SU1718946A1

SU1718946A1 - Method for obtaining lactoferrin

Info

Publication number: SU1718946A1
Application number: SU894725101A
Authority: SU
Inventors: Александр Аркадьевич Николаев
Original assignee: Астраханский государственный медицинский институт им.А.В.Луначарского
Priority date: 1989-08-02
Filing date: 1989-08-02
Publication date: 1992-03-15

Abstract

Изобретение относитс к медицине и биохимии и может быть использовано дл выделени лактоферрина человека. Целью изобретени вл етс интенсификаци способа . Поставленна цель достигаетс тем, .что женское молоко центрифугируют, в молочную плазму добавл ют сульфат аммони , раствор выдерживают в течение 8-10 ч, повторно центрифугируют. Надосадочную жидкость пропускают через колонку с сило- сорбом С-18 в услови х линейного градиента ацетонитрила и при его концентрации 47-52%. Чистота лактоферрина 96-98%. Предлагаемый способ позвол ет сократить врем получени лактоферрина с 72 ч до 25 ч.This invention relates to medicine and biochemistry and can be used to isolate human lactoferrin. The aim of the invention is to intensify the method. The goal is achieved by the fact that the human milk is centrifuged, ammonium sulfate is added to the milk plasma, the solution is kept for 8-10 hours, re-centrifuged. The supernatant is passed through a column with silo sorbine C-18 under conditions of a linear acetonitrile gradient and at a concentration of 47-52%. The purity of lactoferrin 96-98%. The proposed method allows reducing the time of lactoferrin production from 72 hours to 25 hours.

Description

Изобретение относитс к медицине и биохимии, и может быть использовано дл выделени лактоферрина человека.This invention relates to medicine and biochemistry, and can be used to isolate human lactoferrin.

Целью изобретени вл етс интенсификаци способа за счет сокращени числа стадий.The aim of the invention is to intensify the process by reducing the number of stages.

Способ осуществл ют следующим образом .The method is carried out as follows.

500 мл сливного женского молока первой недели лактации центрифугируют при 10000 об/мин 60 мин при + 4°С. В полученную молочную плазму медленно при посто нном помешивании добавл ют сухой сульфат аммони до конечной концентрации 2М. Раствор выдерживают при +4°С в течение 8-10 ч, а затем центрифугируют при 10000 об/мин 60 мин. Осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость пропускают через колонку с силосорбом С-18 (1,5 х 10,0 см). После того, как весь объем (620 мл), содержащий лактоферрин, пропущен через- ко- лонку(15-20 мин), начинают элюцию белков линейным градиентом концентрации ацетонитрила (от 0 до 60%). Весь процесс хроматографии длитс 3 ч. Лактоферрин выходит из колонки при концентрации ацетонитрила 47-52%.500 ml of drained human milk of the first week of lactation is centrifuged at 10,000 rpm for 60 minutes at + 4 ° C. Dry ammonium sulfate is added slowly to the resulting milk plasma with constant stirring to a final concentration of 2M. The solution is kept at + 4 ° C for 8-10 hours, and then centrifuged at 10,000 rpm for 60 minutes. The precipitate is discarded and the supernatant is passed through a C-18 silosorb column (1.5 x 10.0 cm). After the entire volume (620 ml) containing lactoferrin is passed through the column (15-20 min), the elution of proteins is started with a linear gradient of acetonitrile concentration (from 0 to 60%). The entire chromatography process lasts 3 hours. Lactoferrin leaves the column at an acetonitrile concentration of 47-52%.

Выход лактоферрина -40,2-67,1%, чистота 9 6-98%.The output of lactoferrin -40,2-67,1%, purity 9 6-98%.

Предлагаемый способ по сравнению с известным позвол ет сократить врем получени лактоферрина с 72 до 25 ч.The proposed method, in comparison with the known, allows to reduce the time of lactoferrin production from 72 to 25 hours.

Формула- изобретени Formula Invention

Способ получени лактоферрина, включающий центрифугирование женского молока , фракционирование молочной плазмы сульфатом аммони с последующей хроматографией фракций, содержащих целевой продукт, отличающийс тем, что, с целью интесификации способа путем сокраxjA method of producing lactoferrin, which includes centrifuging human milk, fractionating milk plasma with ammonium sulfate, followed by chromatography of fractions containing the desired product, characterized in that, in order to intensify the process by means of coxrax

оо «оLtd

N оN o

317189464317189464

щени числа стадий, фракционирование сербе С-18 в услови х линейного градиента провод т-сразу после центрифугировани ацетонитрила и при его концентрации 47- сырь , а хроматографию провод т на сило- 52%.The number of stages, the fractionation of Serbian C-18 under the conditions of a linear gradient is carried out immediately after centrifugation of acetonitrile and at a concentration of 47- raw material, and chromatography is carried out on a force of 52%.

Claims

Claim

A method of producing lactoferrin, including centrifugation of human milk, fractionation of milk plasma with ammonium sulfate, followed by chromatography of fractions containing the target product, characterized in that, in order to intensify the method by reducing

Yu

Ch>

reduction of the number of stages, fractionation is carried out immediately after centrifugation of the raw material, and chromatography is carried out on silo sorbing C-18 under a linear gradient of acetonitrile and at a concentration of 47.52%