SU1752344A1

SU1752344A1 - Способ оценки иммунного ответа животных

Info

Publication number: SU1752344A1
Application number: SU904797039A
Authority: SU
Inventors: Николай Михайлович Костомахин
Original assignee: Омский сельскохозяйственный институт им.С.М.Кирова
Priority date: 1990-02-27
Filing date: 1990-02-27
Publication date: 1992-08-07

Abstract

Использование: селекционно-ветеринарна генетика. Сущность изобретени : дл проведени иммунизации готов т суспензию антигена Суспензи включает. мас.%: физиологический раствор 49,5; ичный альбумин 0,3; неполный адьювант Фрейнда50,2. Суспензию ввод т внутримышечно . Иммунизацию провод т три раза. Ведут контроль наличи антител в сыворотке крови посредством иммуноферментного анализа, Через 14 дн. после проведени третьей иммунизации по оптической плотности сыворотки определ ют силу иммунного ответа у животных и оставл ют дл дальнейшего разделени особе й с силой иммунного ответа не менее, чем X + 0,5 а, по сравнению со средним по группе. 1 табл

Description

(Л

С

Изобретение относитс к области биологии , в частности к селекционно-ветеринарной генетике, и может быть использовано при создании попул ций животных с высоким иммунным ответом и следовательно , устойчивых к заболевани м.

Наиболее близким по технической сущности к за вл емому объекту вл етс способ установлени различной сочетаемости родительских пар по иммунному ответу, включающий 4-5- кратное введение антигена подкожно реципиенту другого вида и контроль наличи антигена подкожно реципиенту другого вида и контроль наличи антител в крови животных после каждой иммунизации через 5 дн. Однако известный способ имеет следующие недостатки. Во- первых, дл получени иммунной сыворотки используетс реципиент другого вида, что не позвол ет получить моноспецифическую

сыворотку, обеспечивающую реальный контроль наличи антител, и, следовательно, не возможно установить пик иммунного ответа и класс иммуноглобулинов (антител), поэтому невозможно точно оценить генотип, вл ющийс лучшим продуцентом того или иного класса иммуноглобулинов. Кроме того , 4-5-кратна иммунизаци вл етс биологически неоправданной, так как многократное введение антигена (более 4 раз) вызывает гиперсенсибилизацию организма , а четвертна иммунизаци не ведет к нарастанию антител. Использование в качестве антигена эритроцитов крови ведет к дополнительному стрессу у доноров и вл етс трудоемким по технике выполнени .

Целью изобретени вл етс повышение точности оценки.

Поставленна цель достигаетс тем, что в способе оценки иммунного ответа живо Ч

ел го GJ

4

тных, включающем введение антигена, антиген ввод т внутримышечно трехкратно с интервалом нарастани иммунного ответа, причем в качестве антигена используют суспензию , содержащую физиологический рас- твор, неполный адьювант Фрейнда, ичный альбумин при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Физиологический

раствор49,5

Неполный адъювант

Фрейнда 50,2

Яичный альбумин0,3,

а оценку провод т по оптической плотности сыворотки крови, при этом к животным с высоким иммунным ответом относ т особей с величиной оптической плотности сыворот- ки крови выше, чем X + 0,5 а.

Способ осуществл ют следующим образом .

Общеприн тым в разведении способом определ ют генетическую принадлежность животных к линии, семейству, родственной группе и т.д. Затем формируют группы животных с заведомо известным происхожде- нием в количестве, обеспечивающем получение статическим достоверных результатов . Как известие, стаТнюб/ГеШе основных иммунных реакций организма жвачных животных происходит к 2-3-мес ч- ному возрасту и поэтому необходимо формировать группы из молодн ков указанного (возврата.

Дл проведени иммунизаТДШ готов т суспензию антигена включающую следую- щие компоненты1 физиологический раствор 1 мл (49,5%); ичный альбумин фирма Sigma (США) с концентрацией белка 99% б мг (0,3%); неполный адъювант Фрейнда 1 мл().

6 мг ичного альбумина раствор ют в 1 мл физиологического раствора, а затем полученную суспензию смешивают с 1 мл адь- юванта Фрейнда и смесь гомогенизируют гомогенизатором в течение 2-3 мин. Затем, перед началом иммунизации у животных берут кровь дл контрол на наличие антител. После этого каждому животному ввод т внутримышечно 2 мл приготовленной суспензии антигена. Через 14 дн. (цикл нара- стани иммунного ответа) у животных разного происхождени берут кровь дл контрол уровн антител и повтор ют цикл иммунизации. Иммунизацию провод т три раза и провод т оценку по оптической плот- ности сыворотки крови. Через 14 дн. после проведени третьей иммунизации по значени м , полученным в результате иммунофер- ментного анализа (оптическа плотность сыворотки), определ ют силу иммунного ответа у животных разного происхождени и оставл ют дл дальнейшего разведени особей с силой иммунного ответа выше, чем X + 0,5 сг, по сравнению со средним по группе . Одновременно осуществл етс оценка генотипа быков-прой зводителей по генетической детерминации иммунологической реактивности потомства.

Установлено на опытной группе животных (40 голов), что нарастание иммунного ответа идет интенсивно до третьей иммунизации и его сила не измен етс после четвертой и п той иммунизации, что подтверждаетс следующими показател ми

Иммунизаци Концентраци антилел/ оптическа плотность

До иммунизации0,033

1иммунизаци 0,485

2иммунизаци 1,031

3иммунизаци 1,467

4иммунизаци 1,475

5иммунизаци 1,452

В качестве средства дл проведени иммунизации предлагаетс суспензи антигена в строго определенных соотношени х компонентов. Это обусловлено тем, что было проведено несколько экспериментов с различным соотношением компонентов указанной суспензии.

Пример 1. Берут рекомендуемое соотношение компонентов, представленных втаблице. Суспензию ввод т внутримышечно трем животным различного генотипа. Результаты таблицы свидетельствуют о том, что нарастание иммунного ответа шло интенсивно до третьей иммунизации и одновременно вы влена существенна индивидуальна гетерогенность у животных различного происхождени в уровне иммунного ответа. Так, животное № 4882 превосходило после третьей иммунизации животных №Ns 4884 и 4885 на 181,5 и 120И % соответственно. Животное N° 4885 превосходило животное №4884 на 156,2%. Четверта иммунизаци не повли ла на дальнейшее нарастание антител в крови.

П р и м е р 2. Берут минимальную дозу ичного альбумина - 0,05% (1 мг), при этом соотношение других компонентов также измен ют (см. таблицу). Результаты показали, что тенденци нарастани иммунного ответа сохран лась, но в то же врем его сила была очень низкой, что не позволило вы вить каких-либо значительных различий между животными разного генотипа. Такие результаты мало эффективны дл использовани в селекционном процессе.

П р и м е р 3. Берут максимальную дозу антигена 0,5% (10 мг), при этом соотношение других компонентов измен ют (табл. 2). Сила нарастани иммунного ответа была даже несколько выше, чем с рекомендуемой дозой антигена. Но высокое нарастание уровн антигена в крови также не позволило вы вить различий между животными различного происхождени , так как высока доза антигена вызывает гиперсенсибилизацию организма, что не позвол ет реально оценить его защитные способности и может привести к анафилаксическому шоку.

Во всех приведенных примерах нарастание антител в крови животных наблюдалось до третьей иммунизации, но с большей или меньшей силой.

Использование предлагаемого способа в результате трехкратной внутримышечной иммунизации животных различного происхождени предлагаемой суспензии антигена и контрол на наличие антител посредством иммуноферментного анализа позвол ет точно оценить генотип животного по иммунологической реактивности с учетом , как общего количества специфических антител, так и отдельных их классов IgGi, lgG2, IgA, IgM, что позвол ет судить о генетической детерминированности данного феномена.

Предложенный способ отвечает требовани м , предъ вл емым к методам диагностики иммунного ответа и принципам селекции животных. Способ обладает дифВли ние различного соотношени компонентов е сусулензии

дл иммунизации на силу иммунного ответа у животных

различного происхождени (оптическа плотность)

Claims

ференцирующей способностью, присутствие в способе количественного критери учета позвол ет определить достоверность оценки Это придает способу точность, объ- ективность, комплексность, так как объедин ет ветеринарный и селекционный подходы, Способ технически может быть осуществлен в любом научно-исследовательском учреждении. Формула изобретени

Способ оценки иммунного ответа животных , включающий введение антигена, о т- личающийс тем, что, с целью повышени точности, антиген ввод т внутримышечно трехкратно с интервалом нарастани иммунного ответа, причем в качестве антигена используют суспензию, содержащую физиологический раствор, неполный адъювант Фрейнда, ичный аль- бумин при следующем соотношении компонентов , мас.%:

Физиологический

раствор49,5

Неполный адъювант Фрейнда50,2

Яичный альбумин0,3

а оценку провод т по оптической плотности сыворотки крови при этом к животным с высоким иммунным ответом относ т особей с величиной оптической плотности сбйзорот- ки крови выше, чем X + 0,5 о

Продолжение таблицы