SU1710574A1 - Камера дл культивировани клеток - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к устройствам дл  культивировани  клеток и • тканей животных, к перфузионным'камерам дл  исследовани  их роста и развити  в услови х: in vivo. Цель изобретени  т расширение фуикцйоналЫшх возможностей за счет обеспече^*  регули- • ровани  массорбмёна среды с клетка^ми. Камера содержит корпус t >&;нижнее 2 и верхнее 3 стекла, плоский .вкпадапп 4, в котором выполнены сквозные отверсти  5, сообщенные между собой каналашЕ 6, дополнительный вкладьш 7 с уплотнением 8, в которых выполнены отверсти  9 и каналы 10. Камера снабжена также насосом 20 и набором сосудоз дл  среды, сообщенных через иатрубки 17 с внутренним объемом корпуса. В камере обеспечиваетс  несколько различных режимов культивировани  в раз.личных услови х массробмена среды с клетками mra*^ совместное культивирование нескольких культур, что расшир ет возможности данной камеры, при исследовании клеток. 2 ип. • . .V- ; : •• • :'' •-, •" . ,. _.;'ko5 618сд •^N^бди 13 i^^^ ^.2

Description

Изобретение относится к устройствам для культивирования клеток и тканей животных, к перфузионным камерам для исследования их роста и развй(57) тия в условиях in vivo. Цель изобретения _: - расширение функциональных возможностей за счет обеспечения регули- ; рования массообмена среды с клетками. Камера содержит корпус 1,_:нижнее 2 и верхнее 3 стекла, плоский вкладыш 4, в котором выполнены сквозные отверстия 5, сообщенные между собой каналами 6, дополнительный вкладыш 7 с уплотнением 8, в которых выполнены отверстия 9 и каналы 10. Камера снабжена также насосом 20 и набором сосудов для среды, сообщенных через патрубки 17 с внутренним объемом корпуса. В камере обеспечивается несколько различных режимов культивирования в различных условиях массообмена среды с клетками или^г совместное культивирование нескольких культур, что расширяет возможности данной камеры при исследовании клеток. 2 ил.

I

„.SU- 1710574 А1

I f 10

зываются удаленными от пористой мембраны 11 на расстоянии менее 0,2—0,5 мм, что определяется толщиной вкладыша 4 и подложек. Такое расстояние обеспечивает интенсивный массообмен клеток со средой, перфузируемой через патрубки 17, отверстия 9 и каналы 10 вкладыша 7. Этот режим допускает моди;·

Изобретение относится к устройствам, предназначенным для*культивирования клеток и тканей животных, и может быть использовано в биологии, медицине и ветеринарии. Преимуществ.енно изобретение предназначено для исследования роста клеток в условиях, приближенных к условиям in vivo при _л решении задач клеточной биологии и би—,θ фикацию, в которой клетки из выросших отехнологии.

Целью изобретения является расширение функциональных возможностей за счет обеспечения регулирования массообмена среды с клетками. .

. На фиг.1 изображена предлагаемая камера, вид сверху; на фиг.2 -разрез А-А на фиг. 1 .

Камера содержит корпус Г, нижнее 2 и верхнее 3 стекла, вкладьпп 4. в кото-20 ром выполнены сквозные отверстия 5, сообщенные между собой сквозными каналами 6, дополнительный вкладыш 7 с уплотнением 8, в которых выполнены отверстия 9 и каналы 10, идентичные вкладышу 4, пористую мембрану 11, уплотняющие прокладки 12 и нижнюю прокладку 13. В прокладке 13 и в нижнем стекле 2 выполнены каналы 14, связывающие полости вкладыша 4 с каналами ^30 в нижней ча'сти корпуса 1 с патрубками

16. Полости отверстий 9 и каналов 10, выполненных во вкладыше 7, связаны с патрубками. 17, установленными на корпусе 1. Камера содержит также верхнюю крышку 18 корпуса 1, стягивающие винты 19, и снабжена насосом 20 и набором сосудов 21-для жидкой среды.

Камера работает следующим образом. Конструктивные особенности камеры обеспечивают три режима культивирования.

Первый состоит в том, что объект культивирования вводят в отверстия 9 вкладьппа 7, помещая так клетки на пористую мембрану 11. Интенсивный массо· обмен клеток со средой обеспечивается за счет перфузии среды через отверстия 5 и каналы 6 в плоском вкладыше 4, единенные позволяет только за спереди с

Второй клетки через патрубки 16 вводят в каналы 6 и отверстия 5 плоского вкладыша 4. Клетки оседают на нижнее стекло 2 либо на предварительно вложенные в отверстия 5 подложки из стёкла и окамультислойных структур периодически отбирают с помощью прокачки среды насосом 20 через патрубки 16. После прокачки цикл культивирования повторяет15 ^ся· : .

Третий режим состоит в том, что одну культуру клеток помещают через патрубки 16 на нижнее стекло 2, а другую культуру через патрубки 17 - на пористую мембрану 11, как в первом режиме. Через патрубки 17 осуществляют перфузию питательной среды, обеспечивая таким образом культивирование ассоциации двух культур в условиях интенсив25 р°го массообмена со средой.

Камера, кроме того, обеспечивает хорошие условия для наблюдения за клетками под микроскопом в процессе культивирования, Суспензию клеток концентрацией 2 >10^ кл,/мл вводят стерильно с помощью насоса 20 через патрубки 16 в отверстия 5 и каналы 6. Устанавливают режим перфузии среды над мембраной 11 через патрубки 17. . Через 5 сут плотность культуры достигла 2,5 *10^ кл. /см², что в 6-7 раз , превышает плотность насыщения культуры без перфузии среды и во флаконах Карреля.

При таких плотностях образуется мультислойная структура, это свидетельствует об интенсивном массообмене клеток со средой.На шестые сутки с помощью насоса 20 через патрубки 16 смы45 вают верхний слой мультислойной культуры, оставляя нижний слой и повторяют цикл выращивания без разгерметизации, промывки и подготовки камеры к вторичному эксперименту, Приведенный пример показывает, что предлагаемая камера позволяет расширить функциональные возможности, включая не только культивирование клеток на пористой пленке, но и культивирование клеток на непористой подложке в условиях интенсивного массообмена клеток со средой. Камера позволяет делать отбор части клеток и повторять циклы культивирования без разгерметизации, дает со** с патрубками 16. Этот режим проводить культивирование счет пассивного массообмена клетками через мембрану 11. режим заключается в том, что возможность осуществлять культивирование ассоциации двух культур приих интенсивном массообмене со средой. Ка5 '

ния функциональных возможностей за счет обеспечения регулирования массообмена среды с клетками, она снабжена плоским вкладышем из эластичного материала, установленным между нижним . стеклом и пористой мембраной, при этом во вкладыше выполнены сквозные отверстия с образованием в них полостей 10 между нижним стеклом и мембраной, сообщенных одна с другой продольными каналами и снабженных патрубками для подвода и отвода жидкости, причем на мембране установлен дополнительный 15 вклаДыш, выполненный аналогично осмера обеспечивает условия для повышения производительности исследований клеток за счет нескольких полостей в одном корпусе и за счет повторения циклов культивирования после стерильного отбора клеток без разгерметизации камеры.

Claims (1)

1. Изобретение относитс  к устройствам , предназначенным ДЛЯкультивировани  клеток и тканей животных, и может быть использовано в биологии, медицине и ветеринарии. Преимуществ.енио изобретение предназначено дл  исследовани  роста клеток в услови х. Приближенных к услови м in vivo при л решении задач клеточной биологии и биотехнологии . Целью изобретени   вл етс  расширение функциональных возможнос.тей за счет обеспечени  регулировани  массо- обмена среды с клетками,, : На фиг.1 изображена предлагаема  камера, вид сверху; на фиг.2 -разрез А-А на фиг. 1, Камера содержит корпус 1, нижнее 2 IJ верхнее 3 стекла, вкладьпп 4. в котором выполнены сквозные отверсти  3, сообщенные между собой сквозными к.аналами 6,; дополнительный вкладыш 7 с уплотнением 8, в которых выполнены отверсти  :9 и каналы 10, идентичные вкладышу 4, пористую мембрану 11, уплотн 1рщие прокладки 12 и: нижнюю прокладку 13. В прокладке 13 и в нижнем стекле 2 выполнены каналы 14, св зывающие полости вкладыша 4 с каналами 15 в нижней части корпуса 1 с патрубка:ми 16. Полости отверстий 9 и ка налов 10, вьщолненных во вкладыше 7, св заны с патрубками. 17, установленными на корпусе 1, Камера содержит также верхнюю крьш1ку 18 корпуса 1, ст гивающие винты 19, и снабжена насосом 20 и Набором сосудов 21-дл  жидкой среды. Камера работает следующим образом. Конструктивные особенности камеры обеспечивают три режима культивироватом , что объект Первый состоит в культивиррванид ввод т в отверсти  9 вкладьппа 7 помеща  так клетки на пористую мембрану 11. Интенсивный массообмен клеток со средой обеспечиваетс  за счет перфузии среды через отверсти 5 и каналы 6 в-.плоском вкладыше 4, со- единенные с патрубками 16. Этот режим позвол ет проводить культивирование только за счет пассивного массообмена спереди с клетками через мембрану 11, Второй режим заключаетс  в том, чт клетки через патрубки 16 ввод т в ка- налы 6 и отверсти  5 плоского вкладыша 4. Клетки оседают на нижнее стекло 2 либо на предварительно вложенные в отверсти  5 подложки из стёкла и ока17 4 зьшаютс  удаленными от пористой мембраны 1 на рассто нии менее 0,2-0,5 мм, что определ етс  толщиной вкладыша 4 .и подложек. Такое рассто ние обеспечивает интенсивный массообмен клеток со средой, перфузируемой через патрубки 17, отверсти  9 и каналы 10 вкладыша 7. Этот режим допускает модификацию , в которой клетки из выросших мультислойных структур периодически отбирают с помощью прокач-ки среды насосом 20 через патрубки 16. После проКачки цикл культивировани  повтор етс . .- .. ; . - . ; ., ; , третий режим состоит в том, что одну культуру клеток помещают через патрубки 16 на нижнее стекло 2, а другую культуру через патрубки 17 - на нористую мембрану 11, как в первом ре а1ме. Через патрубки 17 осуществл ют перфузию питательной среды, обеспечива  таким образом культивирование ассотдаации двух культур в услови х интенсивного массообмена со средой. Камера, кроме того, обеспечивает хорошие услови  дл  наблюдени  за клетками под микроскопом в процессе культивировани . Суспензию клеток концентрацией 2-10 кл,/мл ввод т стерильно с помощью насоса 20 через патрубки 16 в отверсти  5 и каналы 6, Устанавливают режим перфузии среды над мембраной 11 через патрубки 17. . Через 5 сут йлотность культуры достигла 2,510 кл./см:, что в 6-7 раз превышает плотность насыщени  культуры без перфузии среды и во флаконах Каррел . ; При таких ттотност х образуетс  мультислойна  структура, это свидетельствует об интенсивном массообмене клеток со средой.На шестые сутки с помощью насоса 20 через патрубки 16 смывакт верхний слой мультислойной культуры , оставл   нижний слой и повтор ют цикл выращивани  без разгерметиз а- ции, промывки и подготовки камеры к вторичному эксперименту, Приведенный пример показьшает, что предлагаема  камера позвол ет расширить функциог нальные возможности, включа  не только культивирование клеток на пористой пленке, но и культивирование клеток на непористой подложке в услови х интенсивньго массообмена клеток со средой . Камера позвол ет делать-отбор части клеток и повтор ть циклы культивировани  без разгерметизации, дает вазмо ность осуществл ть культиэиро вание ассоциации двух культур |гри нх . интенсивном массообмене со средой. Камера обеспечивает услови  дл  позышени  производительности исследований клеток за счет нескольких полостей в одном корпусе и за счет повторени  циклов культивиров.аНи  после стерильного отбора клеток без разгермётизагт ции камеры. Формула изо б ре те н:и   Камера дл  культив рованн  клеток, содер сасца  корпус с технолргич. патрубками, верхнее и нижнее стекла и rtopHCTyio мембрану, установленную ду ними с уплотнением, отличающа  с   тем, что, с целью распиреки  функциональных возможностей за ;, счет обеспечени  регулировани  массообмева среды с клеткаьм, она снабжена tmocKHM вкладышем из эластичного матеЗжала , установленным между нижним стеклом и пористой мембраной, при этом во вкладыше выполнены сквозные отвер сти  с образованием в Них полостей между нижним стеклом и мембраной, сообщенных одна с другой продольными ка-г налами и снабженных патрубками дл  подвода и отвода жидкости, причем на мембране установлен дополнительный вклайым, выполненный аналогично основному , служадай прижимом мембраны, сквозные отверсти  которого размещены на одной оси с отверсти ми .основного вк адыща .