SU1662443A1

SU1662443A1 - Способ получени гаплоидов чмен

Info

Publication number: SU1662443A1
Application number: SU894671178A
Authority: SU
Inventors: Валентина Николаевна Чистякова
Original assignee: Научно-производственное объединение "Подмосковье" Отделения по нечерноземной зоне ВАСХНИЛ
Priority date: 1989-03-10
Filing date: 1989-03-10
Publication date: 1991-07-15

Abstract

Изобретение относитс к биотехнологии и касаетс получени гаплоидов чмен методом гаплопродюсера дл работы в области селекционно-генетических исследований растений. Цель изобретени - повышение выхода гаплоидных регенерантов. Исходные растени опыл ют пыльцой гаплопродюсера, выращивают в течение 8 - 9 сут и подвергают холодовой предобработке в течение 12 - 14 сут при 10°С, после чего эксплантируют зародыши и культивируют их IN VITRO до получени регенерантов. 2 з.п.ф-лы, 3 табл.

Description

Изобретение относитс к сельскохоз йственной биотехнологии и может быть использовано в селекционно-генетических программах при получении гаплоидных растений методом селективной элиминации хромосом в сочетании с эмбриокультурой.

Цель изобретени - увеличение выхода гаплоидных регенерантов.

Способ осуществл ют следующим образом .

Исходные растени Hordeum vulgare (внутривидовые гибриды F1 или других поколений ) кастрируют и опыл ют пыльцой гаплопродюсера H.bulbosum. Из зав завшихс зерновок вычлен ют дифференцированные зародыши, эксплантируют их на искусственную питательную среду и культивируют in vitro до получени гаплоидных растений. В течение первых 8-9 дней после опылени исходные материнские растени выращивают в обычных услови х: при температуре воздуха 25-27°С, относительной влажности 70-80%, освещенности 30-35

тыс люкс и 18-часовом фотопериоде. Через 8-9 дней (по истечении критического периода в развитии зародышей, когда полностью заверш ен процесс элиминации хромосом гаплопродюсера) растени Н, vulgare, опыленные пыльцой H.bulbosum подвергают холодовой предобработке при 10°С. Влажность воздуха в этот период составл ет 70-80%. освещенность 3-5 тыс. люкс при 18-часовом фотопериоде. Холодо- ва предобработка зародышей m vivo продолжаетс в течение 12-14 дней, после чего дифференцированные зародыши эксплантируют на питательную среду in vitro, недифференцированные - выбраковывают. Исходный материал дл получени гаплоидов выращивают при этом в вегетационных сосудах. Колось Н vulgare, опыленные пыльцой гаплопродюсера, через один и два дн после опылени обрабатывают раствором гибберелловой кислоты (75 мг/л), Вычленение и пересадку зародышей на искусственную питательную среду произвоСО

с

о о го

4Ь. 4 Ы

д т в асептических услови х. Используют среду Р-8 Лукь нюк и Игнатовой.

Пример 1. Как указано выше, производ т опыление внутривидовых гибридов рового чмен Н, vulgare пыльцой гаплоп- родюсера Н. bulbosum и двукратное опрыскивание опыленных колосьев гибберел- ловой кислотой через один и два дн после опылени . Опыленные растени выращивают при 26°С в течение 8 дней - до полной элиминации хромосом гаплопродюсера.

После этого осуществл ют холодовую предобработку опыленных астений при 10°С в течение 9-11 дней, вычлен ют дифференцированные зародыши из зерновок и культивируют их in vitro с получением гаплоидных регенерантов.

Примеры 2,3 осуществл ют аналогично примеру 1, при этом холодовую предобработку провод т в течение 12-14 и 15-11 дней.

Результаты исследований представлены в табл. 1-3. Зависимость частоты гаплоидных регенерантов рового чмен в эмбриокультуре in vitro от продолжительности холодовой предобработки зародышей In vivo (суммарные данные по 7 исходным гибридам Fi H.vulgare) приведена в табл. 1.

Результаты гибридизации FiH.vulgare x Н.bulbosum и последующей эмбриокульту- ры in vitro с применением холодовой предобработки зародышей in vivo в течение 12-14 дней (опыт) и без нее (контроль) приведены в табл.2.

Вли ние холодовой предобработки зародышей In vivo (экспозици 12-14 дней) на выход гаплоидов in vitro приведено в табл.3.

Таким образом, холодова предобработка зародышей in vivo при 10°С в течение 12-14 дней до эксплантации на питательную среду существенно повышает частоту полученных в эмбриокультуре гаплоидов чмен (см. табл. 1 и 3). Процент гаплоидов от

числа опыленных цветков в зависимости от генотипа исходного гибрида в опыте варьирует от 17,9 до 30,0 (см. табл. 3). В контроле этот показатель находитс в пределах 7,116 ,5. Выход гаплоидных растений от числа зав завшихс зерновок в опытных вариантах составл ет 21,5-44,3%, в контрольных - 7,8-26,4%. Процент гаплоидных регенерантов от числа высаженных зародышей в опыте колеблетс от 53.0 до 86,2. тогда как в контроле он гораздо ниже и находитс в пределах 35,4-57,6. В среднем по всем исходным гибридам Fi H. vulgare частота полученных в эмбриокультуре гаплоидов при

использовании предложенного способа возрастает на 9,4% от числа опыленных цветков, 11,7% от числа зав завшихс зерновок и 21,4% от числа высаженных зародышей . Разность опытных и контрольных

Claims

1.Способ получени гаплоидов чмен , включающий опыление исходных материнских растений Hordeum vulgare пыльцой гаплопродюсера Hordeum bulbosum, обработку опыленных колосьев гибберемовой кислотой, эксплантацию зародышей на питательную среду и культивирование их in

vitro с получением гаплоидных регенерантов , отличающийс тем, что, с целью повышени частоты гаплоидных регенерантов в эмбриокультуре in vitro, растени Hordeum vulgare, опыленные пыльцой

Hordeum bulbosum, перед эксплантацией зародышей подвергают холодовой предобработке при 10°С.

2.Способ по п1, отличающийс тем, что продолжительность холодовой предобработки составл ет 12-14 дн.

3.Способ по п. 1,отличающийс тем, что холодова предобработка проводитс через 8-9 дн после опылени .

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3