chromatography in a thin layer (see example 1, a), 13p-methyl-14a-OH-8M1 is detected as a single product.
Пример 22. Получение 13р-этил-3-мето.кси-8 (14)-секо-18-нор-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-17р-ол-14-она (13р-этил-17р-ОН-ЗМ1).Example 22. Preparation of 13p-ethyl-3-methoxy-8 (14) -seco-18-nor-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estrate-tetraen-17p-ol-14-one (13p -ethyl-17p-OH-ZM1).
При услови х, описанных в примере 4(г), 15,0 г 13р-этил-3-метокси-8 (14)-секо-18-нор-1, 3, 5(10), 9 (11)-эстратетраен-14, 17-диона (13р-этил-5М) подвергают ферментации посредством Saccharomyces uvarum (CBS 1508) в течение 20 час. Затем суспензию ферментации экстрагируют дважды 15 л метилизобутилкетона , сгушают экстракт при температуре ванны 45 °С до сиропа и перекристаллизовывают полученный продукт из изопропилового эфира.Under the conditions described in example 4 (g), 15.0 g of 13p-ethyl-3-methoxy-8 (14) -seco-18-nor-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estrate -14, 17-dione (13p-ethyl-5M) is fermented by Saccharomyces uvarum (CBS 1508) for 20 hours. Then the fermentation suspension is extracted twice with 15 l of methyl isobutyl ketone, the extract is dried at a bath temperature of 45 ° C to a syrup, and the product obtained is recrystallized from isopropyl ether.
Получают 13р-этил-3-метокси-8 (14) секо-18нор-1 , 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-17р-ол-14он; т. пл. 85-86,5 °С; а + 15,2° (с 1, диоксан ).13p-ethyl-3-methoxy-8 (14) seco-18nor-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estrate-tetraen-17p-ol-14on are obtained; m.p. 85-86.5 ° C; a + 15.2 ° (with 1, dioxane).
Согласно NMR-спектру гидроксильна группа р - посто нна относитс к 13р-этиловой группе.According to the NMR spectrum, the p-constant hydroxyl group belongs to the 13p-ethyl group.
Пример 23. Получение З-метокси-8 (14)секо-D-roHO-1 , 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен17ар-ол-14-она (17ap-OH)-(D-roMO-SM).Example 23. Preparation of 3-methoxy-8 (14) seco-D-roHO-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estrate tetraen-17ar-ol-14-one (17ap-OH) - (D-roMO- SM).
1,6 г З-метокси-8 (14)-секо-О-гомо-1, 3,5 (10), 9 (11)-эстратетраен-14, 17а-диона (D-roMo-SM) подвергают ферментации, как описано в примере 20, посредством ацетонового сухого порошка Saccharomyces uvarum (CBS 1508). Полученный сухой продукт очишают, как описано в примере 1,а, хроматографией препарата в тонком слое и перекристаллизовывают из изопропилового эфира.1.6 g of 3-methoxy-8 (14) -seko-O-homo-1, 3.5 (10), 9 (11) -estratetraen-14, 17a-dione (D-roMo-SM) is subjected to fermentation, as described in Example 20, using Saccharomyces uvarum acetone dry powder (CBS 1508). The obtained dry product is purified as described in example 1, a, by chromatography of the preparation in a thin layer and recrystallized from isopropyl ether.
Получают З-метокси-8 (14)-секо-В-гомо-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-17ар-ол-14-он; т. пл. 115-116, ag + 28,5° (с - 1, диоксан).Get 3-methoxy-8 (14) -seko-B-homo-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estrate-17-ol-14-one; m.p. 115-116, ag + 28.5 ° (s - 1, dioxane).
Пример 24. Получение 2-метил-З-метокси8 (14)-секо-1,3,5 (10), 9 (11) - эстратетраен14а-ол-17-она .Example 24. Preparation of 2-methyl-3-methoxy8 (14) -seco-1,3,5 (10), 9 (11) - estratetraene 14a-ol-17-one.
д т в 16 колб Эрленмейера емкостью 2 л, за крывают их ватной пробкой и взбалтывают (числом колебаний 145 об/мин) при 30°С. Через 1 час добавл ют в каждую колбу по 100 мгd t in 16 Erlenmeyer flasks with a capacity of 2 liters, cover them with a cotton plug and shake (the number of oscillations 145 rev / min) at 30 ° C. After 1 hour, add 100 mg to each flask.
2-метил-3-метокси-8 (14)-секо-1, 3, 5(10), 9 (11)-эстратетраен-14, 17-диона, взбалтывают еще 48 час.2-methyl-3-methoxy-8 (14) -seko-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estratetraen-14, 17-dione, shake for another 48 hours.
Этот не описанный до сих пор исходный продукт ириготовл ют известным способомThis raw material product not described so far has been prepared in a known manner.
следующим образом: 6-метокси-7-метил-тетралин окисл ют хромовой кислотой в 6-метокси7-метилтетралоне-1 (т. пл. 102-104°С), из которого после реакции с Гринь ровским соединением , с винилом-бромидом магни и последующей конденсации полученного «вискол , посредством 2-метилциклоиентандиона-1, 3 получают 2-метил-3-метокси-8 (14)-секо-1, 3, 5(10), 9 (11)-эстратетраен-14, 17-дион (т. пл. 101 -103 °С).as follows: 6-methoxy-7-methyl-tetralin is oxidized by chromic acid in 6-methoxy-7-methyl tetralone-1 (m.p. 102-104 ° C), from which, after reaction with the Grignov compound, with magnesium-bromide and the subsequent condensation of the resulting "viscous, by means of 2-methylcycloienthanedione-1, 3, 2-methyl-3-methoxy-8 (14) -seco-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estrate tetraen-14, 17 -dione (mp. 101 -103 ° C).
Затем соедин ют исходные смеси, ферментации , экстрагируют их дважды 2 л метилизобутилкетона , сгущают экстракт в вакууме при температуре ванны 45 °С, очищают остаток хроматографией препарата в тонком слоеThe initial mixtures are then fermented, they are extracted twice with 2 liters of methyl isobutyl ketone, the extract is concentrated in vacuo at a bath temperature of 45 ° C, the residue is purified by chromatography of the preparation in a thin layer
(пример 1,а) и перекристаллизовывают продукт из изопропилового эфира.(example 1, a) and the product is recrystallized from isopropyl ether.
Получают 2-метил-3-метокси-8 (14)-секо-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-14а-ол-17-он; т. пл. 135-137°С;- ag j-47,8° (с 1, диоксан ).2-methyl-3-methoxy-8 (14) -seco-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estrate-14-ol-17-one is obtained; m.p. 135-137 ° C; - ag j-47,8 ° (s 1, dioxane).
Согласно NMR-спектру гидроксильна группа а-посто нна относитс к 13р-метиловой группе.According to the NMR spectrum, the hydroxyl group a-constant belongs to the 13p-methyl group.
Пример 25. Получение 4-метил-З-метокси8 (14)-секо-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-17рол-14-она .Example 25. Preparation of 4-methyl-3-methoxy8 (14) -seco-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estrate-17-17-one.
30 л суспензии Saccharomyces uvarum (CBS 1508)-сухого порошка (пример 20) перемешивают в бродильном чане из нержавеюшей стали при 30°С (число Колебаний 200 об/мин) и аэрируют 300 л/час воздуха. Добавл ют 3,0 г 4-метил-3-метокси-8 (14)-секо-1, 3, 5(10),9 (11)-эстратетраен-14, 17-диона, растворенного в 800 CMS этанола.30 L of Saccharomyces uvarum (CBS 1508) suspension of a dry powder (Example 20) is stirred in a stainless steel fermentation tank at 30 ° C (Vibration number 200 rpm) and aerated with 300 l / h of air. 3.0 g of 4-methyl-3-methoxy-8 (14) -seko-1, 3, 5 (10), 9 (11) -estratetraen-14, 17-dione dissolved in 800 CMS ethanol is added.
Этот не описанный до сих пор исходный продукт получают следующим образом: 5-метил-6-метокситетралон-1 ввод т в реакцию сThis crude product, not described so far, is prepared as follows: 5-methyl-6-methoxytetralone-1 is reacted with
Гринь ровским соединением посредством винила-хлорида магни и полученный при этом соответствующий «винол конденсируют посредством 2-метилциклопентадиона в 4-метил-З-метокси-8 (14)-секо-1, 3, 5(10), 9 (11)-эстратетраен-14 , 17-дион (т. пл. 154-155°С).Grinyrovsky compound by means of magnesium vinyl chloride and the corresponding "vinol obtained in this way are condensed by 2-methylcyclopentadione into 4-methyl-3-methoxy-8 (14) -seco-1, 3, 5 (10), 9 (11) - estratetraen-14, 17-dione (mp. 154-155 ° C).
Затем перемащивают в течение 48 час с аэрацией и 60 час без аэрации. Экстрагируют, как обычно, метилизобутилкетоном, сгущают экстракт, отдел ют остаток хроматографией препарата в тонком слое и перекристаллизовывают полученный сырой продукт из изопропилового эфира. 167-168°С; а -43,6° (с 1, диоксан). Согласно NMR-спектру гидроксильна группа Рпосто нна относитс к 13р-метиловой группе П р е дм е т изобретени Г. Спосо-б .получени оптически активных антинодов р да стероидов, отличающийс тем, ,что соединение обш,ей формулы где С обозначает оптически неактивный атом углерода, а Q - группу-СН2-СНа- или -СН2-, X - водород, галоид, карбоксильную группу в свободной или этерифицированной форме или насыщенный или ненасыщенный алкильный радикал с 1-4 атомами углерода, который дополнительно быть замещен галоидом или гидроксильной группой, аминогруппой или карбоксильной группой в свободной или функционально измененной форме, Y- остаточную часть секостероида, включа кольца А и В, а также его функциональные производные по кетогруппам, подвергают ферментативному превращению, например, с микроорганизмами или выделенными из них ферментами . 2. Способ получени оптических активных антиподов р да стероидов, отличающийс тем, что соединение общей формулы I I Y-Cгде С обозначает оптически неактивный атом углерода, Q-группу или -СНо-, X-водород, галоид, карбоксильную группу в свободной или этерифицированной форме или насыщенный или ненасыщенный алкильный остаток с 1-4 атомами углерода, который дополнительно может быть замещен галоидом или гидроксильной группой, аминогруппой или карбоксильной группой в свободной или функционально измененной форме, Y-остаточную часть секостероида, включа кольца А и В, подвергают ферментативному восстановлению, например, с микроорганизмами , как грибы, дрожжи, бактерии или с выделенными из них ферментами.Then re-mastered for 48 hours with aeration and 60 hours without aeration. The mixture is extracted as usual with methyl isobutyl ketone, the extract is concentrated, the residue is separated by chromatography on a thin layer, and the resulting crude product is recrystallized from isopropyl ether. 167-168 ° C; a -43.6 ° (with 1, dioxane). According to the NMR-spectrum, the hydroxyl group of the POST is attributed to the 13p-methyl group. Example 10 of the invention. carbon atom, and Q - group-CH2-CH-or-CH2-, X - hydrogen, halogen, carboxyl group in free or esterified form, or a saturated or unsaturated alkyl radical with 1-4 carbon atoms, which is additionally substituted by halogen or hydroxyl group, amino group singing or carboxyl group in free or functionally modified form, Y-residual part of secoteroid, including rings A and B, as well as its functional derivatives by keto groups, is subjected to enzymatic transformation, for example, with microorganisms or enzymes isolated from them. 2. A method of producing optical active antipodes of a variety of steroids, characterized in that a compound of the general formula II Y — C where C denotes an optically inactive carbon atom, a Q group or —CH—, X hydrogen, a halo, a carboxyl group in free or esterified form or a saturated or unsaturated alkyl residue with 1-4 carbon atoms, which may additionally be substituted by a halogen or hydroxyl group, an amino group or a carboxyl group in the free or functionally modified form, Y-residual part of the sectoraloid, Key rings A and B is subjected to enzymatic reduction, for example, microorganisms as fungi, yeast, bacteria, or enzymes isolated from them.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU242777A1 true SU242777A1 (en) |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3684657A (en) | Selective microbiological degradation of steroidal 17-alkyls | |
| NO164691B (en) | PROCEDURE FOR THE MANUFACTURING OF A VALID FOOD AND THE USE OF IT FOR THE MANUFACTURE OF FOOD AND FOOD PRODUCTS. | |
| IL27858A (en) | Microbiological process for the preparation of 11beta-hydroxysteroids | |
| SU242777A1 (en) | METHOD OF OBTAINING OPTICALLY ACTIVE | |
| US7002028B2 (en) | 5-androsten-3β-ol steroid intermediates and processes for their preparation | |
| US4255344A (en) | 9-α-Hydroxy steroids | |
| US3481974A (en) | 3-alkoxy - 14-oxo-17beta-ol-8,14-secoestra-1,3,5(10),9(11) - tetraenes and ester derivatives | |
| IL26495A (en) | Microbiological process for the manufacture of optically active antipodes | |
| DE3739017A1 (en) | MYCOBACTERIUM MICROORGANISM STEM AND METHOD FOR THE MICROBIOLOGICAL PRODUCTION OF 9 (ALPHA) - (HYDROXY) -4-ANDROSTEN-3,17-DI- (ON) | |
| US3329579A (en) | Method of preparing 16-oxygenated derivatives of estr-4-en-3-one | |
| EP0217840B1 (en) | Process for the production of 1-methyl-1,4-androstadien-3,17-dion | |
| US3623954A (en) | Process for making 6-hydroxy-3-keto-{66 1,4-steroids of the pregnane and androstane series | |
| USRE29163E (en) | 1,2,3,4,10,19-Hexanor-9-oxo-5,9-seco-25D-spirostan-5-oic acid | |
| FR2510138A1 (en) | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF 9-HYDROXY-3-OXO-4,17 (20) -REGNADIENE-20-CARBOXALDEHYDE BY FERMENTATION AND PRODUCT OBTAINED | |
| JPS60105693A (en) | Novel estran e derivative and manufacture | |
| US20060100185A1 (en) | 5-Androsten-3beta-ol steroid intermediates and processes for their preparation | |
| US3226404A (en) | Ester 4-en-3-one and 16-oxygenated derivatives thereof | |
| US3634461A (en) | Spirostan derivative | |
| US3801459A (en) | Stereospecific microbiological hydrolysis process | |
| US3549499A (en) | Asymmetric reduction of seco-steroids | |
| BE677227A (en) | ||
| JPS637795A (en) | Production of 7alpha-hydroxyandrost-4-ene-3,17-dione | |
| BE519106A (en) | ||
| EP0135297A2 (en) | Synthesis of indanedionepropionic acids and products therefrom, microorganisms for use therein and their production | |
| JPH0420600B2 (en) |