SU1656454A1 - Способ определени токсичности водорастворимых веществ - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к микробиологическим исследовани м и может быть использовано дл  экспрессной сравнительной токсикологической характеристики водорастворимых веществ и препаратов, а также на промышленных предпри ти х дл  биологического контрол  за токсичными водорастворимыми веществами Цель изобретени  - повышение чувствительности способа и сокращение времени определени  Дл  этого культуру инфузории Tetrahymena pynformis выдерживают с добавленным исследуемым веществом при температуре культивировани , воздействуют из нее сублетальной температурой и подсчитывают количестоо погибших клеток. Стро т график зависимости процента погибших клеток от концентрации исследуемого вещества 2 табл. Ё

Description

Изобретение относитс  к микробиологическим исследовани м и токсикологии и может быть использовано при сравнительной токсикологической характеристике водорастворимых веществ и препаратов, а также на промышленных предпри ти х дл  биологического контрол  за токсичными водорастворимыми веществами.

Цель изобретени  - повышение чувствительности способа и сокращение времени определени 

Поставленна  цель достигаетс  тем, что при осуществлении способа определени  токсичности водорастворимых веществ путем экспозиции исследуемого вещества с инфузори ми Fetrahymena pyriformis подсчет количества погибших клеток осуществл ют после воздействи  на культуру сублетальной температуры

Способ осуществл ют следующим образом

Суточную культуру инфузорий Tetrahymena pyriformis культивированную в глюкоэно-дрожжевой среде (рН 7,1) и содержащую определенное количество особей в 1 мл, разливаю в пробирки. В эти же пробирки добавл ют исследуемое вещество в нескольких концентраци х (максимальна  из концентраций, вносимых в культуру, допжна не вызывать гибели инфузорий после тридцатиминутного контакта с веществом при температуре культивировани , но вызывать их гибель, близкую к 100%, после п тиминутного воздействи  при сублетальной температуре) Культуру с

О СП

о

-N СЛ i.

добавленным исследуемым веществом выдерживают 30 мин в термостате при температуре культивировани , после этого пробирки помещают на 5 мин в термостат с сублетальной температурой и провод т подсчет количества погибших клеток. Далее высчитывают процент погибших клеток от начальной плотности культуры. Исследовав таким образом р д концентраций веществ, стро т график зависимости процента погиб- ших клеток от концентрации на пробит-ло- гарифмической сетке и графически наход т концентрацию вещества, вызывающую 50%-ную гибель инфузорий. Данные занос т в таблицу дл  сравнени  степени токсич- ности различных веществ путем сравнени  концентраций, вызывающих 50%-ную гибель клеток.

Пример 1. Суточную культуру инфузорий Tetrahymena pyriformis, культивиро- ванную в глюкозно-дрожжевой среде (0,1 г дрожжевого экстракта, 1,5 г глюкозы, 0,1 г NaCI, 100 мл дистиллированной воды, рН 7,1) при 27°С и содержащую 69 тыс. особей в 1 мл, в количестве 1 мл помещают в 5 пробирок и добавл ют исследуемое вещество - 1,2-дихлорэтан в п ти концентраци х: 0,6 мг/мл, 0,65 мг/мл, 0,7 мг/мл, 0,91 мг/мл и 1,3 мг/мл (по предварительным опытам концентраци  1,2-дихлорэта- на 1,3 мг/мл не вызывает гибели инфузорий после 30-ти минутного контакта при 27°С, а при 38°С в течение 5 мин наблюдаетс  почти 100%-на  гибель инфузорий ). Пробирки помещают в термостат и инкубируют в течение 30 мин при 27°С. После этого пробирки помещают в термостат при 38°С на 5 мин. Затем провод т подсчет количества погибших клеток в камере Гор - ева и высчитывают процент погибших клеток от начальной плотности культуры. Так, после воздействи  сублетальной температуры в пробирке с концентрацией 1,2-дихло- рэтанаО,60мг/мл погибло 15594 особей, что соответственно от первоначальной плотности составл ет 22,6%. Аналогично определ ют процент погибших инфузорий при других концентраци х.

Данные по проведенным экспериментам приведены в табл. 1.

Получают п ть точек, по которым методом пробит-анализа графическим путем наход т концентрацию 1,2-дихлорэтана, вызывающую 50%-ную гибель инфузорий - 0,62 мг/мл.

Пример 2. Постановку опыта и подсчеты провод т также, как в примере 1, но исследуют другие вещества - диметил- формамид и ацетонитрил.

Результаты проведенных экспериментов представлены в табл. 2.

Claims (1)

1. Формула изобретени  Способ определени  токсичности водорастворимых веществ путем инкубации исследуемого вещества с инфузорией и подсчета количества погибших клеток, о т- личающийс  тем, что, с целью повышени  чувствительности и сокращени  времени определени , перед подсчетом на инфузорию воздействуютеублетальнойтемпературой .

   Таблица 1

   Таблица 2

   Определено графическим путем методом пробит-анализа.

   Продолжение табл. 2