SU1675326A1

SU1675326A1 - Method of peptone preparation

Info

Publication number: SU1675326A1
Application number: SU884412519A
Authority: SU
Inventors: Андрей Васильевич Зинченко; Наталия Владимировна Колтукова; Алла Александровна Бондарчук; Василий Георгиевич Валащук; Тамара Леонидовна Заворотная
Original assignee: Институт Микробиологии И Вирусологии Им.Д.К.Заболотного
Priority date: 1988-04-18
Filing date: 1988-04-18
Publication date: 1991-09-07

Abstract

Изобретение относитс к микробиологической промышленности. 3 именно к способам получени пептоне с помощью лротеиназ микробного Г|рии,.хс:«лени . Цель изобретени - ускорение, удешевпе- ние процесса и повышение выхода полевого продукта. Способ получени пеп.пча пре- дусмчтривает ферменчативный гидролиз исходного сыр) - жмь... э чашечной ткани поел -- извлечени аденозинтрифосфорной кислпгы термическую инаюивэцию фер- ментэ, отделение нечрогидролизованного остатка и распы/штепьнуо пушку целевого продукта, прч 7GN к , чипе -ырье предварительно иэме/.ьчз vT Ј Ферментативный гидролиа псоьодчг пк ло уРти/.ином при рН 7-8 и OTHoiifHHH tJCi JOHTd к субстрату 20-40 ЛЬ/ЮО г . ч. причем ДОРОД НИР pr-i ..ji.rvi- -чэ ог,щес --в/1 ют , ipr тм аммну чс 6лThis invention relates to the microbiological industry. 3, specifically, to methods for producing peptone with the help of microbial lroteinase g | rii, .xc: laziness. The purpose of the invention is to accelerate, reduce the cost of the process and increase the yield of the field product. The method of obtaining pep.chpu presumes fermentative hydrolysis of the initial cheese) - press ... cup tissue ate - extract adenosine triphosphate acid, thermally induce enzyme, separate the non-hydrolyzed residue and spray / pin the cannon of the target product, if necessary, 7H The raw material is preliminarily i.e.t. vT T Enzymatic hydrolipoprotein p.U.R./.in at pH 7–8 and OTHoiifHHH tJCi JOHTd to substrate 20–40 L / VO g. h, whereby the DOROD NIR pr-i ..ji.rvi- -che og, shches --v / 1 yut, ipr tm amnu hs 6l

Description

Изобретение относитс к микробиологической промышленности, а именно к способам получени пептона с помощью протеиназ микробного происхождени .The invention relates to the microbiological industry, and specifically to methods for producing peptone using microbial proteinases.

Цель изобретени - ускорение, удешевление процесса и повышение выхода целевого продукта.The purpose of the invention is to accelerate, reduce the cost of the process and increase the yield of the target product.

Способ осуществл ют следующим образом .The method is carried out as follows.

Дл приготовлени пептона жмых мышечной ткани после эксракции аденозинт- рифосфорной кислоты (АТФ) высушивают и измельчают до порошкообразного состо ни , суспендируют в воде, довод ) рН до оптимального значени .For the preparation of peptone, the muscle tissue after extracting adenosine diphosphoric acid (ATP) is dried and crushed to a powdery state, suspended in water, pH adjusted to the optimum value.

В качестве протеолитического фермента предлагаетс нейтральна протеиназа Bacllus subtllls (протосубтилин). Фермент характеризуетс высокой скоростью гидролиза трудноперевариваемых белков (эластина и коллагена) рН-оптимум действи 7,0.Neutral proteinase Bacllus subtllls (protosubtilin) is proposed as a proteolytic enzyme. The enzyme is characterized by a high rate of hydrolysis of indigestible proteins (elastin and collagen) with a pH optimum of 7.0.

Дл создани оптимальных значений рН в реакционной смеси используют 25%-нь | 1 раствор аммиака, что исключает в дальн.. процесс нейтрализации гидролиза и не оказывает вли ни на содержание зопы о готовом препаратеTo create optimum pH values in the reaction mixture, 25% is used | 1 ammonia solution, which eliminates in the far .. the process of neutralization of hydrolysis and does not affect the content of the drug on the finished product

Подбор фермент-субс гоэтных соотношений и условий гидролиза провод т следующим образом.The selection of the enzyme-sub-goeth ratios and hydrolysis conditions is carried out as follows.

Дл ускорени пронесс гидролиза провод т проверку вли ни температурь , на брем достижени требуемого состава гидролиза. Повышение температуры инкубационной смеси до РЮ°С не приводит к повышению скорости гидропизэ, а, наоборот , приводит к быстрой термоинактивации ферментов и некоторому замедлению процесса Поэтому оптимальной температурой гидролиза считают 37±3°С. ПроведениеTo speed up the hydrolysis, the effect of temperature was checked to the burden of achieving the desired hydrolysis composition. Increasing the temperature of the incubation mixture to RYU ° C does not lead to an increase in the hydropize rate, but, on the contrary, leads to rapid thermal inactivation of the enzymes and to some slowdown of the process. Therefore, the optimal hydrolysis temperature is 37 ± 3 ° C. Holding

гидролиза при температуре ниже оптимальной нецелесообразно, т.е. приводит к значительному снижению скорости реакции.hydrolysis at a temperature below the optimal impractical, i.e. leads to a significant decrease in the reaction rate.

Дл определени оптимального фермент-субстратного соотношени провод т гидролиз суспензии измельченного жмыха в концентрации 2-20% при количестве фермента 10-40 ПЕ/100 г субстрата. Продолжительность гидролиза составл ет во всех случа х 24 ч. Полученные данные представлены в табл. 1.To determine the optimal enzyme-substrate ratio, a slurry of crushed meal suspension is hydrolyzed at a concentration of 2-20% with an amount of 10-40 PE / 100 g of substrate. The duration of hydrolysis is 24 hours in all cases. The data obtained are presented in Table. one.

В табл. 2 представлены качественные характеристики целевого продукта.In tab. 2 presents the qualitative characteristics of the target product.

Дл получени пептона из жмыха мышечной ткани с помощью бактериальных протеиназ целесообразно использовать концентрацию фермента 20-40 ПЕ/100 г суспензии субстрата.To obtain peptone from muscle meal with bacterial proteinases, it is advisable to use an enzyme concentration of 20-40 PE / 100 g of substrate suspension.

Наилучшее качество гидролизата достигаетс при концентрации субстрата 8- 12%. Именно эти концентрации и используют дл определенного времени гидролиза жмыха бактериальными протеи- назами.The best quality of the hydrolyzate is achieved when the substrate concentration is 8-12%. It is these concentrations that are used for a certain time of hydrolysis of the meal by bacterial proteinases.

Определение аминного азота и свободных аминокислот гидролизатов показало, что после 12-16-часового гидролиза накопление аминного азота происходит преимущественно за счет свободных аминокислот, что ухудшает качество пептона, поэтому продолжительность гидролиза не должна превышать 8-10 ч.Determination of amino nitrogen and free amino acids of hydrolysates showed that after 12-16 hours of hydrolysis, accumulation of amino nitrogen occurs mainly due to free amino acids, which degrades the quality of peptone, therefore the duration of hydrolysis should not exceed 8-10 hours.

Пример 1. Жмых мышечной ткани после извлечени АТФ высушивают и измельчают до порошкообразного состо ни , 50 г сухого жмыха суспендируют в 450 мл воды, довод т рН раствора до 7,0 с помощью раствора аммиака, внос т нейтральную протеиназу В. subtllis в количестве 100 ед. (20 ПЕ на 100 мл 10%-ной суспензии) протеолитической активности. Гидролиз провод т 8 ч на качалке (150 об/мин) при 37°С, После окончани гидролиза фермент инактивируют прогреванием при 100°С в течение 30 мин. Смесь охлаждают, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин, супернатат фильтруют через 5-6- слойный марлевый фильтр при 4-6°С дл удалени жира. Фильтр диофилизируют, полученный препарат пептона фасуют в стекл нную посуду.Example 1. Muscle meal after ATP extraction is dried and crushed to a powdery state, 50 g of dry meal is suspended in 450 ml of water, the pH of the solution is adjusted to 7.0 with ammonia solution, neutral proteinase B. subtllis is introduced in an amount of 100 units (20 PE per 100 ml of 10% suspension) of proteolytic activity. The hydrolysis was carried out for 8 hours on a rocking chair (150 rpm) at 37 ° C. After the end of the hydrolysis, the enzyme was inactivated by heating at 100 ° C for 30 minutes. The mixture is cooled, centrifuged at 5000 rpm for 20 minutes, the supernatant is filtered through a 5-6 layer gauze filter at 4-6 ° C to remove fat. The filter is diophilized, the resulting peptone preparation is packed in glass dishes.

Пример 2. 50 жмыха мышечной ткани, подготовленного по примеру 1, суспендируют в 450 мл воды, рН 7.0 довод т раствором аммиака. Внос т нейтральную протеиназу В. subtllis в количестве 150 ед. протеолитической активности (30 ПЕ на 100 мл 10%-ной суспензии). Гидролиз провод т 10 ч на качалке при 37°С. Полученный гидролизат обрабатывают по 1.Example 2. 50 muscle tissue cake prepared according to Example 1 is suspended in 450 ml of water, pH 7.0 is adjusted with ammonia solution. Contributes neutral proteinase B. subtllis in the amount of 150 units. proteolytic activity (30 PE per 100 ml of 10% suspension). The hydrolysis was carried out for 10 hours on a rocking chair at 37 ° C. The resulting hydrolyzate is treated with 1.

Пример 3. 60 г измельченного жмыха суспендируют в 450 мл воды, довод т рНExample 3. 60 g of crushed meal is suspended in 450 ml of water, the pH is adjusted

раствора аммиаком, внос т нейтральную протеиназу В. subtllis в количестве 150 ед протеолитической активности (30 ПЕ на 100 мл 10% ной суспгнзии). Гидролиз пповод т на качалке в течение 8 ч при 37°С.a solution of ammonia, and neutral proteinase of B. subtllis is introduced in the amount of 150 units of proteolytic activity (30 PE per 100 ml of 10% suspension). The hydrolysis was carried out on a rocking chair for 8 hours at 37 ° C.

Гидролизат обрабатывают по примеру 1.The hydrolyzate is treated as in example 1.

Пример 4. 8 кг измельченного жмыха суспендируют в 92 л воды, довод т рН раствором аммиака до 7,0. Внос т фермент в количестве 3000 ПЕ (20 ПЕ на 100 мл 18%ной суспензии). Гидролиз провод т в реакторе при 37°С и работающей мешалке в течение 8 ч. После окончани гидролиза фермент инактивируют прогреванием при 100°С в течение .получаса. Смесь охлаждают , сепарируют при 8000 об/мин и вмгуши вают на распылительной сушке. Препарат пептона фасуют в стекл нную посуду.Example 4. 8 kg of crushed meal is suspended in 92 l of water, the pH is adjusted to 7.0 with ammonia solution. The enzyme was introduced in the amount of 3000 PE (20 PE per 100 ml of 18% suspension). The hydrolysis is carried out in a reactor at 37 ° C and an operating stirrer for 8 hours. After the end of the hydrolysis, the enzyme is inactivated by heating at 100 ° C for half an hour. The mixture is cooled, separated at 8000 rpm and dried by spray drying. The peptone preparation is packed in glass dishes.

Пример 5. 26 кг измельченного жмыха суспендируют в 190 л воды, довод тExample 5. 26 kg of crushed oil cake is suspended in 190 liters of water, adjusted to

рЧ до 7,0 и внос т нейтральную протеиназу В. subtills в количестве 86400 ПЕ (40 ПЕ на 100 мл 12%-ной суспензии). Гидролиз провод т в торе при описанных услови х в течение 10 ч. Дальнейшую обработку гидропиэата провод т по примеру 4.rh to 7.0 and neutral proteinase of B. subtills are introduced in the amount of 86400 PE (40 PE per 100 ml of 12% suspension). The hydrolysis is carried out in the torus under the described conditions for 10 hours. Further processing of the hydropiace is carried out as in Example 4.

Пример 6. 8 кг сухого жмыха суспендируют в 60 л «оды довод т рН до 7,0 с помощью раствора аммиака и внос т 27200 ПЕ протеиназы В. subtills (40 ПЕ наExample 6. 8 kg of dry cake is suspended in 60 liters of pH adjusted to 7.0 with ammonia solution and 27,200 PE proteinases of B. subtills are added (40 PEs per

100 мл 12% ной суспензии). Гидролиз провод т в реакторе при описанных услови х в течение 8 ч Порошок пептона получают по схеме примера 4,100 ml of 12% suspension). The hydrolysis is carried out in the reactor under the described conditions for 8 hours. Peptone powder is obtained according to the scheme of Example 4,

Предлагаемый способ позвол ет использовать отходы производства с получением стандартного продукта.The proposed method allows the use of production waste to produce a standard product.

Claims

The invention of the method of producing peptone, involving the enzymatic hydrolysis of the raw material - meal-cake of muscle tissue after the extraction of adanozintriphosphate acid, thermal inactivation of the enzyme, separation of the unhydrolyzed residue and spray drying of the target

product, characterized in that, in order to accelerate, reduce the cost of the process and increase the yield of the target product, the feedstock is pre-crushed, and enzymatic hydrolysis is carried out with protosubtilin at pH 7-8 and the ratio of enzyme-substrate is 20-40 PE / 100 ml of suspension during 8-10 hours, the pH being adjusted by hydrolysis with a 25% ammonia solution,

Table 1

Editor I. Derbak

Tehred M. Morgeital

Order 2976 Circulation Subscription

VNIIPI State Committee for Inventions and Discoveries at the State Committee on Science and Technology of the USSR 113035, Moscow, Zh-35, Raushsk emb. 4/5

Continuation of table 1

Table

Proofreader E. Lonchakova