SU1650051A1

SU1650051A1 - Способ получени растений - регенерантов пшеницы из пыльцы в культуре пыльников

Info

Publication number: SU1650051A1
Application number: SU884471647A
Authority: SU
Inventors: Валентина Юрьевна Горбунова; Гузель Радомесовна Кудоярова; Светлана Николаевна Надольская; Римма Анваровна Докичева; Наталья Германовна Кужлева
Original assignee: Институт Биологии Башкирского Филиала Ан Ссср
Priority date: 1988-08-15
Filing date: 1988-08-15
Publication date: 1991-05-23

Abstract

Изобретение относитс к биотехнологии , а именно к культивированию раститель- ных тканей и касаетс получени растений-регенерантов пшеницы из пыльцы . Целью изобретени вл етс повышение выхода регенерантов за счет увеличени выхода эмбриональных структур . Способ состоит в гом, что в питательную среду, на которой культивируют пыльники, внос т стимулирующее количество 2,4-Д, предварительно определенное по степени отрастани корешков семчн 6 табл

Description

Изобретение относитс k биотехнологии , а именно к получению растений из пыльцы в культуре изолированных пыльников ровой пшеницы дл ускоренного получени новых исходных форм и константных гибридных линий.

Целью изобретени вл етс повышение выхода регенерантов за счет увеличени выхода эмбриональных структур.

Способ состоит в том, что провод т выделение колосьев донорных растений, у которых влагалище предпоследнего листа расположено на центральной части колоса, обработку колосьев пониженной температурой , вычленение пыльников, культивирование их на питательной среде дл регенерации растений, при этом перед культивированием пыльников на питательной среде провод т определение дозы натриевой соли 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д), стимулирующей рост корешков сем н пшеницы с последующей добавкой соответствующего количества в питательную среду дл инициации эмбриоидов из пыльников в концентрации от 0,25 до 1,0 мг/л в зависимости от сорта, в низких концентраци х обладающей аукси- ноподобным типом действи .

Способ осуществл ют следующим образом .

Семена разных сортов проращивают в темноте на стекл нных плотиках при 27°С в течение 3 сут. Затем измер ют длину центрального корешка и перенос т проростки в чашки Петри по 10 шт в 15 мл раствора 2,4-Д в возрастающей концентрации от 0,1 до 12 мг/л и помещают в те же услови . Через два дн измер ют длину корн и определ ют степень ингибирова- ни или стимул ции роста корней под действием гербицида.

Сбор материала дл культивировани может проводитьс круглосуточно из открытого и закрытого грунта. Колось , у которых влагалище предпоследнего листа расположено в центральной части колоса, срезают

(Л

С

о с о о л

и став т в холодильник на 7-9 дней при температуре 4-5°С. Затем колось с листовой оберткой промывают в автоклавирован- ной дистиллированной воде, стерилизуют 70%-ным спиртом в течение 7 с, вновь промывают стерильной водой и продолжают стерилизацию 3%-ной перекисью водорода в течение 6 мин и дважды промывают дистиллированной водой. В стерильных услови х (в шкафах с ламинарным потоком стерильного воздуха) вычлен ют пыльники и помещают на поверхность агаризованной питательной среды дл инициации эмбриогенеза в биологические пробирки.

Среда I содержит минеральные соли, витамины по прописи № 10%-ный картофельный экстракт, (9%-ную сахарозу, 0,7%- ный агар и гормональные добавки в виде различных концентраций 2,4-Д (от 0,25 до 1 мг/л) в зависимости от культивируемых генотипов . Пробирки с образцами культивируют в темноте при температуре + 27°С.

Образовавшиес через 21-29 дней культивировани эмбриоиды пересаживают на среду II, способствующую регенерации растений . Результаты приведены в табл.1. Она не содержит 2,4-Д. В качестве гормональных добавок включаетс кинетин и индоли- луксусна кислота. Пробирки с эмбриоидами помещают на светоплощадку на 16-часовой фотопериод и при 10-12°С. Регенерировавшие при этих услови х растени высаживают в почву.

Пример 1. Определение чувствительности сорта Скала к различным концентраци м 2,4-Д и интенсивность эмбриоидогенеза на искусственных питательных средах с различной концентрацией 2,4-Д.

Чувствительность сорта к различным концентраци м 2,4-Д определ ют описанным способом. Затем вы сн ют стимулирующую зону. В питательную среду дл культивировани пыльников добавл ют соответствующую стимулирующей зоне дозу 2,4-Д, как гормон ауксинового типа действи .

Дл проверки изобретени пыльники сорта Скала культивируют и на альтернативной среде с содержанием 2,4-Д 1 мг на 1л среды. Полученные результаты представлены в табл.2.

Пример 2. Аналогичный эксперимент провод т дл линии 35 (Ини 66 х Кавказ). Полученные результаты приведены втабл.З.

Интенсивность эмбриоидогенеза выше на среде, содержащей стимулирующую дозу 2,4-Д.

Пример 3. Вы вл ют стимулирующие

дозы 2,4-Д дл сорта Саратовска 29 по той же методике, что и в примерах 1 и 2. Определение интенсивности эмбриоидогенеза провод т на искусственных питательных средах, различающихс по 2,4-Д. Максимальный выход эмбриоидов дл сорта Саратовска 29 наблюдают на среде, содержащей стимулирующую дозу 2,4-Д. Результаты приведены в табл.4.

В результате проведенных исследований вы влены следующие ингибирующие и стимулирующие эмбриоидогенез концентрации 2,4-Д дл различных сортов пшеницы . Результаты приведены в табл.5 и 6. Преимуществом изобретени вл ютс

возможность культивировани любых генотипов с целью получени эмбриоидов дл регенерации из них растений, идентичность растений-регенерантов и исходных форм, высокий выход эмбриоидов, быстрота процесса , занимающего от момента определени стимулирующей дозы 2,4-Д до образовани растений 45-90 дней, возможность круглогодичного проведени работ, предсказуемость и интерпретируемость

результатов эксперимента, многократное увеличение выхода эмбриоидов и растений по сравнению с прототипом.

Claims

Формула изобретени Способ получени растений-регенерантов пшеницы из пыльцы в культуре пыльников , включающий выделение колосьев донорных растений, у которых влагалище предпоследнего листа расположено на центральной части колоса, обработку колосьев

пониженной температурой, вычленение пыльников, культивирование их на питательной среде, получение эмбриоидов и пересадку на питательную среду дл регенерации растений, отличаю щийс тем, что, с целью повышени выхода регенерантов за счет увеличени выхода эмбриональных структур, перед культивированием пыльников на питательной среде предварительно определ ют количество натриевой соли дихлорфенилуксусной кислоты , оптимальное дл эмбриоидогенеза, по стимул ции роста корешков сем н, после чего соответствующее количество ее внос т в питательную среду в концентрации (0,25 1 ,0) мг/л в зависимости от сорта.

Таблица 1

Среда I

Ne модифицированна , мг/л

Картофельный эк

КМОз

Са(МОз)2 4Н2О

MoS04 7H20

(ЫНф SO4

NaHa РО4- НаО

КН2РО4

CaCl2 2H2O FeS04 7H2d Na2 ЕДТА«2Н20 CuS04 5H20

MnS04 H2O

KCI

ZnS04-7H20

Na2MoO/t 2H20

НзВОз

Kl

Тиамин

Аскорбинова кис

Пиридоксин

Никотинова кисл

Мезо-инозит

Сахароза

Агар

2,4-Д

Кинетин

Индолилуксусна

рН до автоклави

Среда I

Среда II

Гамборга-Эвелега ВБ модифицированна

0%-ный

1000

100

125

100

200

27,8 37,3

35

1,0

90000

7000

,1-1,0

2500

250 134 150

150

13,9

18,6

0,025

10

2,0

0,25

3,0

0,75

0,5

1.0

0.5

1,0

100

20000

6,1

0,2 0,2 6,1

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4

Таблица 5

Таблица 6