SU1767434A1

SU1767434A1 - Способ получени ( @ I)-кислой фосфатазы предстательной железы человека

Info

Publication number: SU1767434A1
Application number: SU904858355A
Authority: SU
Inventors: Михаил Васильевич Макаренко; Александр Иванович Щербань; Лариса Иосифовна Власенок; Вениамин Николаевич Лапко
Original assignee: Институт биоорганической химии АН БССР; Институт фотобиологии АН БССР
Priority date: 1990-08-08
Filing date: 1990-08-08
Publication date: 1992-10-07

Abstract

Изобретение относитс к области биохимии и медицины и может быть использовано дл получени меченной 1251-кислой фосфатазы предстательной железы человека . Цель изобретени - увеличение выхода целевого продукта и повышение его специфичности . Кислую фосфатазу предстательной железы человека рарионодируют с меченным 1251- в присутствии хлорамина Т и в 0,05-0,25 м боротном буфере рН 7,4-9,0 с последующей очисткой гель-фильтрацией. Выход увеличиваетс по сравнению с прототипом в 2-3,5 раза с одновременным увеличением специфичности св зывани с субстратом.

Description

сл С

Изобретение относитс к области биохимии и медицины, а именно к усовершенствованному способу получени 1-кислой фосфатазы предстательной железы человека ( 1-КФП), котора может быть использована в качестве компонента радиодиагностического набора дл определени уровн кислой фосфатазы предстательной железы человека при диагностике рака предстательной железы, дл оценки эффективности противоопухолевой терапии.

Известен способ получени меченного -КФР (1). Субстрат при этом радиоиоди- руют в присутствии хлорамина Т, использу а I в 0,05 М ацетате натри рН 6,0. Маркер получают с низким радиохимическим выходом (около 28%). Известен способ получени (1251)-КФП методом конъюгации (2) с

И25

125

использованием 1-реактива Болтона-Хан- тера, 11-сукцинимидил-3-(4-окси-, 5-1251- йодофенил)-пропионата, получают маркер

с низкой удельной активностью пор дка 6 мкКИ/мкг,

Наиболее близким к за вл емому вл етс способ (прототип), который заключаетс в том, что кислую фосфатазу предстательной железы человека радио- иодируют 11а IB присутствии хлорамина Т. Радиоиодирование провод т в 0,5 М фосфатном буфере рН 7,4. Реакцию останавливают прибавлением метабисульфата натри , растворенного также в фосфатном буфере. Реакционную смесь нанос т на колонку с сефадексом и элюируют с фосфатным буфером, Полученна ( )-КФП имела специфичность около 85%. Радиохимический выход составл л 10-22%.

Хот авторы используют оптимальный дл хлораминового метода буфер и рН (фосфатный буфер, рН 7,4) и большие количества окислител (хлорамин Т, 20 мкг). существенным недостатком способа вл етс низкий

VJ

О

VJ

N СО

N

радиохимический выход и невысока специфичность маркера на дату получени .

Целью изобретени вл етс увеличение радиохимического выхода и специфичность целевого продукта.

Способ осуществл ют следующим образом .

Радиоиодирование КФП с 11а I провод т в присутствии хлорамина Т в 0,05- 0,25 М С кратном 6у$ёЬе при рН 7,4-9,0. Реакцию останавливают прибавлением ме- табисульфита натри растворенного в фосфатном буфере. Реакционную смесь нанос т на колонку с сефадексом и элюиру- ют фосфатным буфером.

Пример 1. В ампулу с 10 мкл 0,2 М боратного буфера, рН 8, внос т3 мкл (1 мКи) 11а1251, 10 мкл (10 мкг) хлорамина Т в 0,2 М боратном буфере, рН 8, и 20 мкл (40 мкг) КФП. Реакционную смесь перемешивают 30 сек., реакцию останавливали- прибавлением 10 мкл (10 мкг) метабисульфита натри . В ампулу внос т 10 мкл (2 мг) йодистого кали , 200 мкг 0,1 М фосфатного буфера, содержащего 0,15 М хлористого натри , 0,1 % бычьего сывороточного альбумина (БСА) и 0,02% азида натри . Реакционную смесь нанос т на колонку (1 х 40 см) с сф сефадексом С-100 и элюируют 0,1 М фосфатным буфером, содержащим 0,15 М хлористого натри , 0,1 % БСА и 0,02% азида натри . Скорость элюции 6 мл/ч, фракции по 1 мл. Радиохимический выход составил 77,8%. Специфичность (1251)-КФП в пределах 89,1-96,3%.

Пример 2. Процесс провод т по примеру 1, использу 0,05 М боратный буфер рН 7,4. Выход целевого продукта 57,6%. Специфичность ( )-КФП составл ла 85,7- 92%.

Пример 3. Процесс провод т по примеру 1, использу 0,25 М боратный буфер рН 8. Выход целевого продукта 78 3%. Специфичность маркера 88,3-95%.

Пример 4. Процесс провод т по примеру 1, использу 0,1 М боратный буфер.

рН 9. Выход целевого продукта 46%. Специфичность (1251)-КПФ в пределах 87,5-93,2%. За вл емый способ позвол ет увеличить выход целевого продукта в 2-3,5 раза по сравнению с прототипом. Необходимо

отметить, что положительный эффект достигаетс за счет предложенных авторами изменений в классическом хлораминовом методе, где согласно литературным данным оптимальным дл радиоиодировани вл етс фосфатный буфер, рН 7,4. Найденные нами услови дл мечени КФП позволили не только увеличить радиохимический выход при уменьшении в два раза количества хлорамина Т по сравнению с прототипом, но

и получить высокоиммунореактивный маркер . Св зывание с антителами целевого продукта 85,7-96,3%, что выше, чем у прототипа .

Разработанный способ увеличивает выход маркера, делает технологию получени ( )-КФП более экономной, улучшает качество маркера, используемого как компонент набора дл радиоиммунологического микроанализа .

5

0

( 1)-кислой фосфаФормула изо тени

Способ получени тазы предстательной железы человека путем радиоиодировани в присутствии хлорамина Т в буферном растворе, хроматографии с последующей элюцией целевого продукта буферным раствором, отличающийс тем, что, с целью увеличени выхода целевого продукта и повышени его специфичности, радиоиодирование провод т в 0,05-0,25 М боратном буферном растворе рН 7,4-9,0.

Claims

Формула изобретения

Способ получения (¹²⁵1)-кислой фосфатазы предстательной железы человека путем радиоиодирования в присутствии хлорамина Т в буферном растворе, хроматографии с последующей элюцией целевого продукта буферным раствором, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и повышения его специфичности, радиоиодирование проводят в 0,05-0,25 М боратном буферном растворе pH 7,4-9,0.