SU1689399A1 - Питательна среда дл культивировани личинок ТRIснINеLLа SpIRaLIS - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к гельминтологии , а именно к питательным средам дл  культивировани  личинок ;ельминтов. Цель изобретени  - повышение сроков сохранени  жизнеспособности личинок. Поставленна  цель достигаетс  гем, что в состав среды вход т тиамин бромид, раствор полиглюкина , твин-20, твин-80, человеческий сухой альбумин, раствор Хенкса без фенола. Простота изготовлени  и доступность ингредиентов среды, нар ду с ее высокой биологической полноценностью, позвол ют применить ее в широкой гельминтологической практике. 1 табл.

Description

(/

С

Изобретение относитс  к гельминтологии , а именно к питательным средам дл  культивировани  личинок гельминтов.

Цель изобретени  - повышение сроков сохранени  жизнеспособности личинок.

Пример1.В асептических услови х к 500 мл стерильного стандартизированного раствора Хенкса нейтрального(без фенола) прибавл ют 0,02 1,0% ампулированного 6%-ного раствора бромида тиамина. К полученной смеси добавл ют 0.2 5,0% стандартного стерильного раствора полиглюкина, смешивают и в полученной смеси раствор ют 100,0-5000,0 мг сухого человеческого альбумина . Затем к раствору прибавл ют (0,01- 0,1)% твина-20 и твина ЯО довод т до объема 1 л раствором Хента IK игрального (без фенола).

Полученную рчбоч ю чн т, с. ерилизи- руют с помощью yi га-Mfn-ii .мчи i рилизующей фильтрации типа Миллипор с диаметром фильтрующей поверхности 142 мм. Фильтрацию под вакуумом в 0,5 атм производ т в течение 30 мин через микропористые капроновые стерилизующие мембраны с размером пор 0.2 мкм (рН среды 7,8-8,0). Срок хранени  питательной среды при 5°С 4-5 мес.

Моделью дл  культивировани  гельминта служат личинки Trichinella splralis, выделенные от инвазированных белых мышей путем переваривани  мышечной ткани в искусственном желудочном соке следующего состава: медицинский пепсин 30 г; концентрированна  сол на  кислота 10 мл; физиологический раствор до 1 л. Выделенные личинки трихинепл после отмывани  в стерильных растворах питательной среды в асептических услови х помещают в рабочую питательную среду и инкубируют в

о

00 Ю СО 0

чэ

асептических услови х при 37°С в течение 25-27 дней. Биологическа  полноценность питательной среды дл  культивировани  личинок трихинелл определ етс  по сохранению жизнеспособности и инвазионных свойств личинок. Оценка жизнеспособности личинок трихинелл производитс  с помощью микроскопического исследовани  характера поведенческих реакций, двигателей активности, размеров тела и его формы. Оценка инвазионной способности у инкубированных личинок трихинелл производитс  с помощью биопробы на белых беспородных мышах обоего пола весом 18-20 г при дозе заражени  80 личинок трихинелл на 1 особь. Приживаемость трихинелл определ ют через 2, 3, 5, 7, 10, 12, 15 и 20 дней инкубации. Вскрытие животных производ т на 3-й день после заражени .

П р и м е р 2. Питательна  среда с минимальным значением концентрации вход щих ингредиентов, количество ингредиентов в % кг объему: Раствор бромида тиамина (6%-ный)0,02

Раствор полиглюкина 0,2 Твин-200,01

Твин-200,01

Человеческий сухой альбумин (мг)0,01 (мас.%)

Раствор Хенкса нейтральный (без фенола)До 100 (до 1 л)

Приготовление питательной среды дл  культивировани  личинок трихинелл осуществл ют аналогично примеру 1.

Результаты оценки биологической полноценности среды при культивировании личинок трихинелл представлены в таблице.

Длительность сохранени  жизнеспособности личинок трихинелл в питательной среде с минимальным значением концентрации вход щих ингредиентов составл ет 15,0-1,Зсут.

У большинства личинок трихинелл на 2-3-е сутки их культивировани  отмечалось увеличение размеров тела. В течении 8 сут у личинок трихинелл наблюдаетс  выраженна  двигательна  реакци  (свободное плавание в среде, хаотическое движение тела). У части личинок отмечаетс  снижение двигательной активности и сворачивание тела в плотное кольцо. На 9-10-е сутки по вл ютс  личинки с серповидной формой тела, характерной дл  погибших личинок. Полное исчезновение подвижности личинки и их 100%-на  гибель про вл етс  на 15-18-е сутки инкубации.

При исследовании целостности кутикулы личинок трихинелл в поле зрени  микроскопа при увеличении (90x7) нарушений ее целостности не обнаруживаетс .

Приживаемость личинок трихинелл у белых мышей на 2-3-й день инкубации со- ставл ет 26,4-1,3% против (34,7+0,9 ) % в контроле (р 0,05). На 5-й день инкубации приживаемость инкубированных личинок трихинелл составл ет (18,0±1,1 ) %, на 7-й день - (10,8+4,7 ) % при р 0,05. П р и м е р 3. Используют питательную среду с оптимальным значением концентрации вход щих ингредиентов следующего состава, количество ингредиентов в % к объему: Раствор бромида

тиамина (6%-ный)0,1

Раствор полиглюкина 1,0 Твин-200,05

Твин-800,05

Человеческий сухой

альбумин (мг)0,05 (мас.%)

Раствор Хенкса нейтральный (без фенола) До 100 (до 1л) Приготовление питательной среды и ее применение аналогичны примеру 1.

Результаты оценки биологической полноценности среды представлены в таблице.

Сохранение жизнеспособности личи- нок трихинелл при их культивировании в среде с оптимальным значением концентрации ингредиентов составл ет 21,4+2,6 дн .

В течение первых 2-4-х суток у них отмечаетс  увеличение размеров до 1,4 мм у самцов и до 1,56 мм у самок. Высока  двигательна  активность (свободное плавное в среде, хаотическое движение, у отдельных особей наблюдаетс   вление капул ции. Подвижность личинок сохран етс  в тече- ние 16-18 дней инкубации. Погибшие личинки (серповидна  форма тела) по вл ютс  на 18-20-й день и составл ет 21-30%. Соответственно 100-на  гибель отмечаетс  лишь на 25-26-й день инкубации. Нарушений целостности кутикулы у погибших ЛТ не обнаруживаетс .

Приживаемость личинок у белых мышей

на 3-й день инкубации составл ет 28,8%

против 34,7% в контроле, на 5-10-й день

21,2-18,3%, на 15-й день 16,1%, на 20-й день

10,5%.

П р и м е р 4, Используют питательную среду с максимальным значением концентрации вход щих ингредиентов следующего состава, концентраци  ингредиентов в % к объему:

Раствор бромида

тиамина (6%-й)1,0

Раствор полиглюкина5,0

Твин-200,1

Твин-800,1

Человеческий сухой

альбумин (мг)0,5(мас.%)

Раствор Хенкса нейтральный (без фенола)До 100 (до 1л)

Приготовление питательной среды и ее применение осуществл ютс , аналогично примеру 1.

Жизнеспособность личинок трихинелл в среде с максимальным значением концен- трации ингредиентов сохран етс  в течение 11,7+0,7 дней инкубации.

В первые сутки культивировани  личинок отмечаетс  более выраженна  подвижность , чем при культивировании в среде с минимальной и оптимальной концентрацией ингредиентов, сохран юща с  в течение 4-5 сут (при р 0,05). У части личинок на 8-9-е сутки наблюдаетс  снижение подвижности , сворачивание тела в кольцо. У 22% по вл етс  серповидна  форма тела. 100%- на  гибель личинок отмечаетс  на 11-12-й день наблюдени .

Приживаемость личинок трихинелл у белых мышей на 3-й день инкубации со- ставл ет 18,1 %, на 5-й день 12,3%.

Таким образом, питательна  среда дл  культивировани  личинок Trlchinella spiralls при оптимальной концентрации вход щих ингредиентов обладает высокой биологиче-

Среда

Питательна  среда с минимальным значением концентрации вход щих ингредиентов

Питательна  среда с оптимальным значением концентрации вход щих ингредиентов

Питательна  среда с максимальным значением концентрации вход щих ингредиентов

Среда НС-115

ской полноценностью, обеспечива  более длительное сохранение жизнеде тельности личинок, чем при применении среды НО 175 (на 57,1%). Снижение или повышение концентрации вход щих ингредиентов снижает сроки сохранени  жизнеде тельности.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Питательна  среда дл  культивировани  ли - чинок Trichlnella spiralls, содержаща  источ- ник белков, углеводов, витамины и минеральные соли, отличающа с  тем, что, с целью повышени  сроков сохранени  жизнеспособности личинок, она дополнительно содержит твин-20 и твин-80, в качестве источника белка - человеческий альбумин, в качестве источника углеводов- полиглюкин, в качестве минеральных солей - раствор Хенкса, в качестве витаминов - 6%-й раствор тиамина бромида при следующем соотношении компонентов, об.%: 6%-й раствор тиамина бромида0.02-1,0

   Полиглюкин0,2-5,0

   Твин-200,01-0.1

   Твин-800,01-0,1

   Альбумин человеческий 0,01-0,5 Раствор Хенкса ,До 100

   Сроки сохранени  жизнеспо- собности. (дни)

   15.0±1,3 21,4±2,6

   11,7±07 12.С