SU1654740A1

SU1654740A1 - Method for determining degree of biological infectiousness of vine materials

Info

Publication number: SU1654740A1
Application number: SU884611679A
Authority: SU
Inventors: Алла Николаевна Постная; Алла Николаевна Матущак
Original assignee: Научно-Производственное Объединение По Виноградству "Виерул"
Priority date: 1988-10-28
Filing date: 1988-10-28
Publication date: 1991-06-07

Abstract

Изобретение относитс к пищевой промышленности , в частности к винодельческой , и касаетс идентификации происхождени пороков и повышени достоверности определени поражени молочнокислыми бактери ми соков и виноматериалов по готовому продукту Цель изобретени - повышение точности определени биозараженности виноматериала молочнокислыми бактери ми рода Lactobaclllus. Это достигаетс тем, что оценку провод т по концентрации орнитина при ее превышении 12 ± 2 мг/дм в исследуемом продукте. 1 табл.The invention relates to the food industry, in particular to the wine industry, and relates to identifying the origin of defects and increasing the reliability of determining damage to lactic acid bacteria of juices and wine materials on the finished product. The purpose of the invention is to improve the accuracy of determination of the biofeatability of wine materials by the lactic acid bacteria of the genus Lactobaclllus. This is achieved by the fact that the assessment is carried out on the concentration of ornithine when it is exceeded 12 ± 2 mg / dm in the test product. 1 tab.

Description

слcl

СWITH

Изобретение относитс к пищевой промышленности , в частности к винодельческой , и касаетс идентификации происхождени пороков и повышени достоверности определени поражени молочнокислыми бактери ми рода Lactobacillus соков и вино- материалов по готовому продукту.The invention relates to the food industry, in particular to the wine industry, and concerns the identification of the origin of defects and an increase in the reliability of determining the damage to the lactic acid bacteria of the genus Lactobacillus juice and wine materials on the finished product.

Целью изобретени вл етс повышение точности определени биозараженности виноматериалов молочнокислыми бактери ми рода Lactobacillus.The aim of the invention is to improve the accuracy of determination of the biodegradation of wine materials by the lactic acid bacteria of the genus Lactobacillus.

Из средней пробы сока, виноматериала и вина с мышиным тоном выдел ют с последующим определением качественного и количественного состава свободные аминокислоты и по концентрации орнитина суд т о пути возникновени мышиного тона в результате жизнеде тельности молочнокислых бактерий рода Lactobacillus. Среднюю пробу образца в количестве 5 см нанос т на колонну с смолой КУ-2 в Н -форме. Ор- нитин элюируют градиентным растворомFrom the average sample of juice, wine material and wine with murine tone, free amino acids are determined followed by the qualitative and quantitative composition, and the ornithine concentration determines the origin of the murine tone as a result of the lactic acid bacteria of the genus Lactobacillus. An average sample of 5 cm is applied to a column with KU-2 resin in H-form. Ornithine is eluted with a gradient solution.

аммиака 2М 100 см3 и 4н 200см3 Объединенный элюат упаривают досуха, перераствор ют в бидистиллированной воде и вновь упаривают досуха.ammonia 2M 100 cm3 and 4N 200 cm3. The combined eluate is evaporated to dryness, redissolved in bidistilled water and again evaporated to dryness.

По концентрации орнитина суд т о причине возникновени порока: до 12 ± ± 2 мг/дм - окислительно-восстановительный , выше 12 ± 2 мг/дм3- микробиаль- ный путь образовани пороков.By the concentration of ornithine, the reason for the occurrence of the defect is judged: up to 12 ± 2 mg / dm - redox, above 12 ± 2 mg / dm3 - the microbial path of the formation of defects.

Пример 1. Виноград белых сортов перерабатывают на дробилке-гребнеотде- лителе, полученную мезгу прессуют. Отбирают сусло-самотек и первое давление. Сусло осветл ют отстаиванием, охлаждают и после сн ти с осадка спиртуют дл получени спиртованного сока крепостью 16 об.% спирта. Спиртованный сок хран т при 4-8°С в течение года. В соке при хранении образуетс мышиный тон. Отбирают среднюю пробу, которую раздел ют на две части. Одну часть пастеризуют и фильтруютExample 1. White grape varieties are processed in a crusher-crusher, and the resulting pulp is pressed. Select the wort drift and the first pressure. The wort is clarified by settling, cooled and, after removal from the precipitate, is alcoholized to produce alcoholized juice with a strength of 16% by volume of alcohol. The alcoholized juice is stored at 4-8 ° C for a year. A mouse tone is formed in the juice during storage. An average sample is taken which is divided into two parts. One part is pasteurized and filtered.

о слabout cl

N vjN vj

&&

через обеспложивающий фильтр, получают стерильную пробу образца. По 10 см3 исходной и стерильной пробы спиртованного сусла центрифугируют 15 мин при 3 тыс. об./мин. Центрифугат удал ют, а осадок микроскопируют. В исходном образце после центрифугировани определ ют в поле зрени скопление молочнокислых бактерий рода Lactobaclllus в виде тонких палочек, расположенных отдельно и в виде цепочек. В стерильной пробе не обнаруживают болезнетворные бактерии. Дл провоцировани роста бактерий провод т посев образца на питательную среду с последующим тер- мостатированием при 30°С в течение 4-6 сут. После микроскопировани стерильной пробы молочнокислые бактерии не обнаружены .through the filter filter, a sterile sample is obtained. 10 cm3 of the initial and sterile samples of the alcoholized wort are centrifuged for 15 minutes at 3 thousand rpm. The centrifugal was removed and the precipitate was microscopically. In the original sample after centrifugation, in the field of vision, the accumulation of lactic acid bacteria of the genus Lactobaclllus in the form of thin rods, arranged separately and in the form of chains, is determined. In the sterile sample does not detect the pathogenic bacteria. To induce the growth of bacteria, the sample is sown on a nutrient medium, followed by thermostatisation at 30 ° C for 4-6 days. After microscopy of the sterile sample, no lactic acid bacteria were detected.

По 5 см3 исходной и стерильной средней пробы спиртованного сока нанос т на колонки со смолой КУ-2 в Н -форме совместно с внутренним стандартом - норлейци- ном в количестве 0,5 см при концентрации 0,25 М и промывают дистиллированной водой объемом 300 см3 дл удалени редуци- рующих веществ. Орнитин в составе свободных аминокислот элюируют градиентным раствором аммиака в концентрации 2 н. 100 см3 и 4 н. 200 см3. Объединенный аммиачный элюат упаривают до сухого ос- татка, перераствор ют в 300 см3 бидистил- лированной воды и вновь упаривают до сухого остатка. Операцию перерастворени сухого остатка свободных аминокислот и упаривани в воде повтор ют дважды, а за- тем его развод т в 5 см3 цитратно-литиевого буферного раствора с рН 2,2.5 cm3 of the initial and sterile average sample of alcoholized juice are applied to the columns with KU-2 resin in H-form together with the internal standard - Norleucine in an amount of 0.5 cm at a concentration of 0.25 M and washed with distilled water of 300 cm3 to remove reducing agents. Ornithine in the composition of free amino acids elute with a gradient solution of ammonia at a concentration of 2 n. 100 cm3 and 4 n. 200 cm3. The combined ammonium eluate is evaporated to dryness, redissolved in 300 cm3 of double distilled water and again evaporated to dryness. The operation of reconstitution of the free amino acid solids and evaporation in water is repeated twice, and then diluted in 5 cm3 of lithium-citrate buffer solution with a pH of 2.2.

Трехкратное упаривание образца требуетс дл максимального удалени аммиака , который мешает определению орнитина. В пор дке разделени в режиме свободных аминокислот на аминокислотном анализаторе орнитин элюируют сразу же за аммиаком . Анализ свободных аминокислот провод т на аминокислотном анализаторе. Разделение свободных аминокислот осуществл ют на ионите Ostlon LGFA. Элюирова- ние орнитина провод т буферным раствором рН 5,0 при скорости буферного потока 14 смэ/ч и нингидринового реактива 12 см3/ч при температуре колонки 58°С. Определ ют орнитин на 152-й минуте анализа. Количественное определение орнитина провод т по величине оптической плотности при 520 нм, которую перевод т в соот- ветствующую концентрацию (мг/дм3) по калибровочному графику.Threefold evaporation of the sample is required to maximize the removal of ammonia, which interferes with the determination of ornithine. In the order of separation in the free amino acid regime on an amino acid analyzer, ornithine is eluted immediately after ammonia. Free amino acid analysis is performed on an amino acid analyzer. The separation of free amino acids is carried out on an Ostlon LGFA ion exchanger. The elution of ornithine was carried out with a buffer solution of pH 5.0 at a buffer flow rate of 14 cm / h and a ninhydrin reagent of 12 cm3 / h at a column temperature of 58 ° C. Ornithine is determined at 152 minutes of analysis. Quantitative determination of ornithine is carried out by the value of optical density at 520 nm, which is converted to the corresponding concentration (mg / dm3) according to the calibration graph.

Качественный и количественный состав свободных аминокислот исходного и стерильного спиртованного сока приведен в таблице.The qualitative and quantitative composition of free amino acids of the source and sterile alcoholized juice is given in the table.

Пастеризаци образца не вли ет на качественный и количественный состав свободных аминокислот. Концентраци орчи- тина в обоих вариантах опытов в пределах 40 мг/дм , что выше нормального содержани его в здоровом соке (12 ± 2 мг/дм. В этом соке были обнаружены молочнокислые бактерии рода Lactobacltlus. В результате их жизнеде тельности произошло увеличение орнитина ц образовалс мышиный тон. Стерильный образец не дал роста микроорганизмов .Sample pasteurisation does not affect the qualitative and quantitative composition of free amino acids. The concentration of orchitin in both variants of experiments within 40 mg / dm, which is higher than its normal content in healthy juice (12 ± 2 mg / dm. In this juice, lactic acid bacteria of the genus Lactobacltlus were detected. As a result of their vital activity, mouse tone formed. A sterile specimen prevented the growth of microorganisms.

П р и м е р 2. Виноград сорта Траминер перерабатывают на дробилке-гребнеотде- лителе, полученную мезгу прессуют и отбирают сусло-самотек и первое давление. Сусло осветл ют отстаиванием при охлаждении с добавлением 2 г/дал бентонитовой суспензии. Осветление провод т в течение 18-20 ч и снимают с осадка. Осветленный сок креп т до концентрации 16 об.% этиловым спиртом и хран т в течение года. В соке образовалс мышиный ток. Из образца отбирают среднюю пробу, которую дел т на две части. Одну часть пробы пастеризуют и фильтруют через обеспложивающий фильтр, получают стерильную пробу образца . Исходную и стерильную пробы образца готов т дл микроскопировани и микроскопируют . Болезнетворные микроорганизмы в обеих пробах образца не обнаружены. Дл провоцировани роста бактерий провод т посев проб на питательный раствор. Пробы выдерживают в термостате при 30°С в течение 4-6 сут. По истечении этого времени в пробах образца при микроскопиро- вании молочнокислые бактерии рода Lactobacillus не обнаружены. Они не размножились , т.е. образец здоровый.PRI mme R 2. Traminer grapes are processed in a crusher-crusher, the resulting pulp is compressed and the gravity wort is taken and the first pressure is taken. The wort is clarified by settling on cooling with the addition of 2 g / dal of the bentonite suspension. The clarification is carried out for 18-20 hours and removed from the sediment. The clarified juice is fixed to a concentration of 16 vol.% Ethyl alcohol and stored for a year. In the juice formed mouse current. An average sample is taken from the sample and divided into two parts. One part of the sample is pasteurized and filtered through a filter to provide a sterile sample. The initial and sterile specimens are prepared for microscopy and microscopically. Pathogens were not found in both samples. To induce bacterial growth, nutrient solution samples are seeded. Samples incubated in a thermostat at 30 ° C for 4-6 days. After this time, lactic acid bacteria of the genus Lactobacillus were not detected in samples of the sample during microscopy. They did not multiply, i.e. the sample is healthy.

Определение орнитина в исходном и пастеризованном спиртованном соке Траминер провод т следующим образом. По 5 см каждой пробы образца совместно с внутренним стандартом - 0,25 М раствором нор- лейцина в количестве 0,5 см нанос т на колонки со смолой КУ-2 в Н+-форме и промывают 300 см3 бидистиллированной воды дл удалени редуцирующих веществ. Элю- ирование орнитина в составе свободных аминокислот осуществл ют градиентным раствором: 100 см 2 н. и 200 см 4 н. амми- ка. Аммиачный элюат упаривают до сухого остатка, который перераствор ют в бидистиллированной воде и вновь упаривают. Операцию перерастворени сухого остатка в бидистиллированной воде и упаривани повтор ют дважды. Сухой остаток развод т в 5 см3 цитратно-литиевого буферного раствора при рН 2,2. Дл максимального удалени аммиака провод т трехкратное упаривание элюата. Аммиак мешает определению орнитина. Уменьшение содержани аммиака увеличивает степень его разделе- ни с орнитином. Количественное определение орнитина провод т на аминокислотном анализаторе. Разделение свободных аминокислот осуществл ют на ионите Ostion LGFA. Элюирование орнитина прохо- дит цитратно-литиевым буфером рН 5,0 при скорости буферного потока 14 см3/ч и нин- гидринового реактива 12 см /ч при температуре колонки 58°С. Элюируетс орнитин на 152-й минуте анализа. Концентрацию ор- нитина определ ют по величине оптической плотности при 520 нм, которую перевод т соответствующую концентрацию (мг/дм3) по калибровочному графику.The determination of ornithine in the original and pasteurized alcoholized Traminer juice is carried out as follows. Each sample of the sample, together with the internal standard — 0.25 M solution of norwayucine in an amount of 0.5 cm, is applied to the columns with KU-2 resin in H + form and washed with 300 cm3 of double distilled water to remove the reducing substances. The elution of ornithine in the composition of free amino acids is carried out with a gradient solution: 100 cm 2 n. and 200 cm 4 n. ammonia. The ammonia eluate is evaporated to a dry residue, which is redissolved in bidistilled water and again evaporated. The operation of reconstitution of the dry residue in bidistilled water and evaporation is repeated twice. The dry residue is diluted in 5 cm3 of lithium citrate buffer solution at pH 2.2. To maximize the removal of ammonia, the eluate was evaporated three times. Ammonia interferes with the determination of ornithine. A decrease in ammonia increases the degree of its separation with ornithine. Quantitative determination of ornithine is carried out on an amino acid analyzer. The separation of free amino acids is carried out on an Ostion LGFA ion exchanger. The elution of ornithine passes through a citrate-lithium buffer pH 5.0 at a buffer flow rate of 14 cm3 / h and a ninhydrin reagent at 12 cm / h at a column temperature of 58 ° C. Ornithine is eluted at 152 minutes of analysis. The concentration of ornithine is determined by the magnitude of the optical density at 520 nm, which is translated by the corresponding concentration (mg / dm3) according to the calibration graph.

По данным качественного и количест- венного состава свободных аминокислот исходной и стерильной пробы образца спиртованного сока сорта Траминер приведена концентраци орнитина в исходном и стерильном спиртованном соке практиче- ски одинакова и не превышает 10 мг/дм3. Это позвол ет сделать вывод: мышиный тон образовалс в этом случае, только в результате окислительно-восстановительных реакций . Концентраци орнитина в этом образце не превышает его критического содержани дл виноградной годы.According to the qualitative and quantitative composition of free amino acids of the initial and sterile sample of a sample of alcoholized Traminer variety juice, the concentration of ornithine in the initial and sterile alcoholized juice is almost the same and does not exceed 10 mg / dm3. This leads to the conclusion: the mouse tone was formed in this case, only as a result of redox reactions. The ornithine concentration in this sample does not exceed its critical content for the grape years.

Предлагаемый способ позвол ет установить наличие молочнокислых бактерий, образующих мышиный тон в результате своей жизнеде тельности, и обладает специфичностью определени , объективностью а оценке больших партий виноматериалов и виноградного сока, возможностью контролировани сока и виноматериалов на наличие продуктов жизнеде тельности болезнетворных молочнокислых бактерий. Благодар высокой достоверности способа его можно использовать в качестве арбитражного метода в случае необходимости четкой идентификации причин возникновени мышиного тона.The proposed method makes it possible to establish the presence of lactic acid bacteria forming the mouse tone as a result of its viability, and has the specificity of determination, objectivity in the assessment of large quantities of wine materials and grape juice, and the ability to control juice and wine materials for the presence of life products of pathogenic lactic acid bacteria. Due to the high reliability of the method, it can be used as an arbitration method if it is necessary to clearly identify the causes of the mouse tone.

Claims

Claims The method of determining the degree of bio-infection of wine materials by the presence of an amino acid, characterized in that, in order to improve the accuracy of determining the bio-infection of the wine materials by the lactic acid bacteria of the Lactobaclllus genus, the presence of an amino acid is determined by the ornithine concentration in the product under study, exceeding 10-14 mg / dm3 .

Table continuation