SU1685998A1 - Штамм бактериофага ЕNтеRовастеR aeRoGeNeS дл диагностики, профилактики и лечени инфекции, вызываемой ЕNтеRовастеR aeRoGeNeS - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к вы влению и выделению нового специфического штамма бактериофага дл  диагностики , профилактики и лечени  инфекций, вызванных условно-патогенными микроорганизмами Enterobacter aerogenes. Целью изобретени   вл етс  получение нового специфического бактериофага Ent. aerogenes дл  ускоренной идентификации Изобретение относитс  к медицинской вирусологии микробиологии, а именно к вы влению и выделению нового специфического штамма бактериофага дл  диагностики, профилактики и лечени  инфекций, вызванных условно-патогенными микроорганизмами Enterobacter aerogenes. Целью изобретени   вл етс  получение нового, специфического бактериофага Е. aerogenes дл  ускоренной идентификации свежевыделенных микробных штаммов Епт. aerogenes, а также дл  лечени  и профилактики инфекций, вызванных этими микроорганизмами . Специфический бактериофаг обладает определенным, точно лимитированным и стабильным диапазоном действи , высокой адсорбционной способностью при коротком латентном периоде и достаточной урожайностью, высоким показателем эффективной множественности. Изобретение подтверждает возможность применени  бактериофага Ent, aerogenes в качестве диагностического, профилактического и лечебного препарата дл  предотвращений инфекций, вызванных микробами Ent. aerogenes. Штамм специфического бактериофага значительно сокращает объем необходимых бактериологических исследований и позвол ет установить вид возбудител  в короткий срок (7-18 ч). Бактериофаг Ent. aerogenes, име  титр 105-106 по методу Аппельмана, может быть применен как лечебно-профилактический препарат. Штамм бактериофага Ent. aerogenes зарегистрирован в коллекции НПО Бактериофаг Тбил- НИИВСпод № Ф-135. свежевыделенных микробных штаммов Е. aerogenes, а также дл  лечени  и профилактики инфекций, вызванных этими микроорганизмами . Бактериофаг Е. aerogenes представл ет собой селекционированный клон со специфическим действием, выделен из сточных вод методом обогащени  с подсевом. Селекционирование специфического клона из отдельных негативных колоний проведено СП с о on СР ю о 00

Description

методом выделени  генетически однородной попул ции.

Бактериофаг Е. aerogenes характеризуетс  следующими свойствами: морфологи  негативных колоний полиморфна, диаметр колонии 3-5 мм, с ободком, прозрачным центром; фаг Е. aerogenes состоит из головки гексогенальной формы с диаметром 60 х 60 нм и отростка с сокращающимс  чехлом 150 нм, специфичен, что подтверждаетс  опытами перекрестного лизиса с ге- терологичными видами микроорганизмов семейства кишечных бактерий (в скобах указано количество проверенных штаммов): Klebsiella pneumonias (200), Enterobacter cloaceae (126), Hafnla alvei (45), Serratia marcescens (50), Salmonella - разные виды (200), Shlgella - разные виды (180), Escherichia coli (150), Proteus (115). Citrobacter diversus (30). Чувствительность к фагу не про вил ни один из перечисленных 1096 штаммов.

Бактериофаг Е. aerogenes обладает широким диапазоном действи  в отношений гомологичных культур, которое определ етс  на коллекции музейных штаммов Е. aerogenes (10), полученных из Государственного НИИ стандартизации и контрол  медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича, и на 252 свежевыделенных микробных штаммах Е. aerogenes. Изучение фаголизабельности проводитс  по методу ФИСК. Из свежевыделенных 252 штаммов фагом лизируетс  179, т.е. 71,3%.

Бактериофаг Е. aerogenes обладает высокой адсорбционной способностью (максимальное врем  адсорбции 11 мин) и урожайностью (120-130 частиц на одну инфицированную клетку), латентным периодом 50 мин, высоким показателем эффективной множественности (интенсивное размножение фаза наблюдаетс  при множественности 1 и ниже); высокой термоустойчивостью (нижн   граница термоустойчивости фага -58°С, верхн   80°С).

Селекционированный бактериофаг Е. aerogenes отвечает всем требовани м, предъ вл емым к диагностическим и лечебно-профилактическим фагам как по специфичности , так и по стабильности литического спектра. Штамм бактериофага депонирован в коллекции ТбилНИИВС под № Ф-135.

Пример. Дл  испытани  эффективности предлагаемого фага в идентификации микробных штаммов Е, aerogenes провод т опыты на клиническом материале всего с

помощью фага идентифицировано 69 микробных штаммов Е. aerogenes из 75 предварительно исследованных по биохимическим признакам. Штаммы выделены из крови,

гно  и кала больных при септических и остро-кишечных инфекци х.

Определение фагочувствительных микробных тел заключаетс  в следующем.

Из исследуемого материала выдел ют

культуры бактерий в чистом виде. Выделенные культуры засевают в бульон Мартена и инкубируют при 37°С в течение 3 ч, После инкубации бульонные культуры нанос т на чашки Петри с агаром в виде полосок. Одновременно на одну чашку можно нанести 5-6 полосок исследуемых культур бактерий, затем чашки подсушивают в термостате 20 мин. Вскрывают ампулы с диагностическим фагом и накапывают фаг на полоски

культур тонко отт нутой пастеровской пипеткой . После нанесени  фага чашки став т в термостат при 37°С на 3.0-3,5 ч. После инкубации чашки вынимают из термостата и внимательно просматривают полоски. В

том случае, если на местах накалывани  фага обнаруживают просветлени  культуры, реакци  считаетс  положительной. Просветление культуры само по себе говорит о взаимодействии фага с бактериальной клеткой , его обозначают CL - сливной лизис, SCL - полусливной лизис, +++ - отдельные негативные колонии (более 20). В случае отсутстви  положительной реакции, просветление полосок на местах накалывани  фага

не наблюдаетс , а отсутствие лизиса обозначаетс  (-).

Лечебно-профилактический эффект бактериофага Е. aerogenes в лабораторных услови х измер етс  в титрах воздействи 

фага на гомологичных свежевыделенных штаммах. Титр фага Е. aerogenes по методу Аппельмана равн етс  10 -10 , что вполне удовлетвор ет требовани м в установлении активности фага.

Применение бактериофага Е. aerogenes

с диагностической целью подтверждает его преимущество в идентификации микробов Е. aerogenes по сравнению с биохимическими и другими тестами, особенни в случа х,

когда последние не позвол ют идентифицировать возбудител .

Claims (1)

1. Формула изобретени  Штамм бактериофага Enterobacter aerogenes Ф-135 дл  диагностики, профилактики и лечени  инфекции, вызываемой Enterobacter aerogenes.