SU1659472A1

SU1659472A1 - Питательна среда дл выращивани микробактерий

Info

Publication number: SU1659472A1
Application number: SU884647115A
Authority: SU
Inventors: Галина Ивановна Устинова; Владимир Васильевич Корягин; Валентина Ивановна Косенко; Николай Павлович Овдиенко; Ярослав Яковлевич Шкоп; Галина Петровна Головкина; Ольга Ивановна Валихова
Original assignee: Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Экспериментальной Ветеринарии Им.Я.Р.Коваленко
Priority date: 1988-12-24
Filing date: 1988-12-24
Publication date: 1991-06-30

Abstract

Изобретение относитс к области биотехнологии и может быть использовано дл культивировани возбудител туберкулеза. Целью изобретени вл етс повышение выхода бактериальной массы. Дл этого в качестве основы среды используют фермен- толизат дрожжей рода Candida и в состав среды дополнительно ввод т стимул тор роста - лизат галобактерий. Выращивание культур провод т при 37&deg;С в течение 52-60 дней. Выход бактериальной массы при этом составил 32,4-42,4 г/л. 3 табл.

Description

Изобретение относитс к области ветеринарной микробиологии, в частности к получению питательных сред.

Целью изобретени вл етс повышение выхода бактериальной массы и сокращение сроков культивировани .

П р и м е р 1. Питательную среду дл культивировани микобактерий готов т следующим образом (из расчета в г на 1 л). Берут навески, г/л: аммони лимоннокислого двузамещенного 1,0-6,0; кали фосфорнокислого двузамещенного 3,0-10.0; лимонной кислоты 4,0-10,0; магни сернокислого 0,3-1,0; железа сернокислого 0,02- 0,15; цинка сернокислого 0,1-0,5, раствор ют в 200-300 см3 дистиллированной воды, добавл ют 31,8-106,2 г глицерина . Далее берут навеску ферментолизата 5,0-25,0 г, заливают дистиллированной водой (200 см9), подогревают на вод ной бане при посто нном помешивании до полного его растворени .

Лизат галобактерий готов т следующим образом. Берут 1-5 ч. биомассы галобактерий , 15-25 ч. физиологического раствора и гомогенизируют 15-20 мин, слой пены удал ют .

Растворы ингредиентов и ферментоли- затов смешивают, довод т дистиллированной водой до 1000 см , подщелачивают 10%-ным раствором аммиака до рН 7,0-7,4, фильтруют через бумажный фильтр, добавл ют 1-10 см лизата галобактерий, разливают и стерилизуют текучим паром в течение 20-30 мин.

П р и м е р 2. Питательную среду готов т согласно примеру 1.

Дл приготовлени 1 л питательной среды берут, г: ферментолиэат 5,0; аммоний лимоннокислый двузамещенный 1,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 3,0; лимонную кислоту 4,0; магний сернокислый 0,3; железо сернокислое 0,02; цинк сернокислый 0,1; глицерин 31,8; лизат галобактесо

С

а с

о

vj

к:

рий 0,003, дистиллированную воду - до 1 л, Раствор ют, довод т рН до 7,2, разливают по колбам и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин. Посев микобактерий провод т по общеприн той методике. Выращивают культуры в термостате при 37°С в течение 60 дней.

Выход бактериальной массы дл разных видов микробактерий представлен в табл. 1-3.

Выход бактериальных клеток михобак- терий возбудител туберкулеза бычьего (штамм 8), человеческого (штамм 192) и птичьего (штамм 780) видов с 1 л питательной среды составил соответственно 32,4; 31,7 и 36,5 г (см. табл. 1).

Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых микобактерий (штамм 18023) и атипичных микобактерий (штамм fortuitum) представлен соответственно в табл. 2 и 3 и составл ет 35,3 и 34,8 г с 1 л питательной среды. При осуществлении выращивани по прототипу выход биомассы составл ет 13 г/л АСВ.

П р и м е р 3. Культуру микобактерий возбудител туберкулеза выращивают в термостате при 37°С на питательной среде следующего состава, г/л: ферментопмзат 20,0; аммоний лимоннокислый двузамещеи- ный 4,0; калий фосфорнокислый, двузаме- щенный 6,0; лимонна кислота 6,0; магний сернокислый 0,6; железо сернокислое 0,08; цинк сернокислый 0,3; глицерин 53,1; лизат галобактерий 0,015; дистиллированна вода-до 1 л, рН 7.4.

Выращивают культуры в термостате при 37°С в течение 55 дней.

Выход биомассы микобактерий возбудител туберкулеза бычьего, человеческого и птичьего видов представлен в таблице 1 и составл ет соответственно 41,2, 40,9 и 41,6 г/л АСВ. Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых и атипичных микобактерий представлен соответственно в таблицах 2 к 3 и составл ет 40,4 и 39,5 г/л АСВ.

При осуществлении выращивани по прототипу выход биомассы составл ет 13 г/л АСВ.

П р и м е р 4. Возбудитель туберкулеза бычьего вида выращивают в колбах на питательной среде следующего состава, г/л: ферментолизат 25,0; аммоний лимоннокислый двузамещенный 6,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 10,0; лимонна

кислота 10,0; магний сернокислый 1,0; железо сернокислое 0,15; цинк сернокислый 0,5; глицерин 106,2; лизат галобактерийО,03; дистиллированна вода -до 1 л, рН 7,0. Выращивание культуры в термостате

при 37°С в течение 55 дней.

Выход бакмассы микобактерий возбудител туберкулеза бычьего, человеческого и птичьего видов по данным табл. 1 состав- л ет соответственно 42,4; 41,8 и 43,2 г/л АСВ.

Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых и атипичных микобактерий составл ет соответственно 44,1 (см. табл. 2) и 42,6 г/л АСВ (см. табл. 3).

Claims

Таким образом, на предложенной среде выход микобактерий выше в 3-3,5 раза по сравнению с контролем. Согласно предло- женному способу можно культивировать микобактерий с приростом бактериальных клеток на 30-300% и заменить аспарагин на ферментолизат дрожжей рода Candida. Формула изобретени Питательна среда дл выращивани микобактерий, содержаща источник органического азота, мггний сернокислый, соли цинка, железа и лимонной кислоты, калий фосфорнокислый двузамещенный, лимонную кислоту, глицерин, дистиллированную воду, отличающа с тем, что, с целью повышени выхода бактериальной массы и сокращени сроков культивировани , в качестве источника азота используют ферментолизат дрожжей рода Candida и лизат галобактерий, в качестве солей цинка, железа и лимонной кислоты - цинк сернокислый, железо сернокислое и аммоний лимоннокислый двузамещенный при следующем количественном соотношений компонентов, г/л:

Ферментолизат дрожжей рода Candida5,0-25,0

Лизат галобактерий0,003-0,03

Аммоний лимоннокислый даузамещенный1,0-6,0

Калий фосфорнокислый двузамещенный3,0-10,0

Лимонна кислота4,0-10,0

Магний сернокислый0,3-1,0

Железо сернокислое0,02-0,15

Цмнк сернокислый0,1-0,5

Глицерин31,8-106,2

Дистиллированна водаДо 1 л

рН 7,0-7,4

Выход бактериальных клеток микобактерий возбудител туберкулеза бычьего (штамм 8), человеческого (штамм 192), птичьего (штамм 780) видов с 1 л питательной среды (г абсолютного сухого вещества, АСВ)

ел

Аспарагин

Ферментализат

Аммоний лимоннокислый щенный

Калий фосфорнокислый мещенный

Лимонна кислота

Магний сернокислый

Железо сернокислое

Цинк сернокислый

Глицерин

Лизат галобактерий

РН

Выход бакмассы в 1 л

5,0 20,0 20,0 20,0 25,0 25,0 25,0

1,0

3,0 А,О 0,3 0,02 0,1

31,8 0,03 7,2

36,5

4,0

6,0

6,0

0,6

0,08

0,3 53,1

0,015

V.3 41,2

4,0

6,0

6,0

0,6

0,08

0,3 53,1

0,015

7,3 40,9

4,0

6,0

6,0

0,6

0,08

0,3 53,1

0,015

7,3 41,6

6,0 6,0

10,0 10,0 1,0 0,15 0,5 106,2 0,03 7,4 42,4

10,0 10,0 1,0 0,15 0,5 106,2 0,03 7,4 41,8

6,0

10,0 10,0 1,0 0,15 0,5 11)6,2 0,03 7,4 43-, 2

е ел

(О

-Ь.

-J ю

OS

Таблица 2

Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых микобактерий (штамм 18023) с 1 л питательной среды (г АСВ)

Таблица 3

Выход бактериальных клеток атипичных микобактеркй (fortiiitum) с 1 питательной среды (в г АСВ)