RU2236458C1 - Штамм легионеллезного бактериофага ниим, активный в отношении legionella pneumophila, l. micdadei, l. dumoffii и l. bozemanii - Google Patents
Штамм легионеллезного бактериофага ниим, активный в отношении legionella pneumophila, l. micdadei, l. dumoffii и l. bozemanii Download PDFInfo
- Publication number
- RU2236458C1 RU2236458C1 RU2003124024/13A RU2003124024A RU2236458C1 RU 2236458 C1 RU2236458 C1 RU 2236458C1 RU 2003124024/13 A RU2003124024/13 A RU 2003124024/13A RU 2003124024 A RU2003124024 A RU 2003124024A RU 2236458 C1 RU2236458 C1 RU 2236458C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- legionella
- legionellosis
- strain
- niim
- bacteriophage
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для идентификации возбудителей болезни легионеров, выделяемых из организма больного и инфицированных объектов внешней среды. Штамм легионеллезного бактериофага, предназначенный для идентификации основных видов возбудителей болезни легионеров Legionella pneumophila, L. micdadei, L. dumoffii и L. bozemanii лабораторной диагностики легионеллеза, выделен из органов лабораторных животных, инфицированных типовым штаммом Филадельфия-1 L. Pneumophila, и депонирован в коллекции фагов НИИ микробиологии МО РФ под обозначением НИИМ. Использование бактериофага позволяет повысить специфичность идентификации возбудителя легионеллеза от других возбудителей инфекций. 3 ил.
Description
Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к средствам лабораторной диагностики легионеллеза, и может быть использовано в научных и практических лабораториях, занимающихся идентификацией возбудителей болезни легионеров, выделяемых из организма больного и инфицированных объектов внешней среды.
Известны многие бактериофаги, используемые для идентификации и фаготипирования бактерий различного систематического положения (Медицинская микробиология/ Гл. ред. В.И.Покровский, O.K.Поздеев - М.: ГЭОТАР Медицина, 1999). Общими по отношению к заявляемым фагам являются этапы их получения, состоящие в выделении и накоплении фаговых частиц, проверки специфичности свойств и использования в целях лабораторной диагностики. Однако известные бактериофаги не могут быть использованы для идентификации и фаготипирования легионелл в связи с высокой специфичностью механизмов взаимодействия бактерий и паразитирующих в них вирусов. По этой причине они не способны адсорбироваться на поверхности клеток легионелл, репродуцироваться в них и вызывать их лизис.
Штаммы специфических легионеллезных бактериофагов в научной и патентной литературе не описаны.
Задачей изобретения является получение специфического штамма легионеллезного бактериофага, предназначенного для идентификации основных видов возбудителей болезни легионеров и лабораторной диагностики легионеллеза.
Решение задачи достигается путем выделения бактериофага из органов лабораторных животных, инфицированных типовым штаммом Филадельфия-1 Legionella pneumophila.
С целью выделения однородной популяции фага проведена селекция негативных колоний. Чистая линия фага НИИМ была получена путем пятикратного пассирования отдельных негативных колоний на штамме Филадельфия-1 L. pneumophila.
Штамм бактериофага НИИМ хранится в коллекции фагов Научно-исследовательского института микробиологии МО РФ (г. Киров) и характеризуется следующими морфологическими и физиологическими свойствами.
Фаг НИИМ относится к третьей морфологической группе вирусов бактерий по А.С.Тихоненко (1968 г.). Корпускулы фага состоят из многогранной удлиненной головки, в проекции растянутой гексагональной формы, размером 600×300 и короткого отростка длиной 150±50 (фиг.1-3). Тип нуклеиновой кислоты - ДНК, молекулярный вес - 13·106 Да.
Негативные колонии формируются на двухслойном BCYEa-агаре, приготовленном по методу Грациа, с типовой индикаторной культурой L. pneumophila штамма Филадельфия-1. Через 72-96 часов инкубации при температуре 35-37°С образуются прозрачные колонии округлой формы с относительно ровным краем 1,5-2,5 мм в диаметре. Нанесение фаговой суспензии на газон индикаторной культуры по методу Отто вызывает через 48-72 часа термостатирования при температуре 35-37°С образование четкой зоны специфического лизиса.
Адсорбция фага индикаторными бактериями в жидкой среде, содержащей 15 г/л протеозопептона №3, 10 г/л дрожжевого экстракта, 4 г/л К2НРO4, 1 г/л КН2РO4, 0,042 г/л NaНСО3, 0,25 г/л пирофосвата железа, 0,4 г/л L-цистеина, остальное - дистиллированная вода (Прозоровский С.В., Покровский В.И., Тартаковский И.С. Болезнь легионеров. - М.: Медицина, 1984, с.208), составляет 90%, латентный период - 2 часа, урожайность - 175 корпускул на инфицированную клетку.
При посевной дозе n·106 микробных клеток 3-суточной бульонной культуры в 1 см3 указанной среды и множественности инфекции 0,1 в течение 24 часов инкубирования при температуре 35-37°С накапливаются до n·108 БОЕ·см-3.
Фаг термолабилен. Инактивация начинается при температуре 50°С, а полное разрушение происходит после инкубации при температуре 55°С в течение 30 минут.
Антигенные свойства
При иммунизации кроликов суспензией фага с адъювантом Фрейда образуются специфические антитела. Полученная антисыворотка нейтрализует фаг с константой нейтрализации 43.
Специфичность
Бактериофаг высокоспецифичен и лизирует бактерии основных видов возбудителей легионеллеза: L.pneumophila (9 штаммов), L. micdadei, L. dumoffii и L. bozemanii. Фаг НИИМ не оказывает литического действия на Yersinia pestis (5 штаммов), Vibrio cholerae, Francisella tularensis, Bacillus anthracis, Brucella abortus, Y.pseudotuberculosis, Escherichia coli (4 штамма), Salmonella choleraesuis. Streptococcus faecium, equi, pneumoniae, Staphylococcus saprophyticus и aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis, Proteus vulgaris и mirabilis, Shigella sonnei и flexneri, Serratia marcescens, Pseudomonas aeroginosa.
На фиг.1 показаны частицы легионеллезного бактериофага НИИМ. Контрастирование уранилацетатом Х 120000.
На фиг.2 показана адсорбция частиц бактериофага НИИМ на поверхности L. pneumophila. Контрастирование уранилацетатом Х 30000.
На фиг.3 показан фаг НИИМ внутри клетки L.pneumophila. Контрастирование уранилацетатом Х 50000.
Пример. Фаг НИИМ репродуцируется на клетках штамма Филадельфия-1 L. pneumophila в среде, содержащей 15 г/л протеозопептона №3, 10 г/л дрожжевого экстракта, 4 г/л К2НРO4, 1 г/л КН2РO4, 0,042 г/л NаНСО3, 0,25 г/л пирофоcвата железа, 0,4 г/л L-цистеина, остальное - дистиллированная вода.
При посевной дозе 2·106 клеток возбудителя легионеллеза на 1 см3 среды и множественности инфекции 0,1 при инкубации в течение 24 часов при температуре 35-37°С накапливается до n·108 фаговых частиц на 1 см3.
Для получения препарата фага НИИМ 48-часовую культуру штамма Филадельфия-1, выращенную на среде BCYEa-агар, вносят в жидкую питательную среду из расчета конечной концентрации 5·106 клеток на 1 см3; после 48-72 часов подращивания при температуре 35-37°С и достижения культурой концентрации 2·108 клеток на 1 см3 добавляют фаг НИИМ из расчета множественности инфекции 0,1-0,3. Через 24 часа инкубации к фаголизату добавляют хлороформ (1/35 часть хлороформа по объему). Фаголизат с добавленным хлороформом выдерживают 1,5-2 часа при комнатной температуре (18-22°С) и 12 часов в холодильнике (4-6°С). Затем фаголизат фильтруют через стерильные фильтры с размером пор 0,2 мкм. Полученный фильтрат разливают по ампулам и контролируют на специфическую, общую стерильность и активность.
Фаг НИИМ, подобно типовым фагам других видов, используют для фаготипирования основных видов возбудителей болезни легионеров в дифференцирующем рабочем титре (ДРТ).
ДРТ фага определяется следующим образом: 48-часовую культуру возбудителя легионеллеза штамма Филадельфия-1, выращенную на среде BCYEa-агара, в объеме 0,1 см3 с концентрацией 1,0 млрд бактериальных клеток по отраслевому стандарту мутности ГКИ, вносят в пробирки с 4,5 см3 расплавленного и остуженного до 47°С 0,7% BCYEa-агара (рН 6,95), добавляют в объеме 0,1 см3 десятикратные разведения фага НИИМ. Содержимое пробирки перемешивают и выливают на поверхность агаровой пластинки (1,5% BCYEa-агар, рН 6,95). После застывания второго слоя посевы инкубируют при 35-37°С в течение 3-6 суток. За ДРТ принимают то разведение, в котором фаг НИИМ образует не менее 10 негативных колоний.
Изучение чувствительности исследуемых культур к фагу НИИМ проводится так же, как и определение дифференцирующего рабочего титра.
Claims (1)
- Штамм легионеллезного бактериофага НИИМ, обладающий активностью в отношении Legionella pneumophila, L. micdadei, L. dumoffii и L. bozemanii.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003124024/13A RU2236458C1 (ru) | 2003-07-30 | 2003-07-30 | Штамм легионеллезного бактериофага ниим, активный в отношении legionella pneumophila, l. micdadei, l. dumoffii и l. bozemanii |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003124024/13A RU2236458C1 (ru) | 2003-07-30 | 2003-07-30 | Штамм легионеллезного бактериофага ниим, активный в отношении legionella pneumophila, l. micdadei, l. dumoffii и l. bozemanii |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2236458C1 true RU2236458C1 (ru) | 2004-09-20 |
RU2003124024A RU2003124024A (ru) | 2005-01-27 |
Family
ID=33434096
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2003124024/13A RU2236458C1 (ru) | 2003-07-30 | 2003-07-30 | Штамм легионеллезного бактериофага ниим, активный в отношении legionella pneumophila, l. micdadei, l. dumoffii и l. bozemanii |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2236458C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103757092A (zh) * | 2013-10-24 | 2014-04-30 | 南开大学 | 一种对米克戴德军团菌wzx的特异的核苷酸及其应用 |
-
2003
- 2003-07-30 RU RU2003124024/13A patent/RU2236458C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103757092A (zh) * | 2013-10-24 | 2014-04-30 | 南开大学 | 一种对米克戴德军团菌wzx的特异的核苷酸及其应用 |
CN103757092B (zh) * | 2013-10-24 | 2014-12-24 | 南开大学 | 一种对米克戴德军团菌wzx的特异的核苷酸及其应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2003124024A (ru) | 2005-01-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2455355C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИОФАГА Pseudomonas aeruginosa, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ ОСНОВЫ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ АСЕПТИЧЕСКОГО СРЕДСТВА ПРОТИВ СИНЕГНОЙНОЙ ПАЛОЧКИ | |
Kar | Pharmaceutical microbiology | |
RU2607006C1 (ru) | Тест-штамм Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae | |
RU2236458C1 (ru) | Штамм легионеллезного бактериофага ниим, активный в отношении legionella pneumophila, l. micdadei, l. dumoffii и l. bozemanii | |
Kamel et al. | Essentials of Bacteriology and Immunology | |
RU2372406C1 (ru) | Способ выявления обсемененности объектов внешней среды грамотрицательными бактериями рода pseudomonas и acinetobacter | |
RU2352633C1 (ru) | Штамм туляремийного бактериофага гал | |
RU2337360C1 (ru) | Способ определения бактериостатических свойств антител к факторам вирулентности burkholderia pseudomallei | |
RU2733144C1 (ru) | Штамм бактерий Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae, обладающий способностью к биопленкообразованию | |
RU2085584C1 (ru) | Способ получения рекомбинантных туляремийных микроорганизмов - продуцентов факторов вирулентности, рекомбинантный штамм francisella tularensis subspecies, holarctica r5s - продуцент фактора вирулентности francisella tularensis nearctica shu, рекомбинантный штамм francisella tularensis holarctica rn4 - продуцент фактора вирулентности pseudomonas pseudomallei c 141, рекомбинантный штамм francisella tularensis subspecies holarctica r1a - продуцент фактора вирулентности francisella tularensis nearctica b 399 a cole | |
RU2460802C1 (ru) | Способ идентификации yersinia enterocolitica | |
RU2820305C1 (ru) | Штамм "SAU-21Л" бактерий Staphylococcus aureus для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики мастита коров | |
RU2425872C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Yersinia enterocolitica, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ ИНДИКАТОРНОЙ КУЛЬТУРЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ УМЕРЕННЫХ БАКТЕРИОФАГОВ ЛИЗОГЕННЫХ ШТАММОВ О1, О3, О12 СЕРОВАРОВ | |
RU2707289C1 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота | |
RU2332453C1 (ru) | Штамм бактерий vibrio metschnikovii, используемый в качестве индикаторной культуры для выявления специфического фага | |
RU2221864C2 (ru) | Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, депонированный в вгнки под № 23 мгавмиб-деп, для производства вакцины против клебсиеллеза молодняка сельскохозяйственных животных | |
Yespembetov et al. | Biological and molecular genetic properties of the epizootic culture of Streptococcus equi isolated from pathological material of a foal | |
Memon et al. | Comparative Study to Analyse the Efficacy of Homoeopathic and Allopathic Medicine on Staphylococcus aureus Isolated from Clinical Specimen | |
RU2180916C1 (ru) | Штамм bacillus anthracis km92-продуцент сибиреязвенных антигенов | |
RU2021360C1 (ru) | Штамм bacteriophagum shigellosum 1, активный в отношении shigella dysenteria 1 | |
RU2021357C1 (ru) | Штамм bacteriophagum shigellosum 2, активный в отношении shigella dysenteria 2 | |
RU2267537C2 (ru) | Питательная среда для микробиологического исследования крови | |
RU2021366C1 (ru) | Штамм bacteriophagum shigellosum, активный в отношении shigella dysenteria 8 | |
RU2021356C1 (ru) | Штамм bacteriophagum shigellosum 10, активный в отношении shigella dysenteriae 10 | |
Shyrobokov et al. | Determination of the anti-protozoal activity of medicinal agents using the phenomenon of plaque formation by Acanthamoeba spp. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20100608 |
|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20120510 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140731 |